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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李怡萍 梁革梅 仵均祥 陈豪 马康生 吴孔明 郭予元
苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白具有高度专一性,其只对靶标害虫有效,对天敌等其他昆虫无害,转Bt基因植物和Bt杀虫剂是目前世界上产量最大、应用最广泛的生物防治技术。通过对Bt的发现和分类、Bt的结构与功能、Bt毒蛋白的杀虫机理、昆虫对Bt的抗性机制及昆虫体内Bt受体蛋白与抗性的关系等研究现状的论述与分析,对Bt作物害虫抗性治理策略和前景进行了展望。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陆慧慧 林志强 谭万忠 罗华东 鲜菲 毕朝位 余洋 杨宇衡
【目的】分析并鉴定对马铃薯甲虫(Leptinotarsa decemlineata)具强致病性的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)CPB012菌株的杀虫基因型,为充分而有效地利用此生防菌奠定基础。【方法】CPB012菌株在LB培养基上30℃培养2—3 d,用苯酚品红进行晶体染色,观察伴孢晶体形态。cry1—cry10杀虫基因的检测选用技术成熟的PCR-RFLP(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism)法,即对某一类基因(如cry1、cry2…)保守区序列设计通用引物,并引入...
[期刊] 华北农学报
[作者]
苏旭东 马雯 马晓燕 王雪静 李英军 檀建新
采用温度筛选从云南省刁苓山土壤中分离得到一株伴孢晶体为长菱形的苏云金芽孢杆菌BSH-1。利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE对菌株所含cry基因类型和晶体蛋白的构成进行鉴定、分析,结果表明:菌株BSH-1具有的cry基因组合为:cry1Aa,cry1Ac,cry1Db,cry2Ab,cry1Ia,表达的晶体蛋白有130,70和56 kDa 3种,该蛋白对甜菜夜蛾具有较高杀虫活性,LC50为1.43 ng/mg。该菌株的基因组合类型对构建杀虫基因工程菌具有重要参考价值。
关键词：
苏云金芽孢杆菌 分离 杀虫基因 鉴定
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王广君 张杰 吴隽 宋福平 黄大昉
通过对Cry1Ba3蛋白序列的分析,以及与已知Cry蛋白比较,设计了6对特异性引物,通过PCR扩增获得6种不同长度的cry1Ba3基因片段。将这些基因片段克隆到pET-21b载体上,导入大肠杆菌BL21中进行诱导表达,最终得到6种不同长度的Cry1Ba3蛋白片段。采用浸叶法检测这些蛋白片段对小菜蛾的杀虫活性,研究结果表明含有第1～685位和含有第22～655位氨基酸的蛋白片段对小菜蛾的毒性,与全长Cry1Ba3蛋白相比,没有改变;含有第54～655位氨基酸的蛋白片段对小菜蛾的毒力明显降低;而含有第22～627位和含有第85～655位氨基酸的蛋白片段完全丧失了对小菜蛾的活性。上述结果表明Cry1...
[期刊] 华北农学报
[作者]
杜立新 董明 王容燕 马铭泽 王金耀 曹伟平 宋健 冯书亮
苏云金芽孢杆菌SHJ-5菌株是从黑龙江采集的土样中分离获得的新菌株,对其伴孢晶体形状、基因型、蛋白表达以及杀虫活性进行了系统研究。菌株SHJ-5产生的伴孢晶体形状为钝菱形;利用PCR-RFLP技术对该菌株的基因型进行鉴定,结果表明,该菌株含有cry1Aa、cry1Ea、cry1Be、cry1Ah、cry1Ai、cry2Ab、cry1i和vip3A基因;SDS-PAGE晶体蛋白检测结果显示,该菌株表达130～150 kDa和60 kDa大小蛋白;生物活性测定表明,菌株SHJ-5对棉铃虫和小菜蛾有较高杀虫活性,校正死亡率分别为100%和96.7%。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
邵铁梅 宋福平 李卓夫 张杰 姜声华 刘大群 黄大昉
通过PCR方法筛选160株苏云金芽孢杆菌,其中94株含有zmaR基因。测定了含zmaR基因的菌株培养物上清液对草生欧文氏杆菌(Erwiniaherbicola)的抑菌活性,结果表明有67株菌有抑菌活性,其中21株抑菌活性较高。经鉴定,抑菌活性较高的G03菌株含有cry1Ac、cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab等高毒力杀虫基因,并从G03中克隆了zmaR全长基因,完成了序列测定。该基因编码区为1125bp,由核苷酸序列推导的氨基酸残基组成为375个,分子量为43.5kD,等电点pI4.945。通过载体pET-21b将zmaR基因导入大肠杆菌BL21,可正常表达43.5kD蛋白,并使宿主菌产...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
李恩杰 李娜 王青华 张永安 王玉珠 曲良建
[目的]探究伊氏杀线真菌与苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)对松材线虫的联合毒力。[方法]使用Esteya vermicola孢子悬浮液与Bt发酵液处理松材线虫,通过线虫的形态变化、死亡率及死亡速度3个方面测定E.vermicola与Bt联合对松材线虫的影响。[结果]经过E.vermicola孢子悬浮液处理过的线虫会出现内容物渗漏,体腔收缩、弯曲、断裂的现象;高浓度的E.vermicola孢子悬浮液与Bt发酵液联合处理松材线虫可以明显地提高线虫的死亡率,最高可以达到100%;联合处理的线虫死亡速度较快,随着处理时间的延长,死亡率会一直呈上升的趋势。[结论]应用这两种生防微生物在合适的浓度下混配能够在较短时间内提高松材线虫的死亡率。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
赵直 吴钢 王闵霞 朱旭东 蒲志刚 张志勇 彭正松 蔡平钟
以分离的3株苏云金芽孢杆菌质粒为模板,通过设计一对特异引物,PCR扩增得到3条全长3.6 kb的基因序列,其各自都包含一个完整的开放阅读框,编码序列全长分别是3468、3450、2697 bp(Genebank登录号分别为GQ385073,GQ385074,GQ385075);它们与cry1A类基因同源性都高达95%以上;分别编码1159、1150和902个氨基酸。并在此基础上采用生物信息学方法对这3个基因编码蛋白从氨基酸组成、理化性质、跨膜结构域、疏水性/亲水性、亚细胞定位、跨膜结构域以及功能域等方面进行了预测和分析。为转基因抗虫植物和微生物杀虫工程菌的构建提供了基因来源。
[期刊] 华北农学报
[作者]
胡晓婷 宋健 王容燕 杜立新 曹伟平 王金耀 冯书亮
为了发掘新的Bt资源,从3种不同土壤类型的样品中分离得到了285株苏云金芽孢杆菌菌株。采用杀虫活性测定方法从中获得了13株对铜绿丽金龟幼虫具有高毒力的菌株。利用PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE蛋白分析法,研究了这13株苏云金芽孢杆菌的杀虫晶体蛋白基因类型和晶体蛋白表达情况。结果显示,有12株均含有编码毒杀铜绿丽金龟幼虫毒素蛋白的cry8Ca基因,而FTL53没有鉴定到已有的基因类型。这13株菌的伴孢晶体都含有分子量为130 kDa的蛋白。本研究为不断发现新型的、具有高毒力的cry毒素基因奠定了基础。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
黄衍章 李世广 王转红
采用半人工饲料混药法,观察了苏云金芽孢杆菌对初期性储粮害虫印度谷螟Plodia interpunctella(Hbner)幼虫生长发育的影响。结果表明:苏云金芽孢杆菌对印度谷螟幼虫的毒杀作用并不明显,当苏云金芽孢杆菌剂量≤20000IU/g时,处理7d后对印度谷螟幼虫的毒杀率与对照没有显著差异;当苏云金芽孢杆菌剂量≥2500IU/g时,其对印度谷螟的化蛹和羽化均表现出明显的抑制作用。
关键词：
苏云金芽孢杆菌 印度谷螟 生长发育
[期刊] 林业科学
[作者]
戴莲韵
采用砂土管和滤纸片两种保藏方法，对分属31个亚种的61株有代表性的苏云金芽孢杆菌（Bacillusthuringiensis）经过1—23年保存后的菌体存活情况、形态特征及对林业主要害虫舞毒蛾（lymantriadispar）幼虫的杀虫活性进行了试验；并对苏云金芽孢杆菌5个亚种的标准菌株和保存不同年限后的11项生理生化特性及酯酶型进行了测定。
关键词：
苏云金芽孢杆菌 保藏 生物测定
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
沙莉 章淘 黄张敏 黄志鹏 关雄
分离自武夷山土壤的苏云金芽胞杆菌BRC-HZP7菌株对小菜蛾和甜菜夜蛾幼虫有较好的毒杀作用.对该菌株进行了生理生化测定、cry基因的PCR-RFLP检测,以及通过SDS-PAGE检测晶体蛋白,并对蛋白点进行肽段指纹图谱鉴定.结果表明该菌株含有cry1Aa、cry1Ba、cry1Ia、cry2Ab、cry2Ac、cry2Ae等6种cry基因.从选取的8个蛋白条带肽段指纹图谱可以看出:标记3、6、7、8的4个蛋白点都是杀虫晶体蛋白,蛋白点6、7、8分别鉴定为Cry2Aa、Cry1Aa、Cry1Ba,蛋白点3可能是Cry1Ba的部分片段.表明该菌株有丰富的ICP资源,可作为杀虫应用的候选菌株.
[期刊] 西南农业学报
[作者]
胡逸超 雷薇 孙建生 李季刚 邹克兴 苏赞 梁伟 蔡联合 陈琦 邹承武
【目的】明确一株具有烟草甲幼虫毒杀作用苏云金芽孢杆菌在蜡样芽孢杆菌群中的进化关系,并对该菌株所携带的cry基因进行鉴定,为其在农业上的开发应用提供参考依据。【方法】对苏云金芽孢杆菌GXZY032菌株的16S rRNA和gyrB基因序列进行PCR扩增测序,并进行相应的进化树分析;使用PCR技术对GXZY032菌株基因组所包含的cry杀虫基因进行鉴定。【结果】菌株GXZY032的16S rRNA序列经PCR扩增得到1.5 kb片段,在进化树中以较低的置信值与多个BtII群菌株聚到一起。gyrB基因序列经PCR扩增并测序得到1.2 kb片段,所构建的进化树有6个置信值较高的分支,构成BtI、BtII、B.cereus I、BtIII、Bt+Bw和Bt+Ba 6个群,其中菌株GXZY032的序列与BtII群聚集一起,置信值为99%。对8种cry基因进行PCR鉴定,结果表明,菌株GXZY032包含cry1、cry2和cry10 3种类型cry基因。【结论】苏云金芽孢杆菌菌株GXZY032属于BtII群,具有cry1、cry2和cry10 3种类型cry杀虫基因。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
戴经元 王波 罗曦霞 喻凌 詹学明 喻子牛
对从中国２０个省（区）采集的１５４２个土壤样品中分离的４１０株苏云金芽孢杆菌进行了血清学鉴定。结果表明，２１８株（５３．２％）属于已知３０个标准Ｈ－血清型中的１５个Ｈ－血清型，即Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５、Ｈ１６、Ｈ１７、Ｈ２２和Ｈ２６。其余的１９２株中，除１７５株为无鞭毛或自凝菌株无法进行血清学鉴定外，１６株（３．９％）的Ｈ－抗原不与已知２７个标准Ｈ－抗血清起交叉反应，其中有４株的Ｈ－抗血清也不与已知２７个标准菌株的Ｈ－抗原起交叉反应；另一菌株无Ｈ－抗原，但其伴孢晶体和芽孢不分离，并连成长链状。这５个菌株生化反应也与Ｈ－血清型１－２７的标准菌株不同...
关键词：
苏云金芽孢杆菌,血清学鉴定,毒力,土壤
[期刊] 华北农学报
[作者]
宋健 曹伟平 王金耀 冯书亮 杜立新
为明确磁处理水对苏云金芽孢杆菌生长的影响,用恒定磁场处理的磁化水配制液体培养基进行苏云金芽孢杆菌菌株的培养,结果表明,在28~50 Gs磁场强度处理水可以提高G-02菌株的产孢量,G-02在43 Gs磁场强度处理水配制的培养基中产孢量最大,达到6.1×108孢子/mL,比对照提高了11%;在7~43 Gs磁场强度内处理水可以提高HD-1菌株的产孢量,HD-1磁场强度处理水配制的培养基中在14 Gs产孢量最大,达到6×108孢子/mL,比对照提高了28%。在43 Gs处理2~12 h的磁处理水可以提高G-02菌株的产孢量,而在14 Gs处理2~14 h的磁处理水可以提高HD-1菌株的产孢量。
关键词：
恒定磁场 苏云金芽孢杆菌 生长
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