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[期刊] 华北农学报
[作者]
李丽 郑晓鹰 马连平
本文应用垂直板不连续系统的聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）法，分析了５个杂交一代种（佳粉一号、佳粉二号、佳粉十号、佳粉十五号、双抗二号）发芽种苗的五种同工酶（苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）、乙醇脱氢酶（ＡＤＨ）、磷酸葡萄糖变位酶（ＰＧＭ）、酯酶（ＥＳＴ）、异柠檬酸脱氢酶（ＩＤＨ））。发现５个杂交一代种中，３个杂交一代种与其双亲的苹果酸脱氢酶（ＭＤＨ）谱带有明显稳定的区别。两个杂交一代种与其双亲的酯酶（ＥＳＴ）谱带有区别。在此基础上，建立了用苹果酸脱氢酶电泳分析检测番茄一代杂交种纯度的技术，检测结果与田间鉴定结果基本一致。
关键词：
电泳,同功酶,纯度检测,番茄,F_1杂种
[期刊] 华北农学报
[作者]
张涛 陈建武 何力
为了了解尖裸鲤的生化遗传特性,丰富尖裸鲤种质资源研究的内容,通过配制不连续浓度聚丙烯酰胺凝胶,采用聚丙烯胺凝胶垂直板电泳对尖裸鲤5种组织(心脏、眼睛晶状体、肌肉、肝脏和肾脏)中的乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)进行了电泳。结果表明:所测样本鱼心脏、眼睛晶状体、肌肉、肝脏和肾脏中的LDH酶带数分别为:12～16条,17～18条,6～13条,6～10条和12～17条; MDH酶带数分别为3条,4条,3～5条,2条和4～7条。LDH在尖裸鲤厌氧器官(骨骼肌和肝脏)中表达的酶带数总体少于非厌氧器官(心脏和肾脏)。尖裸鲤的MDH分为上清液型(s-MDH)和线粒体型(mMDH)。尖裸鲤的LDH和MDH同工酶系统具有组织特异性,尖裸鲤相对较多的LDH酶带数可能与其独特的栖息环境和A亚基与B亚基的变异共同作用有关。本研究可从生化遗传角度为尖裸鲤的资源保护和利用提供一定理论依据。
[期刊] 华北农学报
[作者]
张涛 张林 周剑光 甘金华 何力
为了了解巨须裂腹鱼的生化遗传特性,丰富巨须裂腹鱼种质资源研究的内容,通过聚丙烯胺凝胶垂直板电泳对巨须裂腹鱼5种组织(心脏、眼睛晶状体、肌肉、肝脏和肾脏)中的乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)进行了电泳分析。结果表明:所测样本鱼心脏LDH酶带数为6～7条、眼睛晶状体LDH酶带数为6～10条、肌肉LDH酶带数为5～7条、肝脏LDH酶带数为8～11条和肾脏中的LDH酶带数为8～10条;LDH-C基因只在肝脏中特异性表达。心脏MDH酶带数为4～8条、眼睛晶状体MDH酶带数为2～4条、肌肉MDH酶带数为3～4条、肝脏MDH酶带数为4～5条和肾脏MDH酶带数为4～7条。5种组织中LDH在肝脏中表达的酶带数最多,肝脏MDH酶带着色最深,表达活性程度最强。巨须裂腹鱼的LDH和MDH同工酶系统具有组织特异性和个体差异性。组织特异性主要体现在LDH和MDH酶带数目和表达活性程度不同两方面,与各组织执行特定生理功能密切相关。巨须裂腹鱼同工酶个体差异性可能是其漫长的进化过程中为了能适应特殊生境的需要。研究结果可从生化遗传角度为巨须裂腹鱼制定种质标准和资源保护利用提供一定理论依据。
[期刊] 华北农学报
[作者]
李文爽 刘渊 常文锁 刘梦星 李喜焕
利用电子克隆技术获得大豆中的苹果酸脱氢酶基因cDNA序列,并对基因及其编码蛋白进行生物信息学分析和预测,为进一步克隆该基因、解决植物磷高效基因数量缺乏等问题提供依据。结果表明,大豆中的苹果酸脱氢酶基因(GmMDH1)cDNA序列长度为1 574 bp,开放阅读框1 230 bp,编码409个氨基酸残基;编码蛋白含有NAD bindingsite,Dimerization interface,Substrate binding site,MDH_glyoxysomal_mitochondrial结合位点和保守域,属于LDH_MDH_like Superfamily家族;亚细胞定位分析显示,编码蛋...
关键词：
磷高效基因 大豆 苹果酸脱氢酶 电子克隆
[期刊] 淡水渔业
[作者]
朱文漓 顾继锐 辜文博 吴江 刘汉元 徐恒
以实验室构建的草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道cDNA文库苹果酸脱氢酶(cMDH)EST序列为基础,采用末端快速扩增法(RACE),从健康雌性草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道细胞RNA中获得1391 bp的草鱼肠道cMDH的cDNA序列(NCBI登录号:EU569765)。结果显示:该序列包含62 bp的5′非编码区(5′-UTR),330 bp的3′非编码区(3′-UTR),典型加尾信号AATAA位于polyA起点上游16 bp。开放阅读框ORF长999 bp,共编码333个氨基酸,预测蛋白等电点为6.67,大小为36 kDa。多序列比...
[期刊] 华北农学报
[作者]
郑晓鹰 李丽 邢宝田
用 10种同工酶和蛋白质分析体系 ,分析了 7种重要蔬菜的 71个杂交种与其亲本之间的差异位点 ,以及这些差异位点用于杂交种纯度检测的可能性和存在的问题。试验表明 ,作物的不同种类 ,杂交种与亲本之间的亲缘关系以及作物种类的遗传多态性 ,都会影响同工酶差异位点产生的多寡 ,从而影响到这一技术是否能用于此种作物的纯度检测。分析了不同同工酶在不同蔬菜中的多态性以及在蔬菜种子纯度检测中的表现
关键词：
杂种纯度 蔬菜作物 位点 检测
[期刊] 西南农业学报
[作者]
许文花 文亦芾 马向丽 罗富成
根据苜蓿基因组ALDH基因和稳定表达Actin基因mRNA序列,设计3对引物。提取苜蓿总RNA,采用oligo dT18作为反转录引物,经反转录获得cDNA,通过优化反应体系及反应条件,建立以苜蓿Actin基因为内参对照,检测苜蓿乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)基因(a亚基和b亚基)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,苜蓿ALDH基因(a亚基和b亚基)和Actin基因扩增曲线和标准曲线显示其基因扩增效率均大于99.9%,熔解曲线分析表明3个基因的扩增产物为特异性单峰,其Tm分别为(86.4±0.2),(80.6±0.1)和(83.0±0.1)℃。该方...
关键词：
苜蓿 乙醛脱氢酶 实时荧光定量PCR
[期刊] 淡水渔业
[作者]
邹桂伟 郑蓓蓓 罗相忠 许映芳
采用聚丙烯酰胺水平平板电泳法研究了人工雌核发育鲢近交F1Ⅰ系、Ⅱ系、野生鲢、养殖鲢和雄鲤的肝、肾、心、眼和肌肉5种组织的酯酶(EST)和乳酸脱氢酶(LDH)。比较发现:(1)雌核发育鲢近交F1Ⅰ系、Ⅱ系和野生鲢的同工酶谱基本一致,雄鲤明显区别于鲢;(2)从酯酶图谱可发现,雌核发育近交鲢F1Ⅱ系的群体内有多态现象,肝、肾、肌肉的多态位点比例分别为0·6000、0·3333、0·5000,遗传杂合度分别为0·7485、0·6622、0·1139;(3)肝脏的乳酸脱氢酶中出现C带,且C带表现出多态性;(4)没有发现能区别鲢各群体的遗传标记。
[期刊] 华北农学报
[作者]
黄为平 郑晓鹰 邢宝田
利用等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，分析了大白菜、甘兰、绿菜花、甜椒中８个常用杂交种及其亲本（共２４份材料）的种子水溶蛋白电泳图谱。结果表明，等电聚焦电泳技术分辨率高，电泳条带多而且细，各材料蛋白谱带都在２０条左右，信息量大，利于进行深入细致的分析。８个杂交品种（Ｆ１）与其亲本间蛋白电泳图谱都有明显区别，并以此做为检验纯度的依据，进一步建立了这８个杂交种的纯度检验技术，同时在田间进行了验证性测定，二者鉴定结果相符，证明了本方法的可靠性。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
许雪芬 高杰 蒋忠荣 刘曦 赵永华 彭海云 泽丹多吉 郑玉才
本研究分析了昌台牦牛(Bos grunniens)乳酸脱氢酶-1(LDH1)的遗传多态性。实验提取了80头昌台牦牛基因组DNA,采用PCR-RFLP和新建立的等位基因特异PCR技术,分别对LDH1的H亚基编码基因ldhb的2个突变点进行检测。结果表明,昌台牦牛中检测到2种ldhb G896A基因型(AA、AG),未检测到GG型,其中形成LDH1快带的G等位基因频率为0.1125,且均为杂合型(AG);首次从基因水平上分析牦牛ldhb A689C基因型,观察到AA和AC共2种基因型,其中仅1头牦牛携带LDH1慢带相关的C等位基因,且为AC杂合型。试验结果表明,昌台牦牛ldhb存在与其他牦牛品种类...
关键词：
牦牛 乳酸脱氢酶 遗传多态性
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈家祥 贾洪强 王长康 佟建明
以肉仔鸡外周血自然杀伤(NK)细胞作为研究对象,探讨乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性中5个最为关键的影响因素,选用Yac-1淋巴瘤细胞作靶细胞.结果表明:效靶细胞比为15∶1,在含2%犊牛血清的RPMI 1640维持液中,效靶细胞于37℃、5%CO2条件下作用2 h,于37℃恒温条件下酶促反应10 min,检测波长为492 nm可获得满意结果;验证试验结果表明,优化的LDH释放法检测鸡外周血NK细胞活性的方法是可行的.
[期刊] 西南农业学报
[作者]
杨定清 谢永红 王棚 周娅 代晓航 孙力军
通过对比实验,以三氯甲烷、石油醚作检测番茄红素的提取剂,与提取剂甲苯作比较,结果差异性不显著,因此以较低毒性的三氯甲烷、石油醚代替目前国标法中强致癌试剂甲苯完全可行。
关键词：
番茄红素 检测 改进
[期刊] 华北农学报
[作者]
张国裕 张帆 姜立纲 翟伟卜 李海真
为利用SSR标记进行快速、准确的南瓜杂交种纯度分析,进行了南瓜EST-SSR标记的开发。从NCBI数据库下载1 457条南瓜属作物EST序列,去除冗余序列后进行SSR位点搜索,共得到215条含有SSR位点的EST序列。这些SSR位点包含111种重复基元,其中二核苷酸(62个,占28.84%)和三核苷酸(86个,占40.0%)重复类型占主导地位;重复基元中出现最多的是CT(21个,占9.77%),其次为TC(13个,占6.05%)和AAG(12个,占5.58%)。将215个SSR位点设计成EST-SSR引物后,随机合成了其中的43对引物。利用4份遗传背景差异较大的南瓜自交系对合成的43对引物进行...
关键词：
南瓜 EST-SSR 标记开发 杂种纯度
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郑玉才 赵兴波 周静 朴影 金素钰 贺庆华 洪键 李宁 吴常信
【目的】从乳酸脱氢酶(LDH)水平上探索牦牛(Bos grunniens)低氧适应性分子机制。【方法】利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析牦牛组织中LDH同工酶谱;用比色法测定牦牛、黄牛和水牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力;采用染料亲和层析和DEAE-Sephadex离子交换层析从牦牛心肌组织中纯化LDH1(由4个H亚基组成)的2种遗传变异体,进行酶学性质的比较。【结果】电泳方法检测发现牦牛LDH1存在2种遗传变异体,根据电泳迁移率分别命名为快型和慢型(LDH1-F和LDH1-S)。获得纯化的牦牛LDH1-F和LDH1-S,比活力分别为21.4U·mg-1蛋白和17.8U·mg-1蛋白,在SDS-P...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
任珊珊 赵艳玲 白华 蒋湘宁 盖颖
应用生物信息学方法从杨树基因组数据库中筛选出19个杨树肉桂醇脱氢酶基因,它们聚为3类。序列分析表明,杨树CAD基因家族主要通过全基因组加倍和串联复制的方式进行扩张。杨树和拟南芥CAD家族共6对旁系同源基因,在较强的净化选择压力下进化。19个基因在杨树不同组织中均有表达,表达量较高的是PoptrCAD17、PoptrCAD4、PoptrCAD10和PoptrCAD7,其他基因表达相对较少,相同亚类的CAD基因表达变化趋势接近。从毛白杨中克隆得到PoptrCAD4,体外表达的CAD4酶催化活性很强,具有明显的松柏醇底物偏好。
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