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[期刊] 华北农学报
[作者]
申建茹 郭巍 张霞 李晶
利用PCR方法检测vip1A/vip2A基因在野生型Bt菌株中的分布,进行基因片段的克隆和序列分析。结合cry1基因的PCR-RFLP基因型鉴定体系,分析与vip1A/vip2A基因有联系的cry1类基因。结果表明,分离保存的171株野生型Bt菌株中,有20株菌株含有vip1A/vip2A基因,分布率为11.69%。成功克隆了菌株Bt16的vip1A/vip2A基因片段,命名为vip1A/vip2A-16,GenBank登录号为EU594327。cry1基因的PCR-RFLP鉴定结果表明,该20株菌株均含有cry1Fa基因,说明vip1A/vip2A基因与cry1Fa可能具有某种联系。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
吴丽云 何金清 周勇 陈国荣 张琳 张永嵘 吴松清 关雄
从40个样品中分离到112株芽孢菌,其中有2株为Bt,占1.8%;从城市污水和啤酒厂生物处理系统中分别分离到1株Bt:采用cry1-cry11、cyt、vip3A、aiiA和inhA引物对BRC-WLY1和BRC-WLY2进行PCR扩增,发现2株Bt含有cry1(cry1Ag、cry1Ba、cry1Gb、cry1La)、cry2Ac、vip3A、aiiA杀虫基因,其中BRC-WLY1还含有inhA基因.
[期刊] 华北农学报
[作者]
吴会贤 宋萍 王勤英 苏旭东
通过醋酸钠-抗生素筛选法从河北省土壤中筛选得到了苏云金芽孢杆菌新菌株CY1。镜检可观察到伴孢晶体呈小菱形。SDS-PAGE分析结果表明菌株CY1表达的晶体蛋白分子量为130 kDa。利用25对通用引物检测cry1,cry1I,cry7,cry2,cry3,cry4/cry10,cry5,cry6,cry7,cry8,cry9,cry11,cry13/14,cry16/17,cry18,cry19,cry21,cry22,cry24/25,cry26/28,cry27/29,cry30,cry32,cry34/35,cry40基因,仅从CY1菌株中检测出cry7基因,该cry7基因N末端的1 2...
关键词：
苏云金芽胞杆菌 CY1菌株 cry7基因
[期刊] 华北农学报
[作者]
宋萍 郭丽伟 苏俊平 王勤英
苏云金杆菌XPZ-9菌株是从土壤中分离的对鳞翅目幼虫有特异杀虫活性的新菌株。光学显微镜下观察到该菌株可产生菱形和圆形伴胞晶体,SDS-PAGE检测表达的主要蛋白条带分子量约为70 kDa。PCR-RFLP分析结果表明该菌株含有新基因cry1Ah。生物活性测定表明该菌株对鳞翅目害虫棉铃虫、小菜蛾、亚洲玉米螟和美国白蛾的二龄幼虫都具有较强的杀虫活性。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
赵直 吴钢 王闵霞 朱旭东 蒲志刚 张志勇 彭正松 蔡平钟
以分离的3株苏云金芽孢杆菌质粒为模板,通过设计一对特异引物,PCR扩增得到3条全长3.6 kb的基因序列,其各自都包含一个完整的开放阅读框,编码序列全长分别是3468、3450、2697 bp(Genebank登录号分别为GQ385073,GQ385074,GQ385075);它们与cry1A类基因同源性都高达95%以上;分别编码1159、1150和902个氨基酸。并在此基础上采用生物信息学方法对这3个基因编码蛋白从氨基酸组成、理化性质、跨膜结构域、疏水性/亲水性、亚细胞定位、跨膜结构域以及功能域等方面进行了预测和分析。为转基因抗虫植物和微生物杀虫工程菌的构建提供了基因来源。
[期刊] 华北农学报
[作者]
冯静静 郭巍 刘廷辉 孙永祥 孙伟明 徐大庆
克隆对鞘翅目害虫有毒力的B t新菌株GW S7的cry7Ab8基因,并对该基因进行表达和杀虫活性的研究。利用全长PCR方法克隆cry7Ab8基因,将cry7Ab8基因插入到表达载体pET28b,获得重组质粒pETcry7Ab8,转化E.coliBL21(DE3),诱导后表达130 kDa的蛋白。将cry7Ab8基因连接到大肠杆菌-苏云金杆菌的穿梭载体pSXY422b,获得重组穿梭质粒pScry7Ab8,电激转化到苏云金杆菌无晶体突变株HD73-(cry-),获得工程菌B ioHD7Ab8,表达蛋白后进行生物活性测定。生物活性测定结果显示Cry7Ab8蛋白对马铃薯瓢虫二龄幼虫有较强的杀虫活性,L...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王清锋 喻子牛
利用ＰＣＲ片段延伸连接技术将ｃｒｙ１Ｅ的原启动子准确地更换为ｃｒｙ３Ａ启动子，重组ｃｒｙ１Ｅ经载体ｐＨＴ３１５克隆至枯草芽胞杆菌无芽胞突变株１Ｓ８和苏云金杆菌以色列亚种无晶体突变株４Ｑ７，获得重组菌３Ａ１ＥＢｓ和３Ａ１ＥＢｔ。聚丙稀酰胺凝胶电泳和生物测定表明，克隆改造后的ｃｒｙ１Ｅ可表达，表达的Ｃｒｙ１Ｅ对海灰翅夜蛾有毒（幼虫死亡率６０％～７０％）。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
吴昌标
从5种草食性哺乳动物的粪便中筛选获得8株苏云金芽胞杆菌(Bt);并用聚合酶链式反应—限制性酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)鉴定体系鉴定各菌株的cry基因型.结果表明:BRC-WCB1、BRC-WCB2、BRC-WCB3、BRC-WCB8同时含有cry1和cry2基因;BRC-WCB6仅含有cry1I基因;BRC-WCB5含有cry3基因,但未出现预知的酶切条带;而BRC-WCB4无任何PCR扩增产物.
关键词：
苏云金芽胞杆菌 动物粪便 基因鉴定
[期刊] 华北农学报
[作者]
王志鑫 束长龙 申培立 苏旭东 李志辉 于妍 张先舟 马雯 檀建新
为发掘对蛴螬有防治作用的苏云金芽孢杆菌及其cry基因,在河北省各县市共采集土壤样品254份,采用温度筛选法分离出Bt菌株42株,经PCR-RFLP方法鉴定,其中10株含有cry8型基因。这些菌株有如下特点:同一菌株含1种或多种质粒;PCR-RFLP鉴定证明有多种cry8基因存在,多数菌株中含2种cry8基因,如cry8E和cry8F常共存于同一菌株中;Cry8杀虫晶体蛋白分子量约为130~140 k Da,晶体形态均为球形。这10株菌采样地点分布于保定、衡水、邯郸、廊坊、唐山和邢台等地,植被类型多样化,说明cry8型Bt菌株在河北省分布广泛,可为蛴螬类害虫的防治提供丰富的Bt资源。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王伟 郭巍 徐大庆 孙伟明 刘大群 李瑞军
Cry8Ea2蛋白是一种新型苏云金杆菌杀虫晶体蛋白。通过穿梭载体pSXY422b将cry8Ea2导入Bt无晶体突变菌株中,获得工程菌HD8Ea2。Cry8Ea2蛋白在工程菌中获得表达。通过分子筛层析,成功获得纯化的130 kDa活性毒素蛋白。用改进的生物活性测定方法进行Cry8Ea2蛋白对华北大黑鳃金龟和暗黑鳃金龟一龄幼虫的杀虫活性测定,LC50分别为0.267 9μg/mL和0.071 9μg/mL。研究首次发现Cry8Ea2蛋白对华北大黑鳃金龟具有较高毒力,拓展了该蛋白的杀虫谱,为转基因工程提供了新资源。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
杜方 纪淑娟 黄新
为建立表面等离子共振传感器检测转基因植物中苏云金芽孢杆菌cry1Ac蛋白的方法,根据生物分子间的相互作用,在金片表面修饰cry1Ac蛋白的特异性单克隆抗体,对不同稀释梯度的cry1Ac蛋白进行检测研究。结果表明:该方法可有效的检测到cry1Ac蛋白,检测灵敏度可达到10ng·mL-1,与cry2A蛋白及CP4-EPSPS蛋白无交叉反应。说明利用表面等离子共振方法检测cry1Ac蛋白操作简单,省时且灵敏度高,特异性强,可用于对cry1Ac蛋白的定量检测。
[期刊] 华北农学报
[作者]
宋萍 郭丽伟 苏俊平 王勤英 王晖
对我室所保存的18株含cry7类基因的菌株进行晶体形状、生物活性和蛋白型基因型等进行分析。结果表明:这些菌株能产生菱形、小菱形和不规则形伴胞晶体,SDS-PAGE检测主要蛋白的分子量是130kDa,PCR扩增得到1300bp条带。对马铃薯瓢虫二龄幼虫的生物活性测定结果表明,菌株WZ-9具有很高的杀虫率,72h校正死亡率达到了93.1%;菌株WCG-10活性次之,72h校正死亡率达到44.8%,而其他菌株杀虫活性低或没有活性。对杀虫活性最高的WZ-9菌株扩增全长基因,得到cry7Ab3基因(GenBank Number:BI1015188)。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
洪玉枝 刘子铎 汤江武 喻子牛
将苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白ＣｒｙⅠＡ基因的高保守区ＥｃｏＲＩ－Ｆ片段重组到ｐＳＥＬＥＣＴ－１载体的ＥｃｏＲＩ位点，构建出能够高效转录ＲＮＡ的探针载体ｐＳＢＰＬ－１。该载体在Ｔ７ＲＮＡ聚合酶作用下，通过ＤＩＧ体外标记转录制备的ＲＮＡ探针，具有灵敏度高，背景清楚，省时等优点，为苏云金芽胞杆菌分子生物学研究，及对鳞翅目有特异毒性高效菌株的筛选提供了一种方便而有效的方法。
关键词：
苏云金芽胞杆菌 体外转录 RNA探针载体
[期刊] 中国农业科学
[作者]
丁照鑫 王涵祎 曹利娟 郝艳同 申晓鸿 刘京国
【目的】Ｖｉｐ３Ａ是由苏云金芽孢杆菌（ＢＡｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）在对数生长期产生并分泌到胞外的对鳞翅目昆虫有较广杀虫谱的毒素，其在敏感昆虫中肠上的结合受体尚未得到鉴定。利用噬菌体展示技术，论文试图从肽库中筛选到能与Ｖｉｐ３Ａ毒素特异性结合的多肽，为研究Ｖｉｐ３Ａ毒素的杀虫模式提供线索。【方法】将构建的ｐ ｅｔ２８Ａ－Ｖｉｐ３ＡＡ１０表达质粒转化到大肠杆菌Ｂｌ２１（Ｄｅ３）中，经ｉｐｔｇ诱导表达后，用亲和纯化的方法制备Ｖｉｐ３ＡＡ１０，并用胰蛋白酶活化和离子交换层析进一步纯化。以活化的Ｖｉｐ３ＡＡ１０毒素为诱饵，经＂吸附－洗脱－扩繁＂４轮条件逐渐严格的淘选，从噬菌体随机肽库中．．．
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