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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郭瑞坚 郝春凤 张正青 张伟 王化鹏 李孟楼
【目的】获得花绒寄甲过氧化物还原酶６基因（Ｐｒｘ６），分析其在花绒寄甲发育和衰老过程中相对表达量的变化，以进一步揭示花绒寄甲衰老的分子机制。【方法】基于花绒寄甲成虫转录组数据库获得Ｐｒｘ６基因，并对其进行生物信息学分析。利用实时荧光定量ＰＣｒ（ｒＴ－ｑＰＣｒ）技术，分析Ｐｒｘ６在花绒寄甲发育和衰老阶段的表达量。【结果】从花绒寄甲成虫转录组数据库中获取了２个Ｐｒｘ６基因，分别命名为Ｐｒｘ６－１和Ｐｒｘ６－２，其开放阅读框长度依次为６５４和６７２ｂＰ，分别编码２１８和２２４个氨基酸。多序列比对和系统发育分析表明，这２个基因均属于１－Ｃｙｓ家族，并且与鞘翅目的赤拟谷盗Ｐｒｘ６－１和Ｐｒｘ６－２的同源．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张正青 李孟楼
【目的】对花绒寄甲线粒体合成调控基因进行表达分析,为深入揭示花绒寄甲生殖生理活动奠定一定的理论基础。【方法】从花绒寄甲转录组文库和线粒体基因组中筛选出PGC1-α、NRF1、mtTFA、COXⅠ和ATP6基因,对其开放阅读框不完整序列进行5′RACE克隆扩增,对拥有完整开放阅读框的序列直接进行PCR扩增。用实时荧光定量qPCR分析5个线粒体合成基因在花绒寄甲成虫不同组织、不同虫态和不同虫龄中的表达差异。【结果】获得核基因编码序列3条(PGC1-α、NRF1和mtTFA)和线粒体基因编码序列2条(ATP6和
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
李慧玉 董京祥 姜静 刘桂丰
过氧化还原蛋白(Prxs)是植物体内重要的抗氧化酶。为深入研究Prx基因在柽柳非生物胁迫中的作用,从柽柳cDNA文库中获得了2条Prx的单一序列ThPrx1与ThPrx2,其中ThPrx1为部分序列,ThPrx2为全长序列。生物信息学分析表明,2条ThPrx与植物Prx同源基因的氨基酸序列具有较高的同源性,并且ThPrx1和ThPrx2分别属于Prx的PrxⅡ和2-CysPrxs亚家族。通过实时定量PCR对这2个ThPrx基因在不同非生物胁迫(NaCl、PEG、CdCl2、低温及ABA)处理的柽柳根和叶中的表达模式分析显示,2个ThPrx基因在胁迫下的表达模式不同:NaCl、PEG和ABA均能...
[期刊] 水产学报
[作者]
杨志刚 姚琴琴 成永旭 施秋燕 杨青 何杰 马明君 王瑶 常东
根据已登录的中华绒螯蟹一种Δ６去饱和酶基因（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ：ＪＸ９４６４３４）及菁夜蛾去饱和酶基因（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ：ＫＪ６２２０５５．１）的保守区设计引物，通过逆转录Ｐｃｒ以及ｒＡｃｅ技术克隆了中华绒螯蟹另一种Δ６去饱和酶基因ＦＡＤ６－ｂ的全长序列。经序列分析，中华绒螯蟹ＦＡＤ６－ｂ ｃＤｎＡ全长为２ ３１０ ｂＰ，其中开放阅读框（ｏｒＦ）为１ ３２６ ｂＰ，共编码４４２个氨基酸（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ：ＫＰ８７６０５８），理论分子量为５０．８６ Ｋｕ，理论等电点为８．４７，ＦＡＤ６－ｂ基因的氨基酸序列与已公布的一条中华绒螯蟹Δ６去饱和酶基因的一致．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
雷丽娜 高谦 王伟 孙兆盛 罗璋 刘其根
为进一步了解花鲈适应性免疫机制在病害防治中的作用，本研究通过RT-PCR和RACE技术克隆获得了免疫球蛋白M重链（IgMH）和主要组织兼容性复合体（Major histocompatibility complex class II，MHCII）β基因的全长；通过实时荧光定量PCR（qPCR）检测它们在花鲈各组织中组织分布情况以及LPS、Poly (I:C) 刺激及迟缓爱德华氏菌人工感染后mRNA水平的表达变化情况；构建了IgMH-pET21d、IgMCH_(1-2)-pET21d和MHCⅡ β-pET21d原核重组表达质粒，进行重组蛋白表达，并通过分子筛层析技术纯化花鲈IgMH、IgMCH_(1-2)和MHCⅡ β重组蛋白，进而制备了抗花鲈IgM的多克隆抗体。结果表明，花鲈IgMH和MHCII β的cDNA全长分别为1 977 bp和1 242 bp；它们在鳃、脾脏和头肾等免疫相关组织中mRNA水平的表达量较高；LPS、Poly (I:C) 刺激及迟缓爱德华氏菌人工感染花鲈导致鳃、脾脏和头肾中这两个基因的表达水平发生显著变化，表明IgMH和MHCII β均参与了花鲈的抗感染免疫反应；此外，抗花鲈IgM的多克隆抗体能与花鲈全血清发生强烈反应，与鳜全血清弱反应，与大口黑鲈和草鱼的不发生反应，推测其反应强度反映了物种间亲缘关系的远近。本研究首次克隆了花鲈的IgMH和MHCⅡ β基因全长，表达了IgMH和MHCⅡ β原核重组蛋白，制备了抗花鲈IgM的多克隆抗体，揭示了IgMH和MHCⅡ β基因参与花鲈的抗感染免疫应答，为深入研究花鲈的免疫调控机制和疾病防控策略奠定了基础。
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
洪方蕾 陆瑶 俞世姣 胡芷诺 缪云锋 钟诗蔚 赵宏波
【目的】研究OfABF基因家族成员在桂花‘堰虹桂’Osmanthus fragrans ‘Yanhonggui’不同组织和花开放进程中的表达模式，筛选参与调控花开放的关键成员。【方法】在桂花基因组数据库中筛选出相关OfABFs基因序列，克隆序列全长并对其进行生物信息学分析，通过荧光定量PCR分析OfABFs基因在‘堰虹桂’不同组织及花开放进程中的时空表达模式。【结果】筛选得到5条OfABFs基因序列。生物信息学分析得出：桂花OfABFs蛋白具有亲水性，较不稳定，无信号肽段；预测其蛋白二、三级结构具有相似的特性，无规则卷曲和α-螺旋为其结构组成的主要元件；5条OfABFs转录因子均含有bZIP转录因子家族保守结构域。亚细胞定位预测表明：5条OfABFs编码蛋白均定位在细胞核。荧光定量PCR结果表明：OfABF1、OfABF2、OfABF3、OfABF4和OfABF6在桂花中的表达具有组织特异性，其中OfABF1、OfABF4和OfABF6在花中有较高表达。OfABF1在顶壳期被转录激活，表达显著升高；铃梗期后表达水平虽呈下降趋势，但仍保持较高水平。OfABF2的表达在顶壳期到达峰值，且相对表达水平明显高于其他时期。OfABF3、OfABF4和OfABF6在花朵衰老期的相对表达量最高。【结论】OfABF1、OfABF2可能与桂花花开放进程有关，而OfABF3、OfABF4和OfABF6参与调控桂花花朵衰老的可能性较大。图10表4参32
关键词：
桂花 ABF转录因子 表达分析 花开放
[期刊] 华北农学报
[作者]
张永淋 高彬 周杰 朱树华
为了深入研究2-Cys Prx基因调控桃果实氧化还原信号分子作用机制,结合了PCR技术和RT-PCR技术通过体外克隆的方法得到桃果实2-Cys Prx基因,通过对序列分析表明,2-Cys Prx基因全长1 424 bp,其中,编码区813 bp,共编码270个氨基酸。对其分子结构进行分析,2-Cys Prx蛋白分子量为29.7 ku,为疏水型蛋白,且是膜外蛋白。在线软件预测2-Cys Prx蛋白分子式为C1342H2110N348O403S4,分子量29.696 ku,由4 207个原子组成,理论等电点为6.23。使用Prot Scale分析该蛋白疏水性平均值为-0.126,说明2-Cys Prx为亲水性蛋白。TMHMM对跨膜结构进行预测,发现,2-Cys Prx氨基酸序列中不存在跨膜结构域,为膜外蛋白。此外,对该蛋白二级结构进行预测,发现2-Cys Prx有4个α螺旋结构、9个β折叠结构及无规则卷曲构成。系统进化树分析表明,肥城桃果实2-Cys Prx与其他植物氨基酸序列有较高同源性,其中与樱桃的亲缘关系最近,相似度达到了98.15%,表明植物体内2-Cys Prx具有较高的保守性。体外构建重组蛋白p ET-30a-2-Cys Prx成功在大肠杆菌BL21中表达,为下一步研究其功能与结构,从而探讨2-Cys Prx基因调控桃果实氧化还原信号作用机理奠定了基础。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘世拓 肖栋 许玉超 侯喜林 徐玮玮 韩克 董慧杰 胡春梅
[目的]双半胱氨酸型硫氧还蛋白过氧化物酶Brc2-Cys Prx是过氧化还原蛋白Peroxiredoxins(Prxs)的亚家族。Prxs是植物抗氧化酶防御系统的成员,对清除植物体内活性氧具有重要作用。本文旨在克隆和研究Brc2-Cys Prx基因在不结球白菜处于不同胁迫条件下的表达模式。[方法]以不结球白菜霜霉病抗病自交系‘苏州青’和霜霉病感病自交系‘矮脚黄’为试验材料,利用RACE技术克隆得到不结球白菜Brc2-Cys Prx基因。利用生物信息学方法对该基因进行信息学分析。采用qRT-PCR技术对不结
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
胡举伟 张会慧 孙广玉
以过表达和抑制表达2–Cys Prx基因烟草(龙江911)为材料,测定和分析其生长特性和光化学活性。结果表明:过表达2–Cys Prx基因烟草的株高、根长、生物量显著高于非转基因烟草和抑制表达2–Cys Prx基因烟草;抑制表达2–Cys Prx基因烟草的PSⅡ反应中心电子传递速率(ETR)显著低于过表达2–Cys Prx基因烟草,过表达2–Cys Prx基因烟草的荧光曲线与Fm所围成的面积(Area)、2 ms时有活性反应中心的开放程度(Ψo)、吸收光能用于QA–以后电子传递的量子产额(φEo)、单位反应中心吸收光能用于电子传递的能量(ETo/RC)高于非转基因烟草,非光化学猝灭的最大量子产...
[期刊] 水产学报
[作者]
王瑶 杨志刚 郭子好 姚琴琴 曾奇韬 杨筱珍 成永旭
根据陆地蟹RXR基因保守区序列设计上下游引物,采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)以及cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆中华绒螯蟹RXR基因并进行各组织间的表达分析。序列分析表明,中华绒螯蟹RXR cDNA全长1 517 bp,编码433个氨基酸。经BLASTn和BLASTx分析表明,中华绒螯蟹RXR基因的氨基酸序列与陆地蟹RXR基因的氨基酸序列相似性最高,为96%。系统进化树分析显示,中华绒螯蟹RXR的氨基酸序列与陆地蟹RXR聚为一支。荧光定量PCR结果显示,RXR在所有检测的组织中均有表达,且在中华绒螯蟹Y器官中表达量最高,肝胰腺、鳃和肌肉中少量表达,心脏、胃、肠、胸神经节和脑神经节...
[期刊] 水产学报
[作者]
王瑶 杨志刚 沈城 姚琴琴 曾奇韬 刘启彬 成永旭
为了研究蜕皮激素受体(EcR)在中华绒螯蟹蜕皮和性腺发育过程中的作用,本实验采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)以及cDNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆了中华绒螯蟹EcR基因全长cDNA序列。运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法,分析该基因在不同组织、蜕皮过程及卵巢发育阶段的表达特征,并研究了甲基法尼酯(MF)对卵巢中EcR的调控作用。结果显示,中华绒螯蟹EcR cDNA全长2 156 bp,编码422个氨基酸,其序列与招潮蟹相似性最高,为89%。荧光定量PCR结果显示,EcR在Y器官中表达量最高;在卵巢和肌肉中少量表达;在肝胰腺、鳃、心脏、胃、肠、胸神经节和脑神经节中微量表达...
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘东花 卫阳飞
为了探究ＨＳＰＢ６对牦牛肉嫩度的影响，分析了牦牛ＨＳＰＢ６基因的分子特征，并利用荧光定量ＰＣＲ技术检测了ＨＳＰＢ６ ｍＲＮＡ在牦牛和黄牛背最长肌中的表达量。结果表明，牦牛ＨＳＰＢ６基因含有一个５０４ ＢＰ的开放性阅读框，编码１６７个氨基酸，属于亲水性蛋白；二级结构主要由α－螺旋、β－折叠、延伸链以及无规卷曲组成；牦牛ＨＳＰＢ６蛋白与水牛、普通牛相似度较高。荧光定量ＰＣＲ研究表明，牦牛背最长肌中ＨＳＰＢ６基因ｍＲＮＡ表达水平显著高于黄牛（Ｐ＜０．０１），说明ＨＳＰＢ６基因较高的表达量可能是造成牦牛肉剪切力较高的原因，为牦牛肉嫩化的分子机制研究奠定了理论基础。
关键词：
牦牛 HSPB6 肉嫩度
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王灵钰 李昀 董夕梦 于朋 张晓燕 齐鑫 田源 温海深
细胞色素c氧化酶(COX)是线粒体电子传递链的末端酶，COX6A是细胞色素c氧化酶的核编码亚基之一。本研究在花鲈(Latolabrax maculatus)中鉴定出了2个cox6a基因(cox6a1、cox6a2)。系统进化树分析进一步确认了两个花鲈cox6a基因命名的准确性。多序列比对表明cox6a基因具有高度的保守性，尤其是C端。我们利用qRT-PCR技术对花鲈cox6a基因的mRNA在心、肝、脾、胃、鳃、肾、头肾、性腺、延髓、端脑、中脑、小脑、下丘脑、垂体、肌肉15种组织的表达情况进行了检测。结果表明，花鲈的两个cox6a基因均呈现组织特异性表达，其中cox6a1在垂体、脑、肝脏和肾脏中的表达量较高，cox6a2在心脏和肾脏中的表达量较高。同时，通过TargetScan及miRanda软件，我们在花鲈鳃组织miRNA库中获得了4个可能靶定cox6a2基因的miRNA：miR-30e-5p、miR-223、miR-200a-3p和miR-155-5p，但没有发现可能靶定cox6a1基因的miRNA。为进一步了解cox6a基因及相关miRNAs在花鲈渗透调节机制中的潜在作用，本研究开展了急性盐度转换实验，即将海水养殖的个体转移到淡水(盐度30～0，SW-FW组)中，以及将淡水养殖的个体转移到海水中(盐度0～30，FW-SW组)，并利用qRT-PCR技术分析了处理前后各时间点(0 h, 12 h, 1 d, 3 d, 7 d) cox6a基因以及潜在的调控miRNAs在花鲈鳃组织中的表达模式。结果显示，在花鲈适应低盐和高盐环境的过程中，cox6a1、cox6a2基因以及miR-30e-5p、miR-223、miR-200a-3p都呈现显著差异表达，而miR-155-5p只在适应高盐环境时出现了显著的差异表达。这表明，cox6a1、cox6a2基因和4个miRNAs在花鲈的渗透调节过程中发挥潜在作用。其中miR-30e-5p、miR-223和miR-200a-3p在盐度转化过程中的表达趋势与cox6a2呈负相关关系，以miR-223相关性最高。由此推测，miR-30e-5p、miR-223和miR-200a-3p不同程度地参与了cox6a2基因的表达调控。本研究为研究花鲈适应不同盐度环境的渗透调节机制提供了基础数据。
[期刊] 水产学报
[作者]
施秋燕 杨志刚 姚琴琴 成永旭 杨青 魏帮鸿
为了探究中华绒螯蟹自身脂肪酸合成能力，采用ＲＡＣＥ技术，克隆获得中华绒螯蟹ＥＬＯＶＬ６ Ｃ ＤＮＡ序列全长（ＧＥＮ ＢＡＮｋ ＡＣＣＥｓｓｉＯＮ：ｋＴ７７９２１９）。该序列全长２２４７ Ｂｐ，包括２３５、８７３和１１３９ Ｂｐ的５＇非编码区（５＇－ＵＴＲ）、开放阅读框（ＯＲＦ）和３＇非编码区（３＇－ＵＴＲ），编码２９０个氨基酸（ＡＡ），具有ＥＬＯＶＬ家族的全部特征：６个跨膜区、高度保守的组氨酸簇ＨＸＸＨＨ、多个保守区以及内质网滞留信号ｋＸｋＸＸ。分析发育树表明，ＥＬＯＶＬ２与ＥＬＯＶＬ５聚为一支，ＥＬＯＶＬ６聚为另一支，其中中华绒螯蟹ＥＬＯＶＬ６与其他节肢动物ＥＬＯＶＬ６聚为一支，与凡纳滨对虾．．．
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
赵丽红 周菲 官民晓 刘闯 赵鑫 刘雪梅
白桦为雌雄同株的单性花树种,在木本植物花发育研究中有着重要作用。本文旨在初步确定白桦雌花发育过程中的关键时期大孢子发生(前期)和配子体发育(中期)过程中基因表达及调控的差异,同时挖掘与雌花发育相关的基因。首先,运用细胞学方法确定试材雌花的发育时期。其次,采用抑制消减杂交(SSH)技术,分别以白桦前期和中期雌花序的c DNA作为tester和driver,建立正、反向抑制消减杂交c DNA文库:BHHQ和BHHZ。共获得1 406个高质量的EST序列,其中787个与数据库中的已知核酸或蛋白序列有较高同源性,47个可能与花发育相关。GO分析结果表明,这些基因34.96%参与生物合成,16.45%参...
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