为探索苜蓿黄酮对脂多糖(LPS)刺激下乳成分合成相关基因表达的影响,采用体外细胞培养技术,将奶牛乳腺上皮细胞分成4个组:1)基础培养基(Con);2)基础培养基中加入1μg/mL的LPS(L);3)基础培养基中加入1μg/mL的LPS和75μg/mL苜蓿黄酮(L+F);4)基础培养基中加入75μg/mL苜蓿黄酮(F)。细胞在37℃,5%CO2的培养箱中培养12h后,对其乳成分合成相关基因的表达进行测定。结果表明:1)相对于对照组,L组和L+F组的酪氨酸激酶(JAK2)表达显著降低(P<0.01),信号转导

为分析苜蓿素对脂多糖诱导下体外培养奶牛乳腺上皮细胞抗炎和乳蛋白合成相关基因表达的影响,本研究将体外培养的奶牛乳腺上皮细胞分成4组,即基础培养基(对照)和基础培养基中分别加入1μg·m L-1LPS(L)、1μg·m L-1LPS+10μg·m L-1苜蓿素(L+T)和10μg·m L-1苜蓿素(T)。结果显示,1)与对照组相比,L组奶牛乳腺上皮细胞的活性显著下降(P<0.05),而T组则显著升高(P<0.01)。2)L+T组细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于L组(P<0.01),而一氧化氮(NO)

为探讨脂多糖(LPS)对母鸡产蛋及产道先天免疫和应激相关基因表达的影响,试验采用40羽46周龄温氏土种母鸡,随机分为2组,对照组腹腔注射1 mL·kg-1生理盐水,试验组腹腔注射1 mg·kg-1的LPS(1 mg·mL-1)。记录注射后12 d的采食量和产蛋率。待2组母鸡生产性能恢复正常后重复LPS注射,24 h后处死母鸡,采集血液、输卵管峡部和子宫,检测血液生化指标、输卵管峡部和子宫氧化应激指标(总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)),并测定峡部和子宫免疫、增殖、凋亡和应激相关基因的mRNA水平。结果表明:LPS组母鸡采食量和产蛋率显著降低(P<0.05)...

运用RT-PCR技术探索拟穴青蟹(Scylla paramamosain)注射免疫增强剂——大黄多糖(rhubarb polysaccharide,RP)后11个免疫相关基因的表达变化情况。结果发现,大黄多糖刺激拟穴青蟹4 d后,血细胞中4个基因(丝氨酸蛋白酶抑制因子、过氧化氢酶、过氧化物还原酶和酚氧化酶原)表达水平分别上调1.1倍、4.1倍、1.3倍和2.1倍,与对照组相比,存在极显著(P<0.01)或显著性差异(P<0.05)。肝胰腺中5个基因表达变化显著(P<0.05),其中丝氨酸蛋白酶抑制因子、过氧化物还原酶和抗脂多糖因子3个基因表达分别上调2.1倍、4.8倍和1.7倍;过氧化氢酶和溶...

【目的】研究免疫应激对断奶仔猪脾脏、胸腺和外周血白细胞过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)蛋白表达水平的影响。【方法】选取12头健康断奶仔猪,分成2组,每组6个重复。试验组注射100μg·kg-1BW的脂多糖(LPS)建立免疫应激模型,对照组注射等量生理盐水。注射后3h,采血分离血浆和白细胞待测,然后立即屠宰仔猪,取脾脏和胸腺,通过Western blot测定脾脏、胸腺和白细胞中PPARγ蛋白表达水平。【结果】LPS刺激仔猪,导致血浆白细胞介素-6﹑肿瘤坏死因子-α、皮质醇和前列腺素E2含量显著升高(P<0.05),胰岛素、类胰岛素生长因子-1含量显著降低(P<0.05);LPS刺激导致...

为确定toll样受体家族在绵羊肺泡巨噬细胞的分布及脂多糖(LPS)刺激过程中TLR2、4的动态表达规律。通过RT-PCR方法检测绵羊TLR1-TLR10表达分布;以α-tubulin和GAPDH为内标基因,对绵羊TLR2、4进行克隆和测序,将重组质粒作为标准品建立实时定量PCR标准曲线,通过实时定量PCR方法检测LPS诱导0~48 hTLR2、4的动态表达。结果表明,在绵羊肺泡巨噬细胞中检测到TLR1、2、4、6、7、8、9、10的表达,而TLR3、5未见表达;α-tubulin和GAPDH在LPS诱导前后表达量存在显著差异,均不适合作为内标基因,以使用的细胞数和总RNA量进行均一化校正,发现...

将黄芪多糖(APS)用无菌生理盐水配制成2 mg/mL(低剂量)、20 mg/mL(高剂量)两种针剂,腹腔注射吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)。分别在注射后0 h、24 h、48 h、72 h和96 h采样提取吉富罗非鱼鳃、头肾、肝脏和脾脏组织中的总RNA,并反转录成cDNA,利用Real-time PCR方法对不同组织中的热应激蛋白(hsp70)基因表达进行定量分析。结果显示,在24 h时,高剂量组吉富罗非鱼鳃、头肾和肝脏三个组织中hsp70基因的表达量显著高于同期对照组(P<0.05),之后表达量快速降低,低剂量组hsp70基因表达量仅在脾脏中有上调。实验表明,AP...

旨在探索不同浓度玉米赤霉烯酮(ZEN)对奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)生长和乳脂合成相关基因表达的影响。首先，用不同剂量ZEN处理MAC-T细胞36 h,血细胞计数板统计细胞数量，染色并分析细胞凋亡与坏死情况，筛选ZEN添加的合适剂量；接着，试剂盒检测ZEN对MAC-T细胞中活性氧(ROS)以及线粒体膜电位的影响；最后，利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术，分析ZEN对MAC-T细胞增殖、凋亡、氧化应激和乳脂合成相关基因表达的影响。结果表明，低剂量ZEN(0.01～1.00μmol/L)有促进MAC-T生长的趋势，而高剂量ZEN(5.00～10.00μmol/L)显著降低MAC-T细胞数量；0.10μmol/L ZEN对MAC-T中ROS和线粒体数量无明显影响，但10.00μmol/L ZEN显著增加了MAC-T中ROS水平，降低了线粒体数量；RT-qPCR结果表明，0.10μmol/L ZEN显著促进增殖基因(CDK1、CCND2)、抗氧化基因(DHODH、GPX4)和抗凋亡基因(BCL-2)表达，但同时提高了凋亡基因(CAS-3、BAX)表达量；10.00μmol/L ZEN显著抑制增殖基因(PCNA、CDK1、CCND2)、抗氧化基因(DHODH、GPX4、AIFM2)和抗凋亡基因(BCL-2)表达，但显著促进凋亡基因(CAS-3、BAX)表达；值得注意的是，0.10μmol/L ZEN显著促进了乳脂合成相关基因(PPARγ、FASN、JAK-2),但10.00μmol/L ZEN显著抑制了这些基因表达。上述结果提示，不同浓度ZEN对MAC-T细胞的作用存在差异：0.10μmol/L ZEN可以促进MAC-T细胞生长和乳脂合成相关基因表达的同时，也会诱导凋亡基因表达；10.00μmol/L ZEN会诱导MAC-T细胞氧化应激、降低线粒体数量，抑制增殖、抗氧化、抗凋亡和乳脂合成相关基因表达，同时促进凋亡基因表达，导致细胞死亡。

[目的]本试验旨在探讨去乙酰化蛋白7(sirtuin 7,SIRT7)对奶牛乳腺上皮细胞(DCMEC)合成乳蛋白、乳脂和乳糖关键基因表达的影响。[方法]以体外原代培养的中国荷斯坦奶牛DCMEC为试验材料,纯化后转染质粒p CDNA3.1-SIRT7,继续培养48或72 h后收集细胞。采用RT-qPCR和Western blot法检测乳蛋白、乳脂和乳糖合成关键基因mRNA和蛋白的表达;通过特异性试剂盒检测胞内和培养基中甘油三脂(TG)含量。[结果]1)乳蛋白:与对照组相比,过表达SIRT7可显著提高αs1-酪蛋白基因(CSN1S1)、β-酪蛋白基因(CSN2)和ETS转录因子基因(ELF5) mRNA水平,促进CSN2蛋白合成,激活雷帕霉素靶蛋白(m TOR)磷酸化; 2)乳脂:与对照组相比,过表达SIRT7可显著提高乳脂合成关键因子过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)、固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1) mRNA和蛋白水平,显著增加细胞内甘油三酯(TG)含量; 3)乳糖:与对照组相比,过表达SIRT7可显著提高乳糖合成关键因子葡萄糖转运蛋白1(GLUT1) mRNA表达。[结论]在体外培养条件下,过表达SIRT7可促进DCMEC中乳蛋白、乳脂和乳糖合成关键基因的表达。

为了解尼罗罗非鱼无乳链球菌(GBS)荚膜多糖合成基因的表达及其与荚膜唾液酸含量、菌株致病性的关系,本实验克隆了尼罗罗非鱼荚膜多糖合成基因cps E、cps K和neu A,通过q RT-PCR方法分析了这3个基因在不同培养温度下表达水平的变化,同时通过比色法测定了不同培养温度下GBS荚膜唾液酸含量的变化,通过人工感染实验分析了不同水温条件下GBS对罗非鱼的致病性。结果显示,cps E、cps K和neu A编码的氨基酸序列均具有保守的与荚膜多糖合成相关的酶活性位点,Cps E、Neu A与已知鱼源GBS(

[目的]P-糖蛋白(P-gp)是影响底物药物口服生物利用度至关重要的因素。本试验旨在探究脂多糖(LPS)对猪肝脏、肾脏和小肠组织中P-gp定位和表达的影响,为临床合理有效用药提供理论支持。[方法]采用免疫组织化学SABC法结合DAB显色技术,用抗P-gp的单抗C219对相关组织的P-gp进行定位,进一步采用Image-ProPlus软件对猪肝脏、肾脏、空肠和回肠中P-gp的表达进行半定量分析,检测LPS处理对P-糖蛋白定位和表达的影响。[结果]猪肝脏组织中的P-gp均主要分布于肝细胞间的胆小管细胞膜上,LPS处理3h后P-gp表达量显著上升(P<0.05),6h后可降至正常水平。猪肾脏中P-g...

采用双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)结合MAIDI-TOF/TOF质谱方法分析不同精粗比日粮条件下肝脏蛋白/酶表达谱的差异,探讨不同精粗比日粮条件下肝脏糖脂代谢与乳脂肪合成的关系及可能机制。8只健康的泌乳中期山羊随机分为2组,日粮精粗比分别为4∶6(低精料)和6∶4(高精料),采用2×2拉丁方设计,2次重复。取乳样,测定产奶量和乳中甘油三酯(TG)的含量,并进行活体肝脏穿刺取样,应用双向电泳技术对肝脏样品进行蛋白表达谱分析。试验结果表明:与低精料组相比,高精料组山羊日平均产奶量显著增高(P<0.05),而乳中TG含量显著降低(P<0.05)。...

为研究脂滴包被蛋白(Perilipin)在猪脂肪组织中的表达分布情况及其与糖皮质激素作用的关系,选取氟烷基因隐性纯合子猪(Halnn)和氟烷基因显性纯合子猪(HalNN)为动物模型,采用半定量实时荧光PCR(rqRT-PCR)技术分析其背脂和肾周脂中perilipin基因及脂肪代谢和糖皮质激素作用相关基因的表达。结果显示:两种氟烷基因型猪的体重、背膘厚和背膘指数无显著差异,但Halnn肾周脂重(P=0.09)和肾周脂指数(P=0.10)有低于HalNN猪的趋势。双因子方差分析结果表明Halnn猪脂肪组织中perilipin mRNA水平显著高于HalNN猪(P<0.05),而糖皮质激素受体基因...

【目的】研究新疆红肉苹果（Ｍａｌｕｓ ｓｉｅｖｅｒｓｉｉ ｆ．ｎｅｉｄｚｗｅｔｚｋｙａｎａ（ｄｉｅｃｋ）ｌａｎｇｅｎｆ．）与‘富士’（Ｍ．ｄｏＭｅｓｔｉｃａ ｃｖ．ｆｕｊｉ）等苹果品种杂交后代株系间果实类黄酮合成差异的分子机理，为进一步完善功能型苹果育种的理论与技术体系提供科学依据。【方法】以紫红２号及红脆１、２、４号等红肉程度存在明显差异的４个苹果株系发育后期的果实为试材，进行ＭｙＢ１０启动子基因型鉴定，并测定类黄酮组分和含量，分析类黄酮合成相关基因的表达。【结果】红脆１、２、４号ＭｙＢ１０启动子基因型均是ｒ６ｒ１型，而紫红２号启动子类型为ｒ６ｒ６型。红脆１号和紫红２号果实成熟期类黄酮含量分．．．

【目的】研究α-酮戊二酸(AKG)对经脂多糖(LPS)多次刺激后断奶仔猪肌肉能量代谢的影响及其分子机制。【方法】采用2×2因子试验设计,LPS刺激(有、无)和AKG添加量(0、1%)为2个主效应,共4个处理组。选取24头(6.79±0.32)kg的断奶仔猪(杜洛克×长白×大白),随机分配到4个处理组,每个处理设6个重复(猪)。LPS刺激组仔猪在试验的第10、13和15天腹腔注射100μg·kg-1 BW LPS,无LPS刺激组注射等量的生理盐水。第16天仔猪麻醉后进行屠宰,取腓肠肌样品,反相高效液相色谱法检测腓肠肌细胞内腺苷酸水平,Western blotting检测腓肠肌AMP激活蛋白激酶(...