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[期刊] 中国农业科学
[作者]
李建科 王峰 夏凯
【目的】研究果汁中耐热菌的免疫化学快速检测方法。【方法】以果汁中分离的耐热菌免疫家兔获得抗体,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)原理建立果汁中耐热菌快速检测方法。【结果】首次成功建立并优化了耐热菌间接ELISA快速检测方法,检测限为5×10 4CFU/mL。实际检测时,通过对果汁样品集菌及预增菌,应用本研究建立的耐热菌间接ELISA快速检测方法,可以在24 h内给出果汁中耐热菌是否超过1 CFU/10 mL的检测结果,满足国内外果汁标准中耐热菌不超过1 CFU/10 mL的要求,检测时间比目前国内外普遍采用的KFL(Kruege...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
胡贻椿 岳田利 袁亚宏 高振鹏
为了解和控制我国浓缩苹果汁中的嗜酸耐热菌,对浓缩苹果汁生产过程主要工段和生产车间的空气及用水,进行了采样和分离鉴定,并与标准菌株A.acidoterrestris和已知分离菌珠进行了比较分析。结果表明,共分离得到了3株污染浓缩苹果汁的嗜酸耐热菌;在耐热、耐酸性检验中,这3株菌均可以较好地生长,符合脂环酸芽孢杆菌属嗜酸耐热的特点。与标准菌株和已知分离菌株细胞、菌落形态观察、生长条件和生理生化反应等方面的比较表明,这3株菌与标准菌株有较大的相似性,与标准菌应为同属不同种。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
樊明涛 毕静莹 刘邻渭 Mansel W Graffith
为了研究苹果汁生产中棒曲霉素产生菌的快速检测,利用实时PCR方法快速检测扩展青霉的可能性,对扩增条件进行优化。在polygatacturonase基因引物设计和传统PCR扩增扩展青霉DNA的基础上,研究实时PCR扩增时退火温度、引物浓度以及底物质量浓度对扩增效果的影响,以获得最佳的参数。结果表明,用Lightercy-cler实时PCR扩增扩展青霉DNA的最佳退火温度为61℃,最佳引物浓度为0.20~0.40μmol/L,底物质量浓度对实时PCR扩增的影响较小。在以上参数下,可以获得良好的PCR扩增曲线、产物溶解曲线以及清晰的产物条带。研究获得的快速检测扩展青霉的实时PCR参数,可用于浓缩苹果...
关键词：
苹果汁 扩展青霉 PCR检测
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
职通瑞 宋晓玲 张晓静 张盛静 黄倢
为了从对虾体内分离出的菌株中快速筛选出蜡样芽孢杆菌和溶藻胶弧菌,将蜡样芽孢杆菌与溶藻胶弧菌作为抗原,免疫SPF新西兰大白兔,获得免疫血清,效价均高于1:2000。将免疫兔血清作为一抗,HRP-羊抗兔血清作为二抗,建立了蜡样芽孢杆菌和溶藻胶弧菌快速检测的间接ELISA方法。此方法中,兔抗血清最佳稀释度为1:10000,菌液最佳包被浓度为106 CFU/ml;HRP-羊抗兔血清最佳稀释浓度为1:1000,可检测细菌最低浓度为104 CFU/ml。抗蜡样芽孢杆菌血清与苏云金芽孢杆菌有交叉反应,抗溶藻胶弧菌血清与其亲缘相近菌株无交叉反应,具有较强的特异性。2012年和2013年,分别从斑节对虾、中国对...
[期刊] 水产学报
[作者]
祝璟琳 李大宇 肖炜 邹芝英 杨弘
以罗非鱼源无乳链球菌为抗原，免疫新西兰兔获得高效价的多克隆抗体；以此多克隆抗体作为一抗，羊抗兔Ｉｇ ｇ－ＨＲＰ作为酶标二抗，建立无乳链球菌的间接ＥＬＩＳＡ快速检测法。采用棋盘滴定法确定抗原与一抗的最佳工作浓度分别为１０６ ＣＦＵ／ｍ Ｌ和１∶１０ ０００；酶标二抗的最适工作浓度为１∶１０００。病原菌检测灵敏度为每孔１０３ ＣＦＵ。该方法标准化后具有快速、灵敏等特性，与海豚链球菌等其他常见水产病原菌无交叉反应；阻断实验中的阻断率达７２．０２％；交叉反应和阻断实验的结果显示该方法具有较高的特异性。将该方法标准化后检测了４４株２００７—２０１３年分离的罗非鱼无乳链球菌，阳性检测率为１００％；对人工感．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
夏君 吴志新 张鹏 熊娟 庞丽娇 陈孝煊
应用间接酶联免疫吸附试验(Indirect-ELISA)技术,建立了快速检测柱状黄杆菌的方法。结果显示:根据棋盘试验,确定最佳抗原包被浓度和免疫血清最佳工作浓度分别为1×106cfu/mL和1∶5000,酶标抗体最佳工作浓度为1∶10000。在该条件下,所建立的间接ELISA能检测出5×104cfu/mL的柱状黄杆菌,且与爱德华氏菌、哈维氏菌弧菌、嗜水气单胞菌、副溶血弧菌等常见鱼类致病菌无交叉反应。结果表明,所建立的间接ELISA可不经细菌培养而直接检测人工感染后草鱼鳃组织中的柱状黄杆菌,该方法对柱状黄杆菌的检测具有快速、敏感、特异、实用的优点。
关键词：
柱状黄杆菌 间接ELISA 检测
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李建科 冯再平 仇农学
【目的】研究苹果浓缩汁中耐热菌(Alicyclobacillusacidoterrestris)的定量PCR快速检测法。【方法】通过引物设计、PCR扩增及凝胶纯化试剂盒回收,构建并获得耐热菌的PCR竞争模板;用获得的竞争模板作为定量内标物建立耐热菌的竞争定量PCR(QC-PCR)检测体系。【结果】经对建立的QC-PCR检测体系优化,目标模板检测灵敏度由5×104个分子/PCR体系,提高到50个分子/PCR体系,竞争模板和目标模板分子共扩增可检测到5×102个目标模板分子/PCR体系,并能从人工回添苹果浓缩汁样品中定量检测到5×103cfu/PCR体系的耐热菌,整个检测时间为4～5h,比传统的细...
关键词：
耐热菌 苹果浓缩汁 竞争定量PCR
[期刊] 水产学报
[作者]
樊景凤 梁玉波 宋立超 王斌 臧红梅 李文哲
以凡纳滨对虾红体病病原菌副溶血弧菌为抗原,免疫兔获得高免血清,建立一种快速检测凡纳滨对虾红体病病原菌副溶血弧菌的ELISA技术。采用棋盘滴定法确定抗原和抗血清的最适工作浓度分别为106CFU·mL-1和1∶2000;病原菌检测灵敏度为每孔104CFU;抗血清与其它细菌标准菌株的交叉反应结果均呈阴性;阻断实验中的阻断率达75.88%;交叉反应和阻断实验结果表明该方法具有较高的特异性。将该方法标准化后检测了30份人工感染后的凡纳滨对虾和健康凡纳滨对虾,阳性检测率分别为93.3%和13.3%,表明该技术不仅能够检测已发病的凡纳滨对虾,而且能够检测带菌的凡纳滨对虾,这对于水产养殖业中疾病的早期诊断有着...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王敏 王玮 吕青骎 徐幸莲 周光宏 李春保
[目的]本研究旨在建立一种简单、快速检测猪肉中氯丙嗪(CPZ)残留量的方法。[方法]以CPZ-牛血清白蛋白(BSA)为包被抗原,自制鼠抗CPZ单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测猪肉中CPZ含量的间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),同时优化检测条件并对该方法进行评价。[结果]采用自行制备的特异性鼠抗CPZ单克隆抗体,建立间接竞争ELISA检测方法,优化得到最佳反应条件:抗原包被稀释倍数为1∶10 000,单克隆抗体浓度为1μg·mL~(-1),酶标二抗稀释倍数为1∶1 000,最低检测限为0.51 ng·mL~(-1),线性检测范围为1.37～111.11 ng·mL~(-1)。线性回归直线方程为y=-1.252 6x+2.853 2,相关系数(R~2)为0.986 6,总变异系数(CV)为6.97%,空白猪肉添加回收率为96.90%～118.79%。[结论]建立的间接竞争ELISA方法特异性强,灵敏度、精密度、准确度和重现性良好,可用于猪肉组织中CPZ残留的快速检测。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
白方方 兰建新 王燕 韩茵 张晓华
以迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)WY28作为抗原,免疫新西兰兔,获得效价为1:2048的多克隆抗体;以此多克隆抗体作为一抗,山羊抗兔IgG-HRP作为酶标二抗,建立迟缓爱德华氏菌的间接ELISA快速检测法。采用棋盘滴定法确定抗原与一抗的最佳工作浓度分别为106CFU·mL-1和1:10000;酶标二抗的最适工作浓度为1:1000。病原菌检测灵敏度为每孔103CFU。该方法标准化后具有快速、灵敏等特性,与肠杆菌科其他细菌参考菌株无交叉反应,具良好的特异性。对养殖场发病大菱鲆(Scophthalmus maximus)和半滑舌鳎中分离的细菌菌株进行检测,从56株分离菌株中检...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
孙艳秋 赵奎华 刘长远 曹远银
采用黄瓜细菌性角斑病菌作为包被抗原,对反应条件进行优化,建立较优黄瓜细菌性角斑病菌间接酶联免疫吸附分析(ELISA)检测方法。通过对抗原包被浓度和抗体稀释浓度、封闭液和封闭时间、抗体温育时间等的优化,确定ELISA法最低检测限。结果表明:抗原的较优包被浓度为106cfu·mL-1,抗体的较优工作浓度为1∶4000,以5%胎牛血清作为封闭液,在37℃下封闭1.5h,加入抗体温育1.5h是间接ELISA法的较优反应条件,方法的检测限为105cfu·mL-1。对田间采集的病叶进行检测表明,该方法可准确检测出黄瓜细菌性角斑病菌,可用于田间黄瓜细菌性角斑病的快速诊断。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李建科 胡秋辉 乌日娜 张海彬 吴静静
建立了苹果浓缩汁中5种有机磷农药(敌敌畏、甲胺磷、氧化乐果、马拉硫磷、对硫磷)残留的基质固相分散萃取气相色谱(MSPDGC)多残留分析方法。经检测,0.1mg·kg-1标准溶液回收率≥96%,1.0mg·kg-1标准溶液回收率≥87%;相对标准偏差分别为1.4%～9.9%,2.8%～8.5%;最低检出限为0.007～0.025mg·kg-1。该方法比液液萃取快速、经济、省时、省力。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王芳 冯宇 张阁 蒋卉 朱良全 丁家波
【目的】建立高通量牛布鲁氏菌间接ＥＬＩＳＡ诊断方法，为科学高效诊断牛布鲁氏菌病提供技术手段。【方法】以提纯的猪布鲁氏菌Ｓ２株脂多糖（ＬＰＳ）作为包被抗原，采用棋盘滴定法确定了抗原包被浓度、包被液、抗原包被时间、封闭液、样品稀释液、血清稀释倍数、兔抗牛酶标抗体稀释液、兔抗牛酶标抗体稀释浓度、最佳ＴＭＢ底物反应时间等参数，初步建立了牛布鲁氏菌间接ＥＬＳＩＡ方法。并用上述条件初步建立的方法对１７６份牛布鲁氏菌病阳性血清和１３２份牛布鲁氏菌病阴性血清进行检测。检测结果经ＳＰＳＳ１７．０软件分析，构建受试者工作特征曲线（ＲＯＣ）及曲线下面积，确定敏感性和特异性；通过ＹＯｕｄＥｎ指数确定阴阳性判定的临界点．．．
关键词：
布鲁氏菌 间接ELISA 特异性 敏感性
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
叶宝宏 鲍长磊 付明哲 许信刚
【目的】建立产气荚膜梭菌β毒素抗体间接ＥＬＩＳＡ检测方法。【方法】将原核表达重组质粒ｐＥＴ－２８Ａ－β转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）感受态细胞，用ＩｐＴＧ进行诱导表达，表达产物经镍柱亲和层析纯化、尿素梯度透析复性后进行ＷＥＳＴＥｒｎ ＢＬｏＴ鉴定。用复性的β毒素重组蛋白作为包被抗原，通过优化间接ＥＬＩＳＡ试验条件，建立其抗体间接ＥＬＩＳＡ检测方法，对该方法的特异性、敏感性和重复性进行考察，并用其对５２１份临床样本进行检测。【结果】通过诱导、纯化和复性，获得了纯度较高且具有良好反应原性的β毒素重组蛋白。间接ＥＬＩＳＡ条件为：抗原最佳包被质量浓度为５．０μＧ／ｍＬ，阳／阴性血清最佳稀释度为１∶５０．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘双凤 邹作宇 韩志忠 曲立 董宏伟 徐连伟 蔡勋
以施氏鲟(Acipenser schrenchii)细菌性败血症病原菌嗜水气单胞菌为抗原,免疫兔获得高免血清,建立一种快速检测施氏鲟细菌性败血症病原菌嗜水气单胞菌的ELISA技术。结果显示:采用棋盘滴定法确定抗原和抗血清的最适工作浓度分别为107CFU/mL和1∶20000;病原菌检测灵敏度为每孔104CFU;抗血清与其它细菌标准菌株的交叉反应结果均呈阴性;阻断实验中的阻断率达66.88%;交叉反应和阻断实验的结果表明该方法具有较高的特异性。将该方法标准化后检测了22份人工感染后的施氏鲟和健康施氏鲟,阳性检测率分别为90.9%和13.6%,表明该技术不仅能够检测已发病的施氏鲟,而且能够检测带菌...
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