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[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 鲁松清  喻子牛  
在电镜下观察了苏云金芽胞杆菌菌株CT-43的芽胞萌发、芽胞和伴胞晶体的形成过程。芽胞萌发分活化、萌动和脱出3个阶段。芽胞形成分为轴丝形成、前芽胞隔膜形成、前芽胞形成、初生细胞壁形成、芽胞外套形成、芽胞衣片层形成和芽胞形成7个阶段。伴胞晶体形成从芽胞形成第2阶段开始,由一些小结晶聚集而成。晶体镶嵌在菌株CT-43中很普遍。结合实验对伴胞晶体形成的调控和外膜的形成等进行了讨论。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 陈慧杰  刘晓艳  曹诗云  阮丽芳  孙明  
苏云金芽胞杆菌CT-43高产苏云金素,其内生质粒pBMB0558上virD4基因编码的VirD4蛋白与Ⅳ型分泌系统中结合底物的偶合蛋白(T4CPs)高度同源。本研究利用插入缺失突变方法,构建同源双交换载体,敲除CT-43中的virD4基因,得到1株突变株BMB1122。HPLC检测结果显示,突变株BMB1122发酵上清液中未检测到苏云金素特征吸收峰;进一步通过LCMS-IT-TOF飞行质谱检测突变株胞内代谢物,结果显示其含有与苏云金素合成途径中的所有前体物分子质量相符的质荷比(m/z),这与出发菌株CT-43的结果一致。初步推测,virD4基因与苏云金素的分泌相关,virD4基因的敲除影响苏云...
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 王祥  姚宝安  
苏云金芽胞杆菌的伴胞晶体毒素对捻转血矛线虫第2期幼虫的毒力王祥,姚宝安(华中农业大学畜牧兽医学院,武汉430070)关键词苏云金芽胞杆菌,伴胞晶体毒素,捻转血矛线虫,第二期幼虫THETOXICITYOFBacillusthuringiensisCRY...
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 巫益鸣  阮丽芳  彭东海  刘国强  孙明  
通过携带Mini-Tn10转座子的温度敏感性质粒载体pIC333构建了苏云金芽胞杆菌YBT-1518菌株的插入突变体库。从突变体库中筛选得到1株芽胞不能在萌发剂L-丙氨酸诱导下萌发的突变株(命名为MA1),进一步的试验表明该突变株菌株的芽胞在其他氨基酸L-苯丙氨酸、L-缬氨酸和L-亮氨酸以及糖类萌发剂葡萄糖、果糖和蔗糖的诱导下也都不能萌发,表明MA1很可能属于新型的芽胞萌发缺陷突变株。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)  [作者] 沙莉  章淘  黄张敏  黄志鹏  关雄  
分离自武夷山土壤的苏云金芽胞杆菌BRC-HZP7菌株对小菜蛾和甜菜夜蛾幼虫有较好的毒杀作用.对该菌株进行了生理生化测定、cry基因的PCR-RFLP检测,以及通过SDS-PAGE检测晶体蛋白,并对蛋白点进行肽段指纹图谱鉴定.结果表明该菌株含有cry1Aa、cry1Ba、cry1Ia、cry2Ab、cry2Ac、cry2Ae等6种cry基因.从选取的8个蛋白条带肽段指纹图谱可以看出:标记3、6、7、8的4个蛋白点都是杀虫晶体蛋白,蛋白点6、7、8分别鉴定为Cry2Aa、Cry1Aa、Cry1Ba,蛋白点3可能是Cry1Ba的部分片段.表明该菌株有丰富的ICP资源,可作为杀虫应用的候选菌株.
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 姚宝安  王祥  夏雪山  赵俊龙  马丽华  孙明  喻子牛  
捻转血矛线虫是世界各国危害牛、羊等反刍动物的主要寄生虫之一.目前虽然有特效的化学药物驱虫,但因其具一定的副作用,寄生虫易产生耐药性,药物易在内品残留,危害人类健康.苏云金芽胞杆菌是一种革兰氏阳性细菌,它在形成芽胞的同时,在菌体一端形成一种蛋白性质伴胞晶体,它对昆虫有较高毒力,对人畜安全无毒,不污染环境,成本低,已广泛用于防治农、林、仓贮害虫和医学
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 王清锋  喻子牛  
利用PCR片段延伸连接技术将cry1E的原启动子准确地更换为cry3A启动子,重组cry1E经载体pHT315克隆至枯草芽胞杆菌无芽胞突变株1S8和苏云金杆菌以色列亚种无晶体突变株4Q7,获得重组菌3A1EBs和3A1EBt。聚丙稀酰胺凝胶电泳和生物测定表明,克隆改造后的cry1E可表达,表达的Cry1E对海灰翅夜蛾有毒(幼虫死亡率60%~70%)。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 谭珊娜  孙明  喻子牛  
根据能形成伴胞晶体的特征,芽胞杆菌CTC菌株被鉴定为苏云金芽胞杆菌幕虫亚种。但该菌株明显不同于典型的苏云金芽胞杆菌,因为其伴胞晶体蛋白并不是由杀虫晶体蛋白基因编码,而是编码细胞表面S 层蛋白基因的产物,且伴胞晶体蛋白没有检测到对昆虫的毒性。本研究基于对CTC菌株及参照菌的16S-23SrRNA间隔区、编码S 层蛋白的基因进行扩增并测序,从系统发育水平检测到CTC菌株明显与苏云金芽胞杆菌幕虫亚种典型菌株T02存在差异,表明芽胞杆菌CTC菌株更接近蜡状芽胞杆菌。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 周艳琴  姚宝安  夏雪山  赵俊龙  孙明  喻子牛  
将人工感染日本血吸虫尾蚴 45d的家兔主动脉灌注冲虫获得成虫 ,经Earle’s液洗涤 ,加入细胞培养板内 ,用含 10 %牛血清的RPMI 16 40培养液于 37℃、5 %CO2 培养箱中培养 ,苏云金杆菌B 0 0 1、E 0 0 2提取的伴胞晶体毒素 ,以不同浓度加入到各孔中。 2 4h后成虫运动缓慢 ,并有部分死亡 ,随着伴胞晶体毒素作用时间的延长 ,成虫的死亡率也增加。当毒素总蛋白含量为 117.2 9μg/ml时 ,经菌株B 0 0 1晶体毒素作用的成虫死亡率在2 4h时为 87.74% ,48h时为 10 0 % ,LD50 分别为 2 1.42 μg/ml、9.77μg/ml...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 李建洪  万秋英  王沫  姜锡权  喻子牛  
为筛选对昆虫有高毒力的苏云金芽胞杆菌特异性菌株 ,从韩国不同地区土壤中筛选出两株对鳞翅目和双翅目昆虫具有杀虫活性的苏云金芽胞杆菌菌株 K980 5和 K990 3,它们分属于苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种和鲇泽亚种 ,形成典型的双金字塔型伴胞晶体 .两菌株不但对小菜蛾、甜菜夜蛾具有较高的生物活性 ,而且对双翅目昆虫致倦库蚊有毒 .K980 5含有 cry Aa,cry Ab,cry C,cry D和 cry 基因 ,K990 3含有 cry Aa,cry Ab,cry Ac,cry E和 cry 基因
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 刘明秋  戴经元  喻子牛  
以小菜蛾、棉铃虫为生物测定昆虫 ,通过测定 5种无机盐 (Na2 CO3,K2 CO3,CaCl2 ,MgSO4 ,和MgCl2 )对苏云金芽胞杆菌油剂的增效作用进行增效因子的筛选。结果表明 ,以小菜蛾为供试昆虫 ,除CaCl2 外 ,其余 4种无机盐对苏云金芽胞杆菌油剂均表现增效作用 ,0 .0 10 %MgCl2 效果最好 ,增效比为 1.5 6。以棉铃虫为供试昆虫 ,5种无机盐对苏云金芽胞杆菌油剂均表现增效作用 ,0 .0 12 5 %MgSO4 效果最好 ,增效比为 1.6 9,0 .0 2 5 %的Na2 CO3 次之 ,增效比为 1.5 9
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 乐超银  喻子牛  
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 刘华亮  陈守文  孙明  喻子牛  
在15-50℃、电机转速为75-750 r/min下测定了苏云金芽胞杆菌发酵液及其微滤浓缩液的流变特性。分析结果显示:幂律方程适于描述发酵液及其微滤浓缩液的流变曲线,它们的流变指数n值均小于1(n= 0.735-0.975),这表明苏云金芽胞杆菌发酵液及其微滤浓缩液均为拟塑性流体。随着浓度的上升,流体的稠度系数上升,流变指数下降;随着温度的上升,稠度系数下降,流变指数略有上升。经回归分析发现,温度对稠度系数的影响符合Arrhenius方程K=K0exp(Eu/RT),浓度与稠度系数的关系符合关系式K=aexp(bC2),不同温度下的流变指数平均值nave和浓度的关系可表示:nave=1.35e...
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 丁德武  刘丽  陈守文  须文波  
代谢网络的研究是当前的一个新热点,越来越多的证据表明对代谢网络的拓扑结构进行分析有助于理解细胞的行为和生命现象。本研究首先从KEGG数据库中获取了苏云金芽胞杆菌的基因组与所有代谢途径信息,构建了基因-酶以及酶-反应的列表,并参照Ma和Zeng所建立的数据库对所得的列表进行必要的修正。然后,用节点表示代谢物,连线表示代谢物之间的反应,即用代谢物图来表示所得的代谢网络,该网络包含了830个节点,1132条连线。随后,基于代谢网络的蝴蝶结结构对该网络进行模块划分并提取了网络的最重要组成部分:巨强连通体。最后,分析了巨强连通体及其10个关键节点的生物学功能意义。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 洪玉枝  刘子铎  汤江武  喻子牛  
将苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白CryⅠA基因的高保守区EcoRI-F片段重组到pSELECT-1载体的EcoRI位点,构建出能够高效转录RNA的探针载体pSBPL-1。该载体在T7RNA聚合酶作用下,通过DIG体外标记转录制备的RNA探针,具有灵敏度高,背景清楚,省时等优点,为苏云金芽胞杆菌分子生物学研究,及对鳞翅目有特异毒性高效菌株的筛选提供了一种方便而有效的方法。
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