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[期刊] 水产学报
[作者]
何夙旭 王全民 黄路 周志刚
为探讨芽孢杆菌潜在的淬灭靶点，本研究通过芽孢杆菌Ｒ１与嗜水气单胞菌ＮＪ－１共培养，并对ＮＪ－１生物量、信号分子产生量、毒力因子基因和群体感应（ＱＳ）关键调控基因表达量进行检测。结果显示：１ＮＪ－１单独培养时，信号分子ＢＨＬ和ＨＨＬ的产量与ＮＪ－１生长趋势一致，在２７ Ｈ时达到峰值并启动Ｌｕｘ Ｒ表达，进而调控毒力因子金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、肠毒素、气溶素和血溶素等表达，其在２７～３０ Ｈ时呈现峰值表达，通路ＱＳｅ Ｂ在２７～３０ Ｈ启动表达，４８ Ｈ时达到峰值，而种间调控Ｌｕｘ Ｓ基因表达一直处于低水平状态；２与芽孢杆菌Ｒ１共培养时，仅痕量ＡＨＬＳ信号分子被检出，毒力因子相关基因表达量均显著．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
张皎皎 马富平 李艳红 吴正理 姚维志
为优化嗜水气单胞菌拮抗菌——甲基营养型芽孢杆菌WM-1的发酵条件,获得抑菌物质产生的最佳培养基配方和培养条件,本实验以嗜水气单胞菌为指示菌,以发酵上清液的抑菌活性为检测指标,采用单因素和正交实验设计,对菌株WM-1的发酵条件进行优化。结果显示,菌株WM-1最适发酵培养基为可溶性淀粉1.0%、牛肉膏1.5%、硫酸镁0.07%、磷酸氢二钾0.05%;最佳发酵条件为初始pH 7.5、培养温度30°C、装液量20%、摇床转速210 r/min、培养时间48 h。在最适培养基和最佳发酵条件下,菌株WM-1发酵液抑菌圈直径达(22.5±0.50)mm,抑菌活性比优化前提高了40.6%。本研究为嗜水气单胞菌的防治提供了新的材料、为甲基营养型芽孢杆菌应用于嗜水气单胞菌的生物防控提供了理论基础。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
彭小云 刘红 陈孝煊 张棋 袁娟 刘佳佳 吴志新
将嗜水气单胞菌粗脂多糖(C-LPS)和大肠杆菌脂多糖(E-LPS)分别经腹腔注射草鱼(剂量为4mg/kg),以注射PBS为对照。48h后,分别提取各组草鱼的头肾、脾脏、肾脏、肝脏和肠组织中的总RNA,利用Real-time PCR的方法检测不同组织中TNF-α、IL-1β、IL-10和TLR4基因的表达情况。结果显示,与对照组相比,头肾中,TNF-α和IL-1β的表达量在E-LPS组显著升高,而IL-10的表达显著下降;C-LPS组TNF-α和IL-10的表达量显著性升高;TLR4在两试验组均有显著性降低。脾脏中,TNF-α、IL-1β和IL-10在E-LPS组与对照组无显著差异,而IL-1β...
[期刊] 水产学报
[作者]
王彦波 任真真 张岩 傅玲琳
为了筛选能提高水产动物对嗜水气单胞菌抗病性的益生菌，并研究其免疫调节的作用机制。将５种乳酸菌与斑马鱼ＺＦ－４细胞共培养后通过荧光定量ＰＣＲ方法检测细胞因子ＮＦκＢ、ＴＮＦ－α和ＩＬ－１０的表达量，并用流式细胞仪检测被嗜水气单胞菌ＮＪ－１攻毒后的细胞凋亡率来筛选对ＺＦ－４细胞保护性最显著的乳酸菌，将其添加至模式生物斑马鱼饲料中饲喂２８ ｄ后，用嗜水气单胞菌ＮＪ－１攻毒并检测斑马鱼肠道中促炎性细胞因子ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和抗炎性细胞因子ＩＬ－１０的表达情况，并计算斑马鱼被攻毒后的累积死亡率。结果显示，５种乳酸菌分别与细胞共培养后，芽孢乳酸菌０９．７１２能明显提高ＺＦ－４细胞ＮＦκＢ、ＴＮＦ－α和．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孔维光 吴志新 李思思 赵慧 李锡阁 陈孝煊
为探讨益生性枯草芽孢杆菌对肠上皮细胞黏附及对嗜水气单胞菌的抑制作用,以草鱼肠上皮细胞为研究对象,检测了枯草芽孢杆菌对肠上皮细胞的黏附率、对嗜水气单胞菌的黏附抑制率和对各种生理生化指标的影响。结果显示:枯草芽孢杆菌对草鱼肠上皮细胞形态、细胞中四甲基偶氮唑盐(MTT)OD值、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(AKP)和谷草转氨酶(GOT)活性等各种生理指标无显著影响,但在孵育3h和6h后分别显著降低了Na+,K+-ATP酶和谷丙转氨酶(GPT)的活性;与嗜水气单胞菌孵育3h后,肠上皮细胞由椭圆变成不规则形态,
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
陈江凤 王广军 郁二蒙
为探讨碳酸氢钠对嗜水气单胞菌毒力基因表达的影响,利用荧光定量PCR技术,以未添加碳酸氢钠的嗜水气单胞菌为对照组,添加0.024、0.048、0.072、0.096和0.120 mol/L碳酸氢钠的嗜水气单胞菌为实验组,对嗜水气单胞菌的3个主要毒力基因——溶血素基因(AHH-1)、气溶素基因(Aer A)和弹性蛋白酶基因(ahyB)进行相对表达分析。结果表明,5个实验组嗜水气单胞菌的AHH-1、AerA和ahyB表达量均显著低于对照组。且随着碳酸氢钠浓度的增加,基因表达呈逐渐下调趋势。人工感染结果表明,添加
[期刊] 水产学报
[作者]
何夙旭 张美超 徐俐 杨雅麟 李青 周志刚
为评价斑马鱼口服高丝氨酸内脂酶AI-96对嗜水气单胞菌NJ-1浸浴攻毒的保护效应,实验设置基础料与实验料两组饲料,实验料是在基础料中按3 U/g饲料添加N酰基高丝氨酸内酯酶AI-96(以下简称AI-96),通过高浓度(2.5×108cfu/mL)及低浓度(0.7×108cfu/mL)两组剂量的嗜水气单胞菌NJ-1(以下简称NJ-1)分别浸浴攻毒斑马鱼,在12 h、24 h、3 d、7 d和14 d取鳃丝、肠道壁、肝和肾样,采用实时荧光定量PCR法检测取样器官中NJ-1量,并统计攻毒周期内的死亡率,来评价高丝氨酸内酯酶AI-96的保护力。结果显示:在攻毒周期内所取组织内均检测到NJ-1,按菌数肠...
[期刊] 水产学报
[作者]
张美超 曹雅男 姚斌 白东清 周志刚
将N-乙酰高丝氨酸内酯酶基因(aiiO-AIO6)插入表达载体pET28a构建了原核表达载体pET28a/aiiO-AIO6。转化大肠杆菌后筛选具有活性的重组子并对纯化的目的蛋白AiiO-AIO6的酶学性质进行了研究,同时研究了纯化的酶液对嗜水气单胞菌ATCC7966溶血素(Hemolysin,Hem)、细胞肠毒素(Cytotonic enterotoxin,Ast)、胞外蛋白酶(Extracellular protease,Ep)、丝氨酸蛋白酶(Serine protease,Sp)及磷脂酶Pho(Phospholipase A1,Pho)等5个毒力因子表达的影响。结果表明,pET28a/a...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈怀青 陆承平 赵肖
嗜水气单胞菌是引人注目的人-兽-鱼共患病的新病原。嗜水气单胞菌致病菌株,不管来源如何,均可产生一种相同或相近的外毒素。外毒素与细菌的致病性关系密切,是重要的致病因子。作者从患暴发性传染病的病鱼中分离到致病性嗜水气单胞菌,发现该菌能产生一种具有溶血性、肠毒性、细胞毒性和动物致死性等多种生物学活性的外毒素,并将其命名为 HEC 毒素。嗜水气单胞菌 HEC 毒素的提纯、特性分析及其在致病中的作用已有报道,然而该毒素产生的调控机制并不完全清楚。本文报道了培养条件对嗜水气单胞 HEC 毒素产量的影响。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
高学文 齐放军 姚仕义 王金生
研究了枯草芽孢杆菌Bs5 5和Bs90菌株分别与苏云金芽孢杆菌Bt1和Bt2菌株在共培养条件下的菌体生长、抗菌活性物质脂肽类化合物和杀虫活性物质伴孢晶体蛋白的产生状况。结果表明 ,Bs5 5与Bt共培养的菌体生长和脂肽类化合物的产生与单独培养的Bs5 5相似 ,未检测到伴孢晶体蛋白 ,但有Bt特异性蛋白存在 ;Bs90与Bt共培养的菌体生长和脂肽类化合物的产生与单独培养的Bs90有相对较大的差别 ,检测到伴孢晶体蛋白。说明Bs与Bt可以共生 ,组合适当时可以产生各自的生物活性物质
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
马向东 陆承平 陈怀青 凌红丽
用含不同浓度铁离子的培养基培养嗜水气单胞菌Ｊ－１株，３６ｈ时检测细菌含量以及毒素、蛋白酶、载铁体的表达量。发现菌液的浓度随着Ｆｅ２＋浓度的升高而升高，而毒力因子的表达量则相反，当Ｆｅ２＋的加入浓度为０时，毒素、蛋白酶、载铁体的表达量达最大值。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳及免疫转印分析细菌的外膜蛋白（ＯＭＰ），嗜水气单胞菌Ｊ－１株在表达载铁体的同时多表达一条ＯＭＰ，其相对分子质量为７１．７×１０３，应为载铁体的受体。此时，经ＥＬＩＳＡ检测细菌菌体及抽取物Ｓ蛋白为阴性；经超薄切片电镜观察，菌体无Ｓ层结构。随着铁离子浓度的降低，Ｊ－１株毒素、蛋白酶及载铁体的表达增多，菌体Ｓ蛋白消失，并产生相应的ＯＭＰ条带...
关键词：
嗜水气单胞菌 铁 毒素 蛋白酶 载铁体
[期刊] 中国农业科学
[作者]
文凤云 廖富蘋 林健荣 钟杨生
【目的】克隆多粘类芽孢杆菌(Paenibaccillus polymyxa)CP7的β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因,构建高效表达工程菌株,为CP7菌的抗菌活性组分研究和开发利用以及葡聚糖酶在农业生产中的应用提供理论依据。【方法】通过CP7菌β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆及原核表达构建工程菌株,采用平板对峙培养和生长速率测定法研究重组酶对供试真菌的生长抑制活性,同时采用体外消化法研究该酶对麦类饲料消化率的影响。【结果】成功克隆目的基因并在原核系统获得高效表达。重组酶蛋白对4种供试真菌菌丝生长具有明显抑制作用,平均抑制率高达40%以上;添加了重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶的处理组样品,...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
牛天贵 吕莹 蔡同一 郭三堆 张锐
以胆固醇为惟一碳源和能源 ,从食肉动物雪豹肠道分离出一株胆固醇降解酶活力较高的 T12 - 1菌株 ,初步鉴定为好气性芽孢杆菌。经实验确定 ,其胆固醇降解酶产生的最适宜条件为培养温度 32℃ ,培养基p H6 .5～ 7。用 2 50 m L三角瓶装 6 0 m L培养基 ,振荡培养 10 h,培养基中酵母膏含量为 5g.L-1、胆固醇含量为 1g.L-1、吐温 80含量 1m L.L-1,其胆固醇降解酶活力可达 3.6 1× 10 -3 μU.m L-1。
关键词：
胆固醇降解酶 芽孢杆菌 培养条件
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
范红结 陈怀青 姚火春 陆承平
将嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ，Ａｈ）Ｊ－１菌株第５代［Ｊ－１（５）］在产毒素培养基上连续传代至第３５代［Ｊ－１（３５）］，并分别检测Ｊ－１（６）和Ｊ－１（３５）的生化特性。另取Ｊ－１（６）、Ｊ－１（１５）、Ｊ－１（２５）和Ｊ－１（３５）分别制备嗜水气单胞菌灭活疫苗，用其分别免疫鲫鱼，之后用Ａｈ强毒攻击；同时用Ｊ－１（６）经腹腔注射或浸泡各免疫组鲫鱼，测其最低免疫剂量。结果显示，从第５代传至３５代，Ａｈ菌株的培养特性和免疫原性没有显著差异；腹腔免疫和浸泡免疫的最低有效剂量分别为１×１０７ｃｆｕ／尾和５×１０７ｃｆｕ／ｍＬ。表明ＡｈＪ－１株可作为理想的疫苗生产株。
关键词：
嗜水气单胞菌 免疫原性 生化特性 稳定性
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
潘厚军 吴淑勤 董传甫 石存斌 叶美茜 林天龙 黄志斌
从患溃疡病的鳜肾脏中分离出一株病原细菌编号为GYK1。此株病菌人工感染鳜、银鲫、剑尾鱼,实验鱼出现出血、肌肉坏死或溃疡症状;腹腔注射攻毒,对鳜、银鲫、剑尾鱼、小鼠的半致死剂量(LD50)分别为8.33×104、1.06×105、1.26×105、1.05×106CFU/g;菌培养液上清能溶解鳜、加洲鲈、银鲫、小鼠、兔、绵羊、人O型血等的红细胞,在绵羊血平板上为β 溶血,不同代次和保存条件的细菌溶血性稳定。细菌在电镜下的形态、生化特性和ID32E系统自动鉴定的结果均符合嗜水气单胞菌的特征;PCR扩增检测到嗜水气单胞菌特异性的毒力基因气溶素基因(aerA)209bp片段,进一步说明此株病原细菌为含...
关键词：
鳜 嗜水气单胞菌 鉴定 毒力 溶血性
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