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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王清锋 喻子牛
利用ＰＣＲ片段延伸连接技术将ｃｒｙ１Ｅ的原启动子准确地更换为ｃｒｙ３Ａ启动子，重组ｃｒｙ１Ｅ经载体ｐＨＴ３１５克隆至枯草芽胞杆菌无芽胞突变株１Ｓ８和苏云金杆菌以色列亚种无晶体突变株４Ｑ７，获得重组菌３Ａ１ＥＢｓ和３Ａ１ＥＢｔ。聚丙稀酰胺凝胶电泳和生物测定表明，克隆改造后的ｃｒｙ１Ｅ可表达，表达的Ｃｒｙ１Ｅ对海灰翅夜蛾有毒（幼虫死亡率６０％～７０％）。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王广君 张杰 吴隽 宋福平 黄大昉
通过对Cry1Ba3蛋白序列的分析,以及与已知Cry蛋白比较,设计了6对特异性引物,通过PCR扩增获得6种不同长度的cry1Ba3基因片段。将这些基因片段克隆到pET-21b载体上,导入大肠杆菌BL21中进行诱导表达,最终得到6种不同长度的Cry1Ba3蛋白片段。采用浸叶法检测这些蛋白片段对小菜蛾的杀虫活性,研究结果表明含有第1～685位和含有第22～655位氨基酸的蛋白片段对小菜蛾的毒性,与全长Cry1Ba3蛋白相比,没有改变;含有第54～655位氨基酸的蛋白片段对小菜蛾的毒力明显降低;而含有第22～627位和含有第85～655位氨基酸的蛋白片段完全丧失了对小菜蛾的活性。上述结果表明Cry1...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
赵直 吴钢 王闵霞 朱旭东 蒲志刚 张志勇 彭正松 蔡平钟
以分离的3株苏云金芽孢杆菌质粒为模板,通过设计一对特异引物,PCR扩增得到3条全长3.6 kb的基因序列,其各自都包含一个完整的开放阅读框,编码序列全长分别是3468、3450、2697 bp(Genebank登录号分别为GQ385073,GQ385074,GQ385075);它们与cry1A类基因同源性都高达95%以上;分别编码1159、1150和902个氨基酸。并在此基础上采用生物信息学方法对这3个基因编码蛋白从氨基酸组成、理化性质、跨膜结构域、疏水性/亲水性、亚细胞定位、跨膜结构域以及功能域等方面进行了预测和分析。为转基因抗虫植物和微生物杀虫工程菌的构建提供了基因来源。
[期刊] 华北农学报
[作者]
杜立新 董明 王容燕 马铭泽 王金耀 曹伟平 宋健 冯书亮
苏云金芽孢杆菌SHJ-5菌株是从黑龙江采集的土样中分离获得的新菌株,对其伴孢晶体形状、基因型、蛋白表达以及杀虫活性进行了系统研究。菌株SHJ-5产生的伴孢晶体形状为钝菱形;利用PCR-RFLP技术对该菌株的基因型进行鉴定,结果表明,该菌株含有cry1Aa、cry1Ea、cry1Be、cry1Ah、cry1Ai、cry2Ab、cry1i和vip3A基因;SDS-PAGE晶体蛋白检测结果显示,该菌株表达130～150 kDa和60 kDa大小蛋白;生物活性测定表明,菌株SHJ-5对棉铃虫和小菜蛾有较高杀虫活性,校正死亡率分别为100%和96.7%。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
沙莉 章淘 黄张敏 黄志鹏 关雄
分离自武夷山土壤的苏云金芽胞杆菌BRC-HZP7菌株对小菜蛾和甜菜夜蛾幼虫有较好的毒杀作用.对该菌株进行了生理生化测定、cry基因的PCR-RFLP检测,以及通过SDS-PAGE检测晶体蛋白,并对蛋白点进行肽段指纹图谱鉴定.结果表明该菌株含有cry1Aa、cry1Ba、cry1Ia、cry2Ab、cry2Ac、cry2Ae等6种cry基因.从选取的8个蛋白条带肽段指纹图谱可以看出:标记3、6、7、8的4个蛋白点都是杀虫晶体蛋白,蛋白点6、7、8分别鉴定为Cry2Aa、Cry1Aa、Cry1Ba,蛋白点3可能是Cry1Ba的部分片段.表明该菌株有丰富的ICP资源,可作为杀虫应用的候选菌株.
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
姚宝安 王祥 夏雪山 赵俊龙 马丽华 孙明 喻子牛
捻转血矛线虫是世界各国危害牛、羊等反刍动物的主要寄生虫之一.目前虽然有特效的化学药物驱虫,但因其具一定的副作用,寄生虫易产生耐药性,药物易在内品残留,危害人类健康.苏云金芽胞杆菌是一种革兰氏阳性细菌,它在形成芽胞的同时,在菌体一端形成一种蛋白性质伴胞晶体,它对昆虫有较高毒力,对人畜安全无毒,不污染环境,成本低,已广泛用于防治农、林、仓贮害虫和医学
[期刊] 林业科学
[作者]
陈颖 韩一凡 李铃 田颖川 聂绍基
本研究首先建立了美洲黑杨叶片外植体的再生系统，并利用Ｈｏｒｓｃｈ等人１９８５年发明的叶盘法，将分别带有嵌合基因ＮＰＴＩＩ和１．８ｋｂ或２．１ｋｂＢｔ．基因的土壤杆菌ＬＢＡ４４０４与美洲黑杨叶片共培养。采用３０ｍｇ／ｌ和５０ｍｇ／ｌ两种浓度的卡那霉素筛选转化子，约２８天左右的时间，有不定芽从外植体切口处形成。两种卡那霉素浓度下共形成２７５个伸长芽，存活了１８７株。这１８７株分别进入卡那霉素３０ｍｇ／ｌ，５０ｍｇ／ｌ的生根培养基后，生根率分别为９．６２％和８．０２％。ＰＣＲ反应证明部分植株已成功地进行了转化。
关键词：
美洲黑杨,Bt.基因,转化,PCR反应
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
戴经元 钱江伟 邓英 孙明 喻子牛
用苏云金杆菌菌株ＨＤ－１和７２１６的伴胞晶体蛋白碱解产物作抗原，制备相应抗血清，并用协同凝集反应测定ＨＤ－１和７２１６的晶体蛋白的含量，其最低检测量分别为７８ｎｇ／ｍｌ和１３０ｎｇ／ｍｌ。用生物测定方法测定ＨＤ－１和７２１６经碱溶的晶体蛋白对小菜蛾幼虫的ＬＣ５０值分别为０．４５２μｇ／ｍｌ和０．７６３μｇ／ｍｌ。两种方法测定的结果有一定的相关性。用协同凝集反应测定苏云金杆菌晶体蛋白含量比火箭免疫电泳、环状沉淀反应、双相单扩散反应的灵敏度高，比ＥＬＩＳＡ的灵敏度略低，但操作更简便、快速。
关键词：
苏云金杆菌 晶体蛋白 协同凝集反应
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
鲁松清 喻子牛
在电镜下观察了苏云金芽胞杆菌菌株ＣＴ－４３的芽胞萌发、芽胞和伴胞晶体的形成过程。芽胞萌发分活化、萌动和脱出３个阶段。芽胞形成分为轴丝形成、前芽胞隔膜形成、前芽胞形成、初生细胞壁形成、芽胞外套形成、芽胞衣片层形成和芽胞形成７个阶段。伴胞晶体形成从芽胞形成第２阶段开始，由一些小结晶聚集而成。晶体镶嵌在菌株ＣＴ－４３中很普遍。结合实验对伴胞晶体形成的调控和外膜的形成等进行了讨论。
[期刊] 华北农学报
[作者]
吴会贤 宋萍 王勤英 苏旭东
通过醋酸钠-抗生素筛选法从河北省土壤中筛选得到了苏云金芽孢杆菌新菌株CY1。镜检可观察到伴孢晶体呈小菱形。SDS-PAGE分析结果表明菌株CY1表达的晶体蛋白分子量为130 kDa。利用25对通用引物检测cry1,cry1I,cry7,cry2,cry3,cry4/cry10,cry5,cry6,cry7,cry8,cry9,cry11,cry13/14,cry16/17,cry18,cry19,cry21,cry22,cry24/25,cry26/28,cry27/29,cry30,cry32,cry34/35,cry40基因,仅从CY1菌株中检测出cry7基因,该cry7基因N末端的1 2...
关键词：
苏云金芽胞杆菌 CY1菌株 cry7基因
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
洪玉枝 刘子铎 汤江武 喻子牛
将苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白ＣｒｙⅠＡ基因的高保守区ＥｃｏＲＩ－Ｆ片段重组到ｐＳＥＬＥＣＴ－１载体的ＥｃｏＲＩ位点，构建出能够高效转录ＲＮＡ的探针载体ｐＳＢＰＬ－１。该载体在Ｔ７ＲＮＡ聚合酶作用下，通过ＤＩＧ体外标记转录制备的ＲＮＡ探针，具有灵敏度高，背景清楚，省时等优点，为苏云金芽胞杆菌分子生物学研究，及对鳞翅目有特异毒性高效菌株的筛选提供了一种方便而有效的方法。
关键词：
苏云金芽胞杆菌 体外转录 RNA探针载体
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王祥 姚宝安
苏云金芽胞杆菌的伴胞晶体毒素对捻转血矛线虫第２期幼虫的毒力王祥，姚宝安（华中农业大学畜牧兽医学院，武汉４３００７０）关键词苏云金芽胞杆菌，伴胞晶体毒素，捻转血矛线虫，第二期幼虫ＴＨＥＴＯＸＩＣＩＴＹＯＦＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓＣＲＹ...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
周艳琴 姚宝安 夏雪山 赵俊龙 孙明 喻子牛
将人工感染日本血吸虫尾蚴 45d的家兔主动脉灌注冲虫获得成虫 ,经Earle’s液洗涤 ,加入细胞培养板内 ,用含 10 %牛血清的RPMI 16 40培养液于 37℃、5 %CO2 培养箱中培养 ,苏云金杆菌B 0 0 1、E 0 0 2提取的伴胞晶体毒素 ,以不同浓度加入到各孔中。 2 4h后成虫运动缓慢 ,并有部分死亡 ,随着伴胞晶体毒素作用时间的延长 ,成虫的死亡率也增加。当毒素总蛋白含量为 117.2 9μg/ml时 ,经菌株B 0 0 1晶体毒素作用的成虫死亡率在2 4h时为 87.74% ,48h时为 10 0 % ,LD50 分别为 2 1.42 μg/ml、9.77μg/ml...
[期刊] 华北农学报
[作者]
臧大康 郑桂玲 周洪旭 张媛 李国勋 李长友
以本实验室分离的Bt菌株B-DLL质粒DNA为模板,利用cry8类基因特异性引物JJX5和JJX3扩增出3.5kb的片段,将该片段插入克隆载体pMD 18-T中,筛选获得一个含新基因的克隆pMD-cry8new。序列测定表明,该基因编码区为3 525 bp,编码的蛋白质由1 174个氨基酸残基组成,理论分子量为133.05 kDa,等电点为pH4.69,为弱酸性蛋白。该基因核苷酸序列已在GenBank登录(Accession number:HQ174208),编码的氨基酸序列与Cry8Fa1的同源性最高达99.8%,被国际Btδ-内毒素命名委员会正式命名为Cry8Fa2。将cry8Fa2基因插...
[期刊] 华北农学报
[作者]
宋萍 郭丽伟 苏俊平 王勤英 王晖
对我室所保存的18株含cry7类基因的菌株进行晶体形状、生物活性和蛋白型基因型等进行分析。结果表明:这些菌株能产生菱形、小菱形和不规则形伴胞晶体,SDS-PAGE检测主要蛋白的分子量是130kDa,PCR扩增得到1300bp条带。对马铃薯瓢虫二龄幼虫的生物活性测定结果表明,菌株WZ-9具有很高的杀虫率,72h校正死亡率达到了93.1%;菌株WCG-10活性次之,72h校正死亡率达到44.8%,而其他菌株杀虫活性低或没有活性。对杀虫活性最高的WZ-9菌株扩增全长基因,得到cry7Ab3基因(GenBank Number:BI1015188)。
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