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[期刊] 中国农业科学
[作者]
丁照鑫 王涵祎 曹利娟 郝艳同 申晓鸿 刘京国
【目的】Ｖｉｐ３Ａ是由苏云金芽孢杆菌（ＢＡｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）在对数生长期产生并分泌到胞外的对鳞翅目昆虫有较广杀虫谱的毒素，其在敏感昆虫中肠上的结合受体尚未得到鉴定。利用噬菌体展示技术，论文试图从肽库中筛选到能与Ｖｉｐ３Ａ毒素特异性结合的多肽，为研究Ｖｉｐ３Ａ毒素的杀虫模式提供线索。【方法】将构建的ｐ ｅｔ２８Ａ－Ｖｉｐ３ＡＡ１０表达质粒转化到大肠杆菌Ｂｌ２１（Ｄｅ３）中，经ｉｐｔｇ诱导表达后，用亲和纯化的方法制备Ｖｉｐ３ＡＡ１０，并用胰蛋白酶活化和离子交换层析进一步纯化。以活化的Ｖｉｐ３ＡＡ１０毒素为诱饵，经＂吸附－洗脱－扩繁＂４轮条件逐渐严格的淘选，从噬菌体随机肽库中．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
丁照鑫 王涵祎 曹利娟 郝艳同 申晓鸿 刘京国
【目的】Vip3A是由苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在对数生长期产生并分泌到胞外的对鳞翅目昆虫有较广杀虫谱的毒素,其在敏感昆虫中肠上的结合受体尚未得到鉴定。利用噬菌体展示技术,论文试图从肽库中筛选到能与Vip3A毒素特异性结合的多肽,为研究Vip3A毒素的杀虫模式提供线索。【方法】将构建的p ET28a-Vip3Aa10表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,用亲和纯化的方法制备Vip3Aa10,并用胰蛋白酶活化和离子交换层析进一步纯化。以活化的Vip3Aa10毒素为诱饵,经“吸附-洗脱-扩繁”4轮条件逐渐严格的淘选,从噬菌体随机肽库中...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
邵铁梅 宋福平 李卓夫 张杰 姜声华 刘大群 黄大昉
通过PCR方法筛选160株苏云金芽孢杆菌,其中94株含有zmaR基因。测定了含zmaR基因的菌株培养物上清液对草生欧文氏杆菌(Erwiniaherbicola)的抑菌活性,结果表明有67株菌有抑菌活性,其中21株抑菌活性较高。经鉴定,抑菌活性较高的G03菌株含有cry1Ac、cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab等高毒力杀虫基因,并从G03中克隆了zmaR全长基因,完成了序列测定。该基因编码区为1125bp,由核苷酸序列推导的氨基酸残基组成为375个,分子量为43.5kD,等电点pI4.945。通过载体pET-21b将zmaR基因导入大肠杆菌BL21,可正常表达43.5kD蛋白,并使宿主菌产...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曲晓旭 刘洪霞 高玲 陆兆新 吕凤霞 张充 赵海珍 别小妹
［目的］本文旨在建立一种利用ＰＣＲ技术鉴别抗菌脂肽类型和筛选抗菌脂肽产生菌的快速、准确、灵敏的方法。［方法］以枯草芽孢杆菌（ＢａＣｉｌｌｕｓ ｓｕＢｔｉｌｉｓ）、淀粉液化芽孢杆菌（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａＣｉｅｎｓ）和多黏类芽孢杆菌（ＰａｅｎｉＢａＣｉｌｌｕｓ Ｐｏｌｙｍｙｘａ）的典型菌株为研究对象，针对几种代表性脂肽的合成酶基因设计特异性引物进行ＰＣＲ扩增，并通过测序法验证检测结果的正确性，推测芽孢杆菌生物合成抗菌物质的潜在能力。［结果］ＰＣＲ结果表明：所有检测菌株均具有ｓｕＲｆａＣｔｉｎ合成酶调控基因；除Ｐ．Ｐｏｌｙｍｙｘａ Ｊｓａ－９外，其他菌株均检测到ｆｅｎｇｙＣｉｎ合成酶基因的存．．．
关键词：
抗菌脂肽 芽孢杆菌 调控基因 检测
[期刊] 华北农学报
[作者]
苏旭东 马雯 马晓燕 王雪静 李英军 檀建新
采用温度筛选从云南省刁苓山土壤中分离得到一株伴孢晶体为长菱形的苏云金芽孢杆菌BSH-1。利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE对菌株所含cry基因类型和晶体蛋白的构成进行鉴定、分析,结果表明:菌株BSH-1具有的cry基因组合为:cry1Aa,cry1Ac,cry1Db,cry2Ab,cry1Ia,表达的晶体蛋白有130,70和56 kDa 3种,该蛋白对甜菜夜蛾具有较高杀虫活性,LC50为1.43 ng/mg。该菌株的基因组合类型对构建杀虫基因工程菌具有重要参考价值。
关键词：
苏云金芽孢杆菌 分离 杀虫基因 鉴定
[期刊] 华北农学报
[作者]
王志鑫 束长龙 申培立 苏旭东 李志辉 于妍 张先舟 马雯 檀建新
为发掘对蛴螬有防治作用的苏云金芽孢杆菌及其cry基因,在河北省各县市共采集土壤样品254份,采用温度筛选法分离出Bt菌株42株,经PCR-RFLP方法鉴定,其中10株含有cry8型基因。这些菌株有如下特点:同一菌株含1种或多种质粒;PCR-RFLP鉴定证明有多种cry8基因存在,多数菌株中含2种cry8基因,如cry8E和cry8F常共存于同一菌株中;Cry8杀虫晶体蛋白分子量约为130~140 k Da,晶体形态均为球形。这10株菌采样地点分布于保定、衡水、邯郸、廊坊、唐山和邢台等地,植被类型多样化,说明cry8型Bt菌株在河北省分布广泛,可为蛴螬类害虫的防治提供丰富的Bt资源。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
杜方 纪淑娟 黄新
为建立表面等离子共振传感器检测转基因植物中苏云金芽孢杆菌cry1Ac蛋白的方法,根据生物分子间的相互作用,在金片表面修饰cry1Ac蛋白的特异性单克隆抗体,对不同稀释梯度的cry1Ac蛋白进行检测研究。结果表明:该方法可有效的检测到cry1Ac蛋白,检测灵敏度可达到10ng·mL-1,与cry2A蛋白及CP4-EPSPS蛋白无交叉反应。说明利用表面等离子共振方法检测cry1Ac蛋白操作简单,省时且灵敏度高,特异性强,可用于对cry1Ac蛋白的定量检测。
[期刊] 林业科学
[作者]
戴莲韵
采用砂土管和滤纸片两种保藏方法，对分属31个亚种的61株有代表性的苏云金芽孢杆菌（Bacillusthuringiensis）经过1—23年保存后的菌体存活情况、形态特征及对林业主要害虫舞毒蛾（lymantriadispar）幼虫的杀虫活性进行了试验；并对苏云金芽孢杆菌5个亚种的标准菌株和保存不同年限后的11项生理生化特性及酯酶型进行了测定。
关键词：
苏云金芽孢杆菌 保藏 生物测定
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
戴经元 王波 罗曦霞 喻凌 詹学明 喻子牛
对从中国２０个省（区）采集的１５４２个土壤样品中分离的４１０株苏云金芽孢杆菌进行了血清学鉴定。结果表明，２１８株（５３．２％）属于已知３０个标准Ｈ－血清型中的１５个Ｈ－血清型，即Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５、Ｈ１６、Ｈ１７、Ｈ２２和Ｈ２６。其余的１９２株中，除１７５株为无鞭毛或自凝菌株无法进行血清学鉴定外，１６株（３．９％）的Ｈ－抗原不与已知２７个标准Ｈ－抗血清起交叉反应，其中有４株的Ｈ－抗血清也不与已知２７个标准菌株的Ｈ－抗原起交叉反应；另一菌株无Ｈ－抗原，但其伴孢晶体和芽孢不分离，并连成长链状。这５个菌株生化反应也与Ｈ－血清型１－２７的标准菌株不同...
关键词：
苏云金芽孢杆菌,血清学鉴定,毒力,土壤
[期刊] 华北农学报
[作者]
宋健 曹伟平 王金耀 冯书亮 杜立新
为明确磁处理水对苏云金芽孢杆菌生长的影响,用恒定磁场处理的磁化水配制液体培养基进行苏云金芽孢杆菌菌株的培养,结果表明,在28~50 Gs磁场强度处理水可以提高G-02菌株的产孢量,G-02在43 Gs磁场强度处理水配制的培养基中产孢量最大,达到6.1×108孢子/mL,比对照提高了11%;在7~43 Gs磁场强度内处理水可以提高HD-1菌株的产孢量,HD-1磁场强度处理水配制的培养基中在14 Gs产孢量最大,达到6×108孢子/mL,比对照提高了28%。在43 Gs处理2~12 h的磁处理水可以提高G-02菌株的产孢量,而在14 Gs处理2~14 h的磁处理水可以提高HD-1菌株的产孢量。
关键词：
恒定磁场 苏云金芽孢杆菌 生长
[期刊] 华北农学报
[作者]
杜立新 董明 王容燕 马铭泽 王金耀 曹伟平 宋健 冯书亮
苏云金芽孢杆菌SHJ-5菌株是从黑龙江采集的土样中分离获得的新菌株,对其伴孢晶体形状、基因型、蛋白表达以及杀虫活性进行了系统研究。菌株SHJ-5产生的伴孢晶体形状为钝菱形;利用PCR-RFLP技术对该菌株的基因型进行鉴定,结果表明,该菌株含有cry1Aa、cry1Ea、cry1Be、cry1Ah、cry1Ai、cry2Ab、cry1i和vip3A基因;SDS-PAGE晶体蛋白检测结果显示,该菌株表达130～150 kDa和60 kDa大小蛋白;生物活性测定表明,菌株SHJ-5对棉铃虫和小菜蛾有较高杀虫活性,校正死亡率分别为100%和96.7%。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
杨兆辉 汪子洋 杨文涛 蔡瑜婷 谭伟龙 黄恩炯 张灵玲
乙酰化是蛋白质翻译后修饰的一种重要方式,可参与多种细胞进程,但迄今未见有关乙酰化修饰在Bt中发挥作用的报道.本课题组前期通过对高效杀虫Bt菌株LLP29的基因组进行测序分析,发现该菌株也存在编码乙酰转移酶的基因(如ykkB).为探讨乙酰化修饰在Bt菌株中的作用,以ykkB为靶标,利用无缝克隆技术成功克隆与测序了ykkB基因.通过生物信息学分析,发现该基因编码的蛋白可能是一类N-乙酰转移酶,赖氨酸和亮氨酸含量最高,半胱氨酸含量最低,是一种亲水性蛋白质,且无跨膜区;同时,成功表达、纯化了YkkB蛋白,通过体外自乙酰化分析,证实该蛋白可发挥乙酰基转移的作用.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陆慧慧 林志强 谭万忠 罗华东 鲜菲 毕朝位 余洋 杨宇衡
【目的】分析并鉴定对马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)具强致病性的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)CPB012菌株的杀虫基因型,为充分而有效地利用此生防菌奠定基础。【方法】CPB012菌株在LB培养基上30℃培养2—3 d,用苯酚品红进行晶体染色,观察伴孢晶体形态。cry1—cry10杀虫基因的检测选用技术成熟的PCR-RFLP(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism)法,即对某一类基因(如cry1、cry2…)保守区序列设计通用引物,并引入...
[期刊] 华北农学报
[作者]
张霞 胡玉琴 贾振华 张杰 马宏 宋水山
aiiA基因编码的AiiA蛋白能降解细菌群体感应系统中的信号分子N_酰基高丝氨酸内酯AHLs,从而减弱致病菌对植物的危害。本文将aiiA基因转入到植物根际促生细菌荧光假单胞菌P303中,构建成防治植物细菌和真菌病害的工程菌P303-ss10。通过PCR和RT-PCR鉴定,均获得0.8 kb的目的片断,表明aiiA基因已经导入P303中。室内平板抑菌试验表明,该工程菌保留了出发菌株对多种植物病原真菌的抑制作用;室内离体试验表明该工程菌对马铃薯软腐病和大白菜软腐病都有一定的抑制作用。
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