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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张燕子 马锋旺 张军科 梁东
以皇家嘎拉苹果叶片为材料提取总RNA,合成cDNA第一链后,先利用巢式PCR获得苹果脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因中间片段,再利用3-′RACE方法进一步获得3′末端核酸序列,共得到840 bp包含完整3′末端的DHAR基因cDNA片段,其序列与烟草、水稻、番茄中DHAR基因序列的同源性均大于70%,证明所克隆到的核苷酸片段确为苹果DHAR基因cDNA片段。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
牛歆雨 雷玉山 梁东 马锋旺 王西锐
克隆猕猴桃果实L-半乳糖内酯脱氢酶(GalLDH)和脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因,可为揭示猕猴桃高抗坏血酸(AsA)含量的分子机制奠定基础。研究以猕猴桃果实为材料提取总RNA,采用RT-PCR法,克隆出L-GalLDH基因的cDNA片段857 bp和DHAR基因的cDNA片段594 bp并测序,根据测序结果推测其氨基酸序列,并与刺梨、拟南芥、花椰菜、甘薯和草莓等植物的GalLDH基因和DHAR基因氨基酸序列进行亲缘分析。结果表明,猕猴桃GalLDH基因氨基酸序列和核苷酸序列与刺梨的相似性高达88%,其在同源基因进化关系树中单独聚为一类;DHAR基因氨基酸序列和核苷酸序列与苹果的相似性高达...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
马凌波 张凤英 马春艳 王素娟
利用细胞质抗坏血酸过氧化物酶(APX)基因部分片段为探针,从条斑紫菜(Porhyrayezoensis)叶状体的cDNA文库中筛选出1种新型的编码APX的全长cDNA克隆。该克隆开放阅读框编码242个氨基酸,与高等植物已知的胞质APX序列相似,同时具有两个特征性的保守区域。推导的氨基酸序列具有与在一种单细胞红藻(Galdieriapartite)中发现的APX B相似的杂交类型结构,这种结构可能是红藻或者非绿色光合生物的APX的重要特征。该cDNA克隆编码区G+C含量达到63 7%,其中密码子的第3位G+C含量高达88 4%。本实验得到的抗坏血酸过氧化物酶基因的cDNA序列已登录到GenBan...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
肖妮娜 马锋旺 张军科 梁东
L-半乳糖脱氢酶(L-Galactose dehydrogenase,GalDH)是维生素C合成的L-半乳糖途径中,催化L-半乳糖生成L-半乳糖内酯的关键酶。根据GenBank中登录的的GalDH cDNA序列设计1对扩增引物,以嘎拉苹果叶片为材料,采用RT-PCR法扩增出GalDH cDNA全长。将获得的基因片段克隆到pMD18-T载体上,转入大肠杆菌DH5α筛选阳性克隆,经酶切和PCR鉴定,并对插入片段进行序列分析,结果表明,本试验获得的cDNA片段长为1 111 bp,是苹果GalDH cDNA全长。
[期刊] 华北农学报
[作者]
张安 曹清河 周志林 赵冬兰 逄洪波 唐君
为了从甘薯野生资源中获取抗逆基因，提取Ｉｐｏｍｏｅａ ｔｒＩｆＩｄａ组培苗总ｒＮａ，经反转录获得第一链ｃ ｄＮａ，使用特异引物进行ｐｃｒ扩增，获得了Ｉ．ｔｒＩｆＩｄａ抗坏血酸过氧化物酶编码区序列，并进行生物信息学分析以及组织特异性表达研究。经测序表明，所获得的序列长约７６９ ｂｐ，包含７５３ ｂｐ完整的开放阅读框；生物信息学分析结果表明，此序列编码２５０个氨基酸，蛋白大小约为２７．６ ｋ ｄａ，等电点为５．４２，有大范围亲水区，推测在细胞质中起到抗氧化作用；进化发育系统分析表明，Ｉｔ ａｐＸ和Ｉｂ ａｐＸ最为接近；组织特异性表达分析表明，Ｉｔ ａｐＸ在各组织中均有表达。Ｉ．ｔｒＩｆＩｄａ抗坏血．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
张安 曹清河 周志林 赵冬兰 逄洪波 唐君
为了从甘薯野生资源中获取抗逆基因,提取Ipomoea trifida组培苗总RNA,经反转录获得第一链c DNA,使用特异引物进行PCR扩增,获得了I.trifida抗坏血酸过氧化物酶编码区序列,并进行生物信息学分析以及组织特异性表达研究。经测序表明,所获得的序列长约769 bp,包含753 bp完整的开放阅读框;生物信息学分析结果表明,此序列编码250个氨基酸,蛋白大小约为27.6 k Da,等电点为5.42,有大范围亲水区,推测在细胞质中起到抗氧化作用;进化发育系统分析表明,It APX和Ib APX最为接近;组织特异性表达分析表明,It APX在各组织中均有表达。I.trifida抗坏血...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孙菲菲 侯喜林 李英 崔秀敏
采用离体法测定了经50 mmol.L-1的KNO3诱导不同时间后的雪克青、苏州青、矮脚黄、乌塌菜(黄心乌)4个不结球白菜品种叶片硝酸还原酶的活性。结果表明,4个品种的硝酸还原酶活性变化趋势相似,且分别在4、4、6、6 h达到最高峰。苏州青经50 mmol.L-1的KNO3诱导4 h后,提取其叶片总RNA,用RT-PCR方法获得硝酸还原酶基因cDNA的2条片段,长度为1 125 bp和438 bp,分别编码374个和135个氨基酸,命名为nr1125和nr438。nr1125在GenBank的登录号为DQ001901。
关键词：
不结球白菜 硝酸还原酶 PCR 克隆
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
粟霞 张军科 马锋旺
根据Genbank上已报道的烟草、辣椒、龙眼和杨树4种植物的抗坏血酸过氧化物酶基因的保守区域设计兼并引物,利用RT-PCR和RACE法对皇家嘎拉苹果叶片APX基因进行克隆、分析。结果表明,皇家嘎拉苹果叶片APX基因片段长度为694 bp,与GenBank中已登陆的富士苹果果实、皇家嘎拉苹果花芽、草莓及Rosa hybridcultivar等的APX cDNA的同源性分别为97%,97%,84%和84%。
关键词：
苹果叶片 APX基因 过氧化物酶
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
卢秉国 何炜毅 申艳红 蒋际谋 陈晓静 陈伟 吕柳新
从龙眼子叶胚中分离得到一个大量表达的表达序列标签(EST),该EST编码序列与金鱼草3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的同源性为84%,利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术成功克隆了龙眼GAPDH基因全长序列.序列分析表明,龙眼GAPDH基因的cDNA全长为1395 bp,包括一个长1008 bp、编码336个氨基酸的开放阅读框(ORF),5′端非编码区(UTR)长71 bp,3′-UTR长316 bp.龙眼GAPDH基因编码的氨基酸序列与水稻、葡萄、小果野蕉、拟南芥、银杏等GAPDH基因的氨基酸序列同源性均高达85%以上,该基因在GenBank中的登录号为FJ694011.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘光德 雷兴华 祝钦泷 钟光驰 郭铁英 李艳冬 眭顺照 李名扬
【目的】克隆金荞麦二氢黄酮醇4-还原酶基因(FdDFR1),分析其序列特征。【方法】利用同源克隆的原理,采用RACE结合cDNA文库筛选的方法,从金荞麦cDNA文库中克隆DFR基因(FdDFR1);对其序列进行生物信息学分析和Southern杂交检测。【结果】克隆到一个DFR蛋白基因(FdDFR1),通过Southern杂交分析,推测在金荞麦基因组中DFR基因是1～2个基因的小家族,FdDFR1是单拷贝基因;FdDFR1基因编码一个长341个氨基酸的蛋白质,在N端存在一个NADP结合位点"VTGASGFVGSWLVMRLLEHGY",还存在一个底物结合特异性决定的氨基酸基序"TVNVEEKQK...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
朱文漓 顾继锐 辜文博 吴江 刘汉元 徐恒
以实验室构建的草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道cDNA文库苹果酸脱氢酶(cMDH)EST序列为基础,采用末端快速扩增法(RACE),从健康雌性草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道细胞RNA中获得1391 bp的草鱼肠道cMDH的cDNA序列(NCBI登录号:EU569765)。结果显示:该序列包含62 bp的5′非编码区(5′-UTR),330 bp的3′非编码区(3′-UTR),典型加尾信号AATAA位于polyA起点上游16 bp。开放阅读框ORF长999 bp,共编码333个氨基酸,预测蛋白等电点为6.67,大小为36 kDa。多序列比...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
乔枫 耿贵工 曾阳 金兰 谢惠春
为探索青海枸杞抗坏血酸过氧化物酶(APX)基因信息,并对枸杞APX基因进行生物信息学分析以及基因表达研究,通过RT-PCR和RACE方法克隆枸杞APX基因,利用生物信息学软件预测基因结构,采用实时荧光定量PCR方法分析基因表达的变化。结果显示:枸杞APX基因的全长cDNA序列为1 047bp(Genbank No.KX981601),命名为LcAPX基因。该基因含有1个753bp的完整开放阅读框(ORF),编码250个氨基酸,包含亚铁血红素结合位点、底物结合位点和K~+结合位点。枸杞LcAPX与茄科植物的APX蛋白聚为一类,说明两者的亲缘关系较近。LcAPX基因在枸杞的成熟叶中表达量最高,花中表达量最少。其在聚乙二醇(PEG)、氯化钠(NaCl)胁迫下诱导表达,显示LcAPX在枸杞抗干旱和抗盐逆境过程起一定作用。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王润豪 于永昂 胡海燕 丁超杰 李红民 牛晴晴 李成伟
为了研究非生物胁迫处理下小麦抗坏血酸过氧化物酶(APX)的作用,以小麦百农207为试验材料,根据小麦APX基因序列,采用RT-PCR技术对小麦APX基因进行克隆、生物信息学分析及组织表达模式分析;对小麦进行非生物胁迫处理,分析小麦APX基因在环境胁迫条件下的表达特征。结果表明,TaAPX基因包含876 bp的开放阅读框,编码1个291个氨基酸组成的蛋白质,分子质量为31.73 ku,等电点为7.74,分子式C_(1417)H_(2246)N_(394)O_(423)S_5,TaAPX可能是两性蛋白,无信号肽,为非分泌蛋白。蛋白质序列比对和进化树分析表明,小麦与大麦的APX编码蛋白的氨基酸全长序列相似性最高达到97.25%,亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析表明,TaAPX在小麦幼根、茎、茎节、幼叶、叶鞘、雌蕊和雄蕊中均有表达,其中在幼叶中表达量最高,其次是茎、茎节,在幼根、叶鞘中表达量较低,在雌、雄蕊中表达量最低。在非生物胁迫条件下该基因受干旱、低温胁迫表达增强,而在NaCl胁迫和渗透胁迫下表达降低。综上,获得了TaAPX基因的编码区序列,分析发现其响应干旱、低温和盐等逆境胁迫,提示该基因可能与小麦抗逆境机制密切相关。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李妍 王雪花 陈忠文 段伟科 侯喜林 李英
［目的］本文旨在探究逆境下ＢｃＧＭＥ基因与抗坏血酸（Ａｓ Ａ）含量的关系，为培育高品质的不结球白菜品种奠定理论基础。［方法］以不结球白菜‘苏州青’为材料，同源克隆了ＢｃＧＭＥ基因的全长，应用生物信息学分析了其氨基酸序列，通过实时荧光定量ＰｃＲ技术测定了ＢｃＧＭＥ基因在过氧化氢胁迫和水淹胁迫下的表达水平，利用高效液相色谱（ＨＰＬｃ）测定了相应的抗坏血酸含量。［结果］ＢｃＧＭＥ基因包含一个长度为１ １３７ ＢＰ的开放式阅读框（ＯＲＦ），编码３７９个氨基酸。推测其蛋白理论相对分子质量为４２．９７×１０３，理论等电点Ｐ Ｉ值为５．８４，分子式为ｃ１９０７Ｈ２９４９Ｎ５１９Ｏ５７０ｓ２２，属于不稳定蛋白．．．
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
熊宏 陈海涛 宋健 赵平 刘小烛 丁勇
应用转录组测序分析和ＲＴ－ＰＣＲ技术首次从樟叶越桔ＶａＣＣｉｎｉｕｍ ｄｕｎａｌｉａｎｕｍ中克隆了全长１ ５７０ ｂＰ的甘油醛－３－磷酸脱氢酶基因Ｖｄ ＧａＰｄＨ１，其完整的开放阅读框推测编码由３３７个氨基酸残基组成的Ｖｄ ＧａＰｄＨ１。Ｖｄ ＧａＰｄＨ１理论相对分子量为３６．５７ ｋ ｄ，等电点为７．０６，负电荷残基（ａｓＰ＋Ｇｌｕ）总数为４２个，正电荷残基（ａＲＧ＋ｌｙｓ）总数为４２个，不稳定系数为２３．２７，属稳定性蛋白质；其二级结构主要由随机卷曲、延伸链、α－螺旋和β－转角等构件组成。Ｖｄ ＧａＰｄＨ１为无信号肽、无跨膜结构的亲水性蛋白质，推测其为ｎａｄ＋－ＧａＰｄＨ的新成员，与已知细．．．
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