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[期刊] 中国农业科学
[作者]
陆慧慧 林志强 谭万忠 罗华东 鲜菲 毕朝位 余洋 杨宇衡
【目的】分析并鉴定对马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)具强致病性的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)CPB012菌株的杀虫基因型,为充分而有效地利用此生防菌奠定基础。【方法】CPB012菌株在LB培养基上30℃培养2—3 d,用苯酚品红进行晶体染色,观察伴孢晶体形态。cry1—cry10杀虫基因的检测选用技术成熟的PCR-RFLP(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism)法,即对某一类基因(如cry1、cry2…)保守区序列设计通用引物,并引入...
[期刊] 华北农学报
[作者]
苏旭东 马雯 马晓燕 王雪静 李英军 檀建新
采用温度筛选从云南省刁苓山土壤中分离得到一株伴孢晶体为长菱形的苏云金芽孢杆菌BSH-1。利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE对菌株所含cry基因类型和晶体蛋白的构成进行鉴定、分析,结果表明:菌株BSH-1具有的cry基因组合为:cry1Aa,cry1Ac,cry1Db,cry2Ab,cry1Ia,表达的晶体蛋白有130,70和56 kDa 3种,该蛋白对甜菜夜蛾具有较高杀虫活性,LC50为1.43 ng/mg。该菌株的基因组合类型对构建杀虫基因工程菌具有重要参考价值。
关键词：
苏云金芽孢杆菌 分离 杀虫基因 鉴定
[期刊] 华北农学报
[作者]
杜立新 董明 王容燕 马铭泽 王金耀 曹伟平 宋健 冯书亮
苏云金芽孢杆菌SHJ-5菌株是从黑龙江采集的土样中分离获得的新菌株,对其伴孢晶体形状、基因型、蛋白表达以及杀虫活性进行了系统研究。菌株SHJ-5产生的伴孢晶体形状为钝菱形;利用PCR-RFLP技术对该菌株的基因型进行鉴定,结果表明,该菌株含有cry1Aa、cry1Ea、cry1Be、cry1Ah、cry1Ai、cry2Ab、cry1i和vip3A基因;SDS-PAGE晶体蛋白检测结果显示,该菌株表达130～150 kDa和60 kDa大小蛋白;生物活性测定表明,菌株SHJ-5对棉铃虫和小菜蛾有较高杀虫活性,校正死亡率分别为100%和96.7%。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李怡萍 梁革梅 仵均祥 陈豪 马康生 吴孔明 郭予元
苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白具有高度专一性,其只对靶标害虫有效,对天敌等其他昆虫无害,转Bt基因植物和Bt杀虫剂是目前世界上产量最大、应用最广泛的生物防治技术。通过对Bt的发现和分类、Bt的结构与功能、Bt毒蛋白的杀虫机理、昆虫对Bt的抗性机制及昆虫体内Bt受体蛋白与抗性的关系等研究现状的论述与分析,对Bt作物害虫抗性治理策略和前景进行了展望。
[期刊] 华北农学报
[作者]
胡晓婷 宋健 王容燕 杜立新 曹伟平 王金耀 冯书亮
为了发掘新的Bt资源,从3种不同土壤类型的样品中分离得到了285株苏云金芽孢杆菌菌株。采用杀虫活性测定方法从中获得了13株对铜绿丽金龟幼虫具有高毒力的菌株。利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE蛋白分析法,研究了这13株苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白基因类型和晶体蛋白表达情况。结果显示,有12株均含有编码毒杀铜绿丽金龟幼虫毒素蛋白的cry8Ca基因,而FTL53没有鉴定到已有的基因类型。这13株菌的伴孢晶体都含有分子量为130 kDa的蛋白。本研究为不断发现新型的、具有高毒力的cry毒素基因奠定了基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
雷会霄 宋萍 张毅功 南宫自艳 王勤英
为了发掘新的Bt资源,从河北省不同果园中(板栗、葡萄、枣、梨)采集土样71份,利用醋酸钠-抗生素筛选法从中筛选出41株Bt菌株。采用通用引物进行PCR扩增鉴定基因型,结果表明,从这些菌株中发现6种不同的基因型cry1、cry7、cry8、cry19、cry26-28、cry32,还有2个菌株未鉴定出基因型。通过SDS-PAGE检测显示,大多数Bt菌株主要蛋白条带分子量约为130kDa。生物活性测定结果表明,XPZ-6、XPZ-8、XPZ-9、XPZ-39、XPZ-42菌株对小菜蛾、棉铃虫、玉米螟和美国白蛾具有高活性,其中XPZ-39菌株的杀虫活性最高,对4种鳞翅目害虫的杀虫活性均达到97%以上...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
胡逸超 雷薇 孙建生 李季刚 邹克兴 苏赞 梁伟 蔡联合 陈琦 邹承武
【目的】明确一株具有烟草甲幼虫毒杀作用苏云金芽孢杆菌在蜡样芽孢杆菌群中的进化关系,并对该菌株所携带的cry基因进行鉴定,为其在农业上的开发应用提供参考依据。【方法】对苏云金芽孢杆菌GXZY032菌株的16S rRNA和gyrB基因序列进行PCR扩增测序,并进行相应的进化树分析;使用PCR技术对GXZY032菌株基因组所包含的cry杀虫基因进行鉴定。【结果】菌株GXZY032的16S rRNA序列经PCR扩增得到1.5 kb片段,在进化树中以较低的置信值与多个BtII群菌株聚到一起。gyrB基因序列经PCR扩增并测序得到1.2 kb片段,所构建的进化树有6个置信值较高的分支,构成BtI、BtII、B.cereus I、BtIII、Bt+Bw和Bt+Ba 6个群,其中菌株GXZY032的序列与BtII群聚集一起,置信值为99%。对8种cry基因进行PCR鉴定,结果表明,菌株GXZY032包含cry1、cry2和cry10 3种类型cry基因。【结论】苏云金芽孢杆菌菌株GXZY032属于BtII群,具有cry1、cry2和cry10 3种类型cry杀虫基因。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
戴经元 王波 罗曦霞 喻凌 詹学明 喻子牛
对从中国２０个省（区）采集的１５４２个土壤样品中分离的４１０株苏云金芽孢杆菌进行了血清学鉴定。结果表明，２１８株（５３．２％）属于已知３０个标准Ｈ－血清型中的１５个Ｈ－血清型，即Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５、Ｈ１６、Ｈ１７、Ｈ２２和Ｈ２６。其余的１９２株中，除１７５株为无鞭毛或自凝菌株无法进行血清学鉴定外，１６株（３．９％）的Ｈ－抗原不与已知２７个标准Ｈ－抗血清起交叉反应，其中有４株的Ｈ－抗血清也不与已知２７个标准菌株的Ｈ－抗原起交叉反应；另一菌株无Ｈ－抗原，但其伴孢晶体和芽孢不分离，并连成长链状。这５个菌株生化反应也与Ｈ－血清型１－２７的标准菌株不同...
关键词：
苏云金芽孢杆菌,血清学鉴定,毒力,土壤
[期刊] 湖南农业大学学报
[作者]
李建洪 万秋英 王沫 姜锡权 喻子牛
从韩国不同地区采集的 6 2 0个土壤样品中分离出 6 7株苏云金芽孢杆菌 ,分属于 1 0种不同的血清型 .毒力测定结果表明 ,在 6 7株分离株中 ,35 .82 %的菌株对鳞翅目昆虫具有生物活性 ,2 2 .39%的菌株对双翅目昆虫有毒 ,32 .84%的菌株对鳞翅目和双翅目昆虫都具有杀虫活性 ,8.95 %的菌株为没有杀虫活性的无毒菌株 .其中对鳞翅目昆虫有毒的菌株产生典型的双金字塔形伴孢晶体 ,对双翅目昆虫有毒的菌株和无毒菌株都产生球形伴孢晶体 ,而对鳞翅目和双翅目都有毒的菌株产生双金字塔形或球形伴孢晶体 .用对 cry ,cry ,cry ,cry 和 cry 基因特异性引物...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
杨兆辉 汪子洋 杨文涛 蔡瑜婷 谭伟龙 黄恩炯 张灵玲
乙酰化是蛋白质翻译后修饰的一种重要方式,可参与多种细胞进程,但迄今未见有关乙酰化修饰在Bt中发挥作用的报道.本课题组前期通过对高效杀虫Bt菌株LLP29的基因组进行测序分析,发现该菌株也存在编码乙酰转移酶的基因(如ykkB).为探讨乙酰化修饰在Bt菌株中的作用,以ykkB为靶标,利用无缝克隆技术成功克隆与测序了ykkB基因.通过生物信息学分析,发现该基因编码的蛋白可能是一类N-乙酰转移酶,赖氨酸和亮氨酸含量最高,半胱氨酸含量最低,是一种亲水性蛋白质,且无跨膜区;同时,成功表达、纯化了YkkB蛋白,通过体外自乙酰化分析,证实该蛋白可发挥乙酰基转移的作用.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
邵铁梅 宋福平 李卓夫 张杰 姜声华 刘大群 黄大昉
通过PCR方法筛选160株苏云金芽孢杆菌,其中94株含有zmaR基因。测定了含zmaR基因的菌株培养物上清液对草生欧文氏杆菌(Erwiniaherbicola)的抑菌活性,结果表明有67株菌有抑菌活性,其中21株抑菌活性较高。经鉴定,抑菌活性较高的G03菌株含有cry1Ac、cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab等高毒力杀虫基因,并从G03中克隆了zmaR全长基因,完成了序列测定。该基因编码区为1125bp,由核苷酸序列推导的氨基酸残基组成为375个,分子量为43.5kD,等电点pI4.945。通过载体pET-21b将zmaR基因导入大肠杆菌BL21,可正常表达43.5kD蛋白,并使宿主菌产...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王广君 张杰 吴隽 宋福平 黄大昉
通过对Cry1Ba3蛋白序列的分析,以及与已知Cry蛋白比较,设计了6对特异性引物,通过PCR扩增获得6种不同长度的cry1Ba3基因片段。将这些基因片段克隆到pET-21b载体上,导入大肠杆菌BL21中进行诱导表达,最终得到6种不同长度的Cry1Ba3蛋白片段。采用浸叶法检测这些蛋白片段对小菜蛾的杀虫活性,研究结果表明含有第1～685位和含有第22～655位氨基酸的蛋白片段对小菜蛾的毒性,与全长Cry1Ba3蛋白相比,没有改变;含有第54～655位氨基酸的蛋白片段对小菜蛾的毒力明显降低;而含有第22～627位和含有第85～655位氨基酸的蛋白片段完全丧失了对小菜蛾的活性。上述结果表明Cry1...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
张巧铃 邱淑惠 张永嵘 黄天培
从新疆某铀矿厂土样中分离出1株芽孢杆菌,初步确定为苏云金芽孢杆菌(Bt),命名为BRC-ZYR3.该菌株含有3种cry1类基因(cry1Ba、cry1Bb、cry1Be/1Bf)和2种cry9类基因(cry9Ca和cry9Da).Bt BRC-ZYR3可产生5种杀虫晶体蛋白,分别为130、70、50、30和25 ku.此外,该菌株能耐受25 mg·L-1Cr(VI),并在72 h内将其还原至3.8 mg·L-1.
[期刊] 西南农业学报
[作者]
赵直 吴钢 王闵霞 朱旭东 蒲志刚 张志勇 彭正松 蔡平钟
以分离的3株苏云金芽孢杆菌质粒为模板,通过设计一对特异引物,PCR扩增得到3条全长3.6 kb的基因序列,其各自都包含一个完整的开放阅读框,编码序列全长分别是3468、3450、2697 bp(Genebank登录号分别为GQ385073,GQ385074,GQ385075);它们与cry1A类基因同源性都高达95%以上;分别编码1159、1150和902个氨基酸。并在此基础上采用生物信息学方法对这3个基因编码蛋白从氨基酸组成、理化性质、跨膜结构域、疏水性/亲水性、亚细胞定位、跨膜结构域以及功能域等方面进行了预测和分析。为转基因抗虫植物和微生物杀虫工程菌的构建提供了基因来源。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王志鑫 束长龙 申培立 苏旭东 李志辉 于妍 张先舟 马雯 檀建新
为发掘对蛴螬有防治作用的苏云金芽孢杆菌及其cry基因,在河北省各县市共采集土壤样品254份,采用温度筛选法分离出Bt菌株42株,经PCR-RFLP方法鉴定,其中10株含有cry8型基因。这些菌株有如下特点:同一菌株含1种或多种质粒;PCR-RFLP鉴定证明有多种cry8基因存在,多数菌株中含2种cry8基因,如cry8E和cry8F常共存于同一菌株中;Cry8杀虫晶体蛋白分子量约为130~140 k Da,晶体形态均为球形。这10株菌采样地点分布于保定、衡水、邯郸、廊坊、唐山和邢台等地,植被类型多样化,说明cry8型Bt菌株在河北省分布广泛,可为蛴螬类害虫的防治提供丰富的Bt资源。
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