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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曲晓旭 刘洪霞 高玲 陆兆新 吕凤霞 张充 赵海珍 别小妹
［目的］本文旨在建立一种利用ＰＣＲ技术鉴别抗菌脂肽类型和筛选抗菌脂肽产生菌的快速、准确、灵敏的方法。［方法］以枯草芽孢杆菌（ＢａＣｉｌｌｕｓ ｓｕＢｔｉｌｉｓ）、淀粉液化芽孢杆菌（Ｂ．ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａＣｉｅｎｓ）和多黏类芽孢杆菌（ＰａｅｎｉＢａＣｉｌｌｕｓ Ｐｏｌｙｍｙｘａ）的典型菌株为研究对象，针对几种代表性脂肽的合成酶基因设计特异性引物进行ＰＣＲ扩增，并通过测序法验证检测结果的正确性，推测芽孢杆菌生物合成抗菌物质的潜在能力。［结果］ＰＣＲ结果表明：所有检测菌株均具有ｓｕＲｆａＣｔｉｎ合成酶调控基因；除Ｐ．Ｐｏｌｙｍｙｘａ Ｊｓａ－９外，其他菌株均检测到ｆｅｎｇｙＣｉｎ合成酶基因的存．．．
关键词：
抗菌脂肽 芽孢杆菌 调控基因 检测
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙力军 陆兆新 别小妹 吕凤霞 方传记
【目的】研究培养基对解淀粉芽孢杆菌ES-2菌株产生抗菌脂肽的影响,为选择合适的产抗菌脂肽的培养基提供指导。【方法】通过HPLC技术对培养基中的碳、氮源对ES-2菌株抗菌脂肽组分的影响进行试验。【结果】改进的Landy培养基抗菌脂肽产量较高;葡萄糖是ES-2菌株产生脂肽的良好碳源,特别是对surfactin的产生有明显的促进作用;蔗糖和乳糖也是产生fengycin的良好碳源;L-谷氨酸和L-天门冬酰胺是抗菌脂肽产生的良好氮源;而不同的氨基酸组合并不有利于抗菌脂肽的产生;实验结果还显示,6种脂肪酸对抗菌脂肽的产生起到抑制作用。【结论】改进的Landy合成培养基是ES-2菌株产生脂肽适宜的培养基,在...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张宝 于雅琼 韩玉竹 游成真 尚庆茂 孔维嘉 李平兰
为获得能够产Iturins类脂肽的芽孢杆菌以应用于植物的生物防治中,以果蔬体内、根际土壤等多生境中分离的118株细菌为出发菌株,采用平板对峙法、管碟法对其进行了初筛和复筛。结果表明:其中3株菌株对立枯丝核菌、瓜果腐霉和尖孢镰刀菌显示出强烈的抑制作用;通过薄层层析等方法对产Iturins脂肽菌株进行初步分析,最终确定K103为目标菌株。通过形态学鉴定、生理生化试验及16SrDNA的分子生物学等方法,对产抗菌脂肽的K103菌株进行分类学鉴定,最终确定菌株K103为解淀粉芽孢杆菌,并将其命名为解淀粉芽孢杆菌K103(Bacillus amyloliquefaciens K103)。
关键词：
解淀粉芽孢杆菌 鉴定 脂肽 生物防治
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张宝 于雅琼 韩玉竹 游成真 尚庆茂 孔维嘉 李平兰
为获得能够产ＩｔｕｒＩｎｓ类脂肽的芽孢杆菌以应用于植物的生物防治中，以果蔬体内、根际土壤等多生境中分离的１１８株细菌为出发菌株，采用平板对峙法、管碟法对其进行了初筛和复筛。结果表明：其中３株菌株对立枯丝核菌、瓜果腐霉和尖孢镰刀菌显示出强烈的抑制作用；通过薄层层析等方法对产ＩｔｕｒＩｎｓ脂肽菌株进行初步分析，最终确定Ｋ１０３为目标菌株。通过形态学鉴定、生理生化试验及１６ｓｒＤｎＡ的分子生物学等方法，对产抗菌脂肽的Ｋ１０３菌株进行分类学鉴定，最终确定菌株Ｋ１０３为解淀粉芽孢杆菌，并将其命名为解淀粉芽孢杆菌Ｋ１０３（ＢＡｃＩｌｌｕｓ ＡｍｙｌｏｌＩｑｕｅｆＡｃＩｅｎｓ Ｋ１０３）。
关键词：
解淀粉芽孢杆菌 鉴定 脂肽 生物防治
[期刊] 中国农业科学
[作者]
向亚萍 陈志谊 罗楚平 周华飞 刘永锋
【目的】明确55株芽孢杆菌(Bacillus spp.)菌株对3个植物病原真菌(小麦纹枯病菌Rhizoctonia cerealis、小麦赤霉病菌Fusarium graminearum、西瓜枯萎病菌Fusarium oxysporum f.sp.niveum)抑菌活性及与其产生的脂肽类抗生素种类的定性定量关系。【方法】采用平板对峙培养分别测定55株芽孢杆菌活体菌及其脂肽类抗生素粗提物对3个真菌的抑菌活性;根据脂肽类抗生素合成相关基因序列srf A、itu A和fen A对55株芽孢杆菌进行PCR扩增;采用质谱及液相色谱分析55株芽孢杆菌脂肽类抗生素的种类、数量。【结果】55株芽孢杆菌菌株及其...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈武 彭曙光 周清明 黎定军 罗宽
采用75%乙醇沉淀、阴离子交换色谱层析和阳离子交换色谱层析等方法,分离并纯化侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterospours)2-Q-9菌株外泌抗菌肽BL2Q9。结果表明,BL2Q9的相对分子质量为7 800,等电点为10.2。Edman降解测序发现其N末端封闭,串联质谱测序结果表明其与细菌第Ⅳ类鞭毛合成蛋白pilQ的前体蛋白以及转录抑制子CodY蛋白的部分序列相似,但与已知抗菌肽的序列相似性较低。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张荣胜 刘永锋 刘邮洲 罗楚平 刘长河 李美荣 陈志谊
通过离子注入技术对枯草芽孢杆菌生防菌Bs-916突变选育,得到一株拮抗性能比出发菌Bs-916提高15%以上的突变菌株H-74。通过对其抗菌物质的高效液相色谱(HPLC)分析表明,H-74分泌的脂肽类抗菌物质主要是表面活性素。在PDA平板上的水稻纹枯病菌菌丝抑制试验中,它能有效抑制新生菌丝的生长,并使细胞内含物外泄。盆栽控病试验表明,它对水稻纹枯病菌的相对防效达到73.35%。将H-74分泌的脂肽类抗菌物质单喷于水稻植株上,测定与植物抗病相关的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性的变化,发现其对植物抗病相关酶活性表达有明显的诱导作用。结果还显示同时接种脂肽类...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
方传记 陆兆新 孙力军 别小妹 吕凤霞 黄现青
【目的】提高淀粉液化芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)发酵产脂肽类抗菌物质的产量。【方法】采用Plackett-Burman Design对影响B.amyloliquefaciens ES-2-4产脂肽类抗菌物质产量的13个因子进行筛选,在筛选结果的基础上,再运用Uniform Design(均匀设计)对关键因子的最佳水平范围进行研究,通过回归方程求解得到最高产量时各关键因子的最优组合。【结果】影响抗菌物质产量的关键因子为葡萄糖、L-谷氨酸钠、转速和温度;获得最佳产量时关键因子的最优组合为:葡萄糖(42g·L-1)、L-谷氨酸钠(14g·L-1)、温度(27℃)、...
[期刊] 华北农学报
[作者]
胡瑞萍 张铎 张丽萍 张根伟 张蕾 赵宝华
为了分离纯化及鉴定枯草芽孢杆菌BSD-2代谢产物中抗菌肽,采用盐酸沉淀、Sephadex G-50层析以及反相HPLC对其进行分离纯化,并利用Tricine-SDS-PAGE、MAIDL-TOF-MS、红外光谱和核磁共振技术对其分子量、氨基酸序列以及结构进行初步解析。结果显示该抗菌肽是由29个氨基酸组成,分子量为3 514 Da,等电点为10.46。红外光谱和核磁共振分析其结构中含有-CH2-、-CH3、-OH、-NH2、-CH、-CO-以及苯环等官能团。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
高学文 姚仕义 Huong Pham Joachim Vater 王金生
利用MALDI TOF MS技术 ,鉴定了将lpaB3基因转入枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis 168菌株所构建的工程菌GEB3产生的脂肽类抗生素种类。结果表明 ,GEB3仅产生表面活性素 (surfactin) 1种脂肽类抗生素。经LC MS分析 ,GEB3产生由 13、14和 15个碳原子的脂肪酸链构成的标准表面活性素变异体 (standardsurfactinisoforms)。生物活性检测表明 ,该工程菌产生的脂肽类抗生素表面活性素具有抑制小麦纹枯病菌和稻瘟病菌菌丝生长的作用
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李宝庆 鹿秀云 郭庆港 钱常娣 李社增 马平
【目的】对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis菌株BAB-1产生的脂肽类物质和挥发性物质进行分离鉴定和抑菌活性研究。【方法】采用HPLC和MALDI-TOF-MS对脂肽类物质进行分离纯化和鉴定;采用GC-MS对挥发性物质进行鉴定。【结果】HPLC分析表明,菌株BAB-1产生的脂肽类物质由LP-1、LP-2、LP-3三类组分组成,其中LP-2起主要抑菌作用。MALDI-TOF-MS质谱分析表明,LP-1为surfactin(C13—C15),LP-2为fengycin A(C14—C15)和fengycin B(C14—C18),LP-3成分未能确定。GC-MS结果表明,菌株BAB-1...
关键词：
枯草芽孢杆菌 脂肽 挥发性物质 抑菌活性
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
王晶 刘茗 冯歌林 方伟 高竞 梁辰飞 秦华 陈俊辉 徐秋芳
芽孢杆菌Bacillus代谢产生的脂肽类物质具有抗菌、抗肿瘤、抗病毒等多种生物活性,但芽孢杆菌脂肽产量普遍较低。探索高产量的培养条件是开发利用的重点,而简单快速的产量评价方法则可大大提高条件探索的效率。以解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens WK1为试验菌株,首先通过含发酵液培养基对病原菌的抑制实验确定最佳培养时间,然后设计初始pH值分别为5, 6和7的培养基生产脂肽物质,通过测定发酵液酸沉降前后总有机碳的差值,推算脂肽类物质粗提物的产量(差减法),以传统的重量法为对照。结果表明:试验所用的解淀粉芽孢杆菌WK1菌株的最佳发酵时间为72 h。重量法与差减法所测得的不同处理脂肽物质产量差异规律相同,从高到低依次为pH 6, pH 7, pH 5,两者的相关性系数为0.563 2(n=9),但相同初始pH值条件下差减法所得的脂肽物质产量均高于重量法。初始pH值为5条件下脂肽物质合成效率和二氧化碳排放量均最低,初始pH值为6与pH值为7条件下二氧化碳排放量相同,为700 mg·kg~(-1),但初始pH值为6条件下产脂肽物质产量(1 228 mg·L~(-1))和脂肽物质合成效率(234 mg·kg~(-1))最高。可见,差减法是评价脂肽产量的简单快速而有效的方法。图4表2参23
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
祝发明 刘辉 曹要玲 杨明明 曹斌云
从枯草芽孢杆菌1A 747菌株基因组克隆Am yX基因信号肽序列,构建枯草芽孢杆菌分泌表达载体pYGAm yX,转化枯草杆菌W B 700得W B 700(pYGAm yX)。采用重叠PCR技术,将Am yX基因信号肽突变,使其N端正电荷增加,H区疏水性降低,利用突变后信号肽序列构建枯草杆菌分泌表达载体pYGMUT,转化枯草杆菌W B 700得W B 700(pYGMUT)。对W B 700(pYGAm yX)和W B 700(pYGMUT)的表达产物进行检测,研究Am yX基因信号肽突变对枯草杆菌蛋白分泌途径的影响。结果表明,W B 700(pYGAm yX)和W B 700(pYGMUT均...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
邵铁梅 宋福平 李卓夫 张杰 姜声华 刘大群 黄大昉
通过PCR方法筛选160株苏云金芽孢杆菌,其中94株含有zmaR基因。测定了含zmaR基因的菌株培养物上清液对草生欧文氏杆菌(Erwiniaherbicola)的抑菌活性,结果表明有67株菌有抑菌活性,其中21株抑菌活性较高。经鉴定,抑菌活性较高的G03菌株含有cry1Ac、cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab等高毒力杀虫基因,并从G03中克隆了zmaR全长基因,完成了序列测定。该基因编码区为1125bp,由核苷酸序列推导的氨基酸残基组成为375个,分子量为43.5kD,等电点pI4.945。通过载体pET-21b将zmaR基因导入大肠杆菌BL21,可正常表达43.5kD蛋白,并使宿主菌产...
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