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[期刊] 华北农学报
[作者]
邵媛媛 柳展基 王龙龙 毕玉平
以花生品种鲁花14为试验材料,提取叶片可溶性蛋白进行双向电泳分析。在三氯乙酸/丙酮沉淀法的基础上,对样品抽提、样品溶解、胶条pH范围选择、蛋白上样量、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等关键步骤进行改进,获得了蛋白点较多、重复性好的双向电泳图谱,为开展花生叶片蛋白质组研究奠定了基础。
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
马松亚 蒋维昕 屈林丰 曹雪宁 谭玲 杨梅
为了建立适用于桉树叶片蛋白质组研究的双向电泳体系，以尾叶桉Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ ｕｒｏｐｈｙｌｌａｓ广林４号无性系作为试验材料，对蛋白质样品获取方法、双向电泳等电聚焦胶条ｐ ｈ范围、蛋白质上样量、胶条平衡条件以及染色方法进行了优化。结果表明：提取液＋酚抽提法最适合桉树叶蛋白质的提取，电泳图谱可检测到８５０个蛋白质点。７ ｍｏｌ／ｌ尿素＋２ ｍｏｌ／ｌ硫脲＋４％ｃｈａｐｓ＋６０ ｍｍｏｌ Ｄｔｔ １０μｌ的蛋白质干粉裂解液，裂解效果较好；使用５０ ｍｇ蛋白质干粉和６００μｌ裂解液所获得的蛋白质浓度较高，为３．９７μｇ／μｌ。使用ｐ ｈ４～７、２４ ｃｍ Ｉｐｇ胶条，蛋白质上样量为１ ２００μｇ，．．．
关键词：
桉树 叶片 蛋白质组 无性系 双向电泳
[期刊] 林业科学研究
[作者]
索慧英 郑密 卢晗 曲冠证 李莹
[目的]探究适用于杨树叶片蛋白质组学研究的双向电泳体系,建立杨树叶片蛋白质的双向电泳图谱。[方法]本研究以小黑杨(Populus simonii×P. nigra)叶片为材料,对小黑杨叶片双向电泳体系的2D裂解液、蛋白的纯化、IPG胶条的pH范围、蛋白上样量、等电聚焦时间和SDS(Sodium Dodecyl sulfate)平衡时间进行优化。利用优化后的双向电泳体系分别对小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质进行双向电泳实验。[结果]采用2D裂解液Ⅱ对小黑杨叶片蛋白质进行溶解,可显著提高蛋白的溶解性,双向电泳图谱中可分辨出326个蛋白质,比采用2D裂解液Ⅰ溶解的蛋白样品多209个蛋白质。通过蛋白裂解液提取小黑杨叶片蛋白质,利用2D clean-up试剂盒法对蛋白样品进行纯化,所得的双向电泳图谱背景清晰、蛋白质的分离效果较好。小黑杨叶片蛋白质主要集中在pH 4～7内,选用24 cm、pH 4～7的线性IPG胶条进行双向电泳,可获得分离效果较好的393个蛋白质。蛋白上样量提高至1 mg时,可分辨的蛋白质的个数明显增加,由326个增加至454个。10 000V的等电聚焦时间为13 h,SDS平衡时间为40 min时可得到背景清晰、蛋白质个数多、分辨率较高的双向电泳图谱;采用优化后的双向电泳体系对小黑杨、大青杨(Populus ussuriensis Kom.)和84 K杨(Populus alba×P.glandulosa)叶片蛋白质进行双向电泳实验,分别可检测到531、828、525个蛋白质,且蛋白质分离效果好、图谱分辨率高。[结论]优化后的双向电泳体系提高了小黑杨叶片蛋白质双向电泳图谱的分辨率和重复性,采用优化后的双向电泳体系成功的建立了小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质的双向电泳图谱,该体系适用于小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质组学的分析,为杨树叶片蛋白质组学的研究奠定了基础。
关键词：
小黑杨 蛋白质 双向电泳 优化
[期刊] 经济问题探索
[作者]
章玉婷 周德群 周晓罡 苏源
以马铃薯宁蒗182叶片为试验材料,研究其叶片蛋白质提取方法及不同的蛋白质样品电泳上样量和IPG胶条pI范围对双向电泳图谱的影响。结果表明:采用改进的三氯乙酸(TCA)/丙酮法,上样量为600μg,采用pI 4-7、24 cm的IPG胶条可获得高分辨率的电泳图谱。在等电点4-7范围内,马铃薯宁蒗182叶片电泳图谱上的蛋白质点数为1055±95个。叶片蛋白质点的分布在分子量25-75 kD和等电点5-6的范围内相对集中。通过加强对样品的清洗结合丙酮对蛋白质在水化液中的二次沉淀能够较好地除去样品中的杂质而保证电泳质量。优化后的方法可用于马铃薯叶片总蛋白质双向电泳的试验研究,并为进一步利用基因工程技术...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
范海延 陈捷 张春宇 郭海 林英
为建立适于黄瓜叶片蛋白质组分析的双向电泳方法,对黄瓜叶片蛋白提取方法、裂解缓冲液、等电聚焦(IEF)参数进行研究。结果表明:丙酮法或三氯乙酸/丙酮法提取黄瓜蛋白质较好,2-DE图谱中蛋白点较多;裂解缓冲液为9.5mol·L-1尿素,2mol·L-1硫脲,1%二硫苏糖醇(DTT),2mmol·L-1三丁基磷(TBP),4%3-[3-(胆酰氨丙基)二甲铵基]丙磺酸内盐(CHAPS),0.2%两性电解质,0.002%溴酚蓝,0.25%吐温20,10%异丙醇,5%甘油,10mmol.L-1苯甲基磺酰氟(PMSF)时,电泳图谱效果最好;IEF等电聚焦条件为25000Vh时,2-DE图谱蛋白点多且清晰。
关键词：
蛋白质组 双向电泳 黄瓜
[期刊] 西南农业学报
[作者]
苏源 余萍 孔垂思 蔡翌阳 杨静 刘林 李成云
利用改进的三氯乙酸/丙酮法对5叶期玉米根、茎、叶的总蛋白质进行双向电泳获得了高分辨率的电泳图谱。在等电点4～7范围内,根、茎、叶电泳图谱上的蛋白质点数分别为1100±89、1275±72和1327±98个。3个器官蛋白质点的分布在分子量25～75 kD和等电点5～6的范围内相对集中。通过优化样品的清洗程序结合对蛋白质在丙酮水化液中的2次沉淀能够较好地除去样品中的杂质而保证电泳质量。优化后的方法可用于玉米幼苗的根、茎、叶总蛋白质双向电泳的试验研究。
关键词：
玉米 蛋白质组 双向电泳
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
尹泽超 王玉婷 王耀杰 桑利群 罗秋香 孟凡娟
为了获取高质量的西藏巨柏叶片蛋白质,分别采用酚抽提法、TCA/丙酮法和改良的TCA丙酮法3种方法对西藏巨柏叶片进行总蛋白的提取,同时利用蛋白试剂盒(The 2-D Quant Kit)对蛋白质的浓度和纯度进行了分析测定,并通过蛋白质斑点数量及分布特征,最后确定了最佳蛋白提取方法。结果表明:对样品研磨的精细程度、丙酮清洗沉淀次数等操作细节均能影响提取结果,同时采用改良的TCA丙酮法提纯后的结果最佳。说明改良的TCA丙酮法可应用于西藏巨柏叶片后续的蛋白质组学研究。
关键词：
巨柏 叶片 蛋白 双向电泳
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
田邁 莫海波 常亚青 湛篧篧 陈百尧 伏光辉 安建
以刺参肠组织为材料,通过蛋白质提取方法、上样前处理方法、上样量以及聚焦条件的优化,建立了刺参肠组织蛋白质双向电泳技术体系。试验结果表明,采用TCA-丙酮沉淀法制备刺参肠组织蛋白质,能够得到高纯度的蛋白质提取液。刺参样品上样前不经过处理,等电聚焦电压1 000V,电流7mA,聚焦时间3h,平衡时间30min,最佳上样量25μg,pH 4~6.5、8.5cm的IPG胶条,银染能获得较好的双向电泳图谱。通过蛋白质双向电泳体系的优化,获得了刺参肠组织的蛋白质表达图谱,为进一步研究刺参差异表达蛋白的筛选及蛋白质组学研究提供技术保障。
关键词：
刺参 肠组织 蛋白质双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
张曼 羊杏平 徐锦华 刘广 姚协丰 李苹芳
为建立高效、稳定的西瓜根系蛋白质双向电泳技术体系，对西瓜根系蛋白质样品等电聚焦（ＩＥＦ）条件、样品上样量、ＩＰＧ胶条Ｐ Ｈ值范围、染色方法等参数进行优化。结果表明，采用ＴＣＡ／丙酮法提取西瓜根系总蛋白，裂解液组成为７ ｍｏｌ／ｌ ＵｒＥＡ、２ ｍｏｌ／ｌ ＴＨｏＵＩｒＥＡ、４％ＣＨＡＰＳ（ｍ／Ｖ）、１％ＣｏＣｋＴＡＩｌ（Ｖ／Ｖ）、６５ ｍｍｏｌ／ｌ ＤＴＴ、２％Ｐ Ｈ值４～７ ＩＰＧ ＢＵＦＦＥｒ，上样量为８００μＧ，Ｐ Ｈ值４～７ ＩＰＧ（１３ Ｃｍ）胶条、ＩＥＦ条件为４８ ０００ ＶＨ，分离胶浓度为１２．５％，ＣＢＢ－ｒ２５０染色时，可获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱，该技术条件为适合．．．
关键词：
西瓜根系 蛋白质组 双向电泳
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈香玲 任惠 黄章保 苏伟强 刘业强 李果果 刘要鑫 王小媚
为建立一套适用于鉴别＂四季芒＂成花蛋白表达差异的双向电泳方法，摸索出合适的芒果叶片蛋白提取方案。以＂四季芒＂芒果叶片为材料，采用ＴＣＡ－丙酮法、酚抽提乙酸铵沉淀法、改良酚抽提乙酸铵沉淀法等３种芒果叶片蛋白提取方法，进行ＳＤＳＰＡＧＥ和双向电泳，比较这些方法的提取效果。结果表明，改良酚抽提乙酸铵沉淀法比一般酚抽提法获得更高质量的蛋白。对沉淀产物洗涤和干燥步骤的优化能有效提高ＴＣＡ－丙酮法蛋白提取质量。提取液Ｐ Ｈ能明显影响改良酚抽提乙酸铵沉淀法所提蛋白的得率、２－ＤＥ凝胶蛋白点数量和分布。Ｐ Ｈ ８．５提取液所提蛋白获得最多的２－ＤＥ蛋白点，但在小分子区域蛋白分辨率比Ｐ Ｈ９．０提取液所提蛋白低．．．
关键词：
芒果 蛋白提取 双向电泳 蛋白质组
[期刊] 水产学报
[作者]
杭楠 谢潮添 陈昌生 纪德华 徐燕
蛋白质样品的制备是双向电泳分析的关键。为探索适用于坛紫菜叶状体蛋白质双向电泳样品的制备方法,实验对3种常用植物蛋白质分离方法进行了优化和改进,并分别同3种蛋白质裂解液联用,比较了9种方法的总蛋白质得率及双向电泳图谱效果。结果发现,采用三氯乙酸/丙酮沉淀法与裂解液C(7 mol/L尿素,2 mol/L硫脲,2%CHAPS,2%TritonX-100,2%IPG Buffer pH 3～10,65 mmol/L DTT)联用的方法,坛紫菜叶状体的蛋白质得率最高,且双向电泳图谱显示此法获得的蛋白质点数最多,蛋白点形状规则,水平和垂直拖尾情况较轻,图像清晰。实验结果还发现,在进行双向电泳分析时,采用p...
关键词：
坛紫菜 蛋白质组 双向电泳 样品制备
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
庄维兵 高志红 章镇 侍婷 邵静
以果梅花芽为材料,比较了TCA/丙酮法和酚抽法2种总蛋白质提取方法对蛋白质双向电泳(2-DE)的影响,同时对IPG胶条种类、凝胶浓度、蛋白质上样量及染色方法等环节进行了优化。结果表明:TCA/丙酮法比酚抽法在2-DE凝胶图谱上的蛋白质点数增多,图谱背景也比较清晰,没有明显的纵横条纹;采用17 cm pH 4～7的胶条、10%的凝胶浓度、1.5～1.8 mg的蛋白质上样量,经改良胶条考马斯亮蓝G-250染色后可获得背景清晰、重复性好、蛋白质分辨率高的2-DE图谱。高质量的果梅花芽蛋白质提取方法和蛋白质双向电泳体系的优化可为果梅蛋白质组学研究奠定技术基础。
关键词：
果梅 花芽 蛋白提取 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
董婧 逯晓萍 吕二锁 薛春雷 李俊伟
为了优化玉米叶片双向凝胶电泳技术条件，通过比较３种总蛋白提取方法对玉米双向电泳结果的影响，并对蛋白质上样量、ＩＥＦ等电聚焦条件及ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶浓度等参数进行探索、优化；结果发现，与酚提取法和磷酸缓冲液法相比，采用改进的ＴＣＡ／丙酮法提取总蛋白操作简单、方便，所得的２－ＤＥ图谱中蛋白质点数量多、背景清晰，是一种适用于提取玉米苗期叶片总蛋白的有效方法；同时筛选出：第一向ＩＥＦ等电聚焦样品上样量为８００μｇ，聚焦条件为２０ ０００ Ｖ／ｈ，在浓度为１２．５％的ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，能够在１７ Ｃｍ的ＩＰｇ胶条上获得背景低、分辨率较高、重复性好的双向电泳图谱，该优化体系适用于玉米叶．．．
关键词：
玉米 叶片 蛋白质提取 双向电泳
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王珊珊 郝宇涵 任婧祺 郭春深 朱延殊 范海延
双向电泳(2-DE)是蛋白质组学研究的重要支撑技术之一。为建立适于黄瓜根系蛋白质组分析的双向电泳技术,对黄瓜根系蛋白质样品提取方法、裂解缓冲液配方及SDS-PAGE分离胶浓度等参数进行研究。结果表明:采用TCA/丙酮法提取黄瓜根系中的蛋白质,裂解缓冲液为8mol·L-1尿素、2mol·L-1硫脲、2%IPG Buffer、4%CHAPS、1%TBP、65mmol·L-1DTT、2mmol·L-1EDTA、0.001%溴酚蓝和1%鸡尾酒,SDS-PAGE分离胶浓度为11%时,可获得分离效果较好的双向电泳图谱。该技术条件为适合黄瓜根系蛋白分离的较优双向电泳体系。
关键词：
黄瓜根系 蛋白质组 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
石海波 王云生 冯勇 高聚林 白海 苏二虎 张来厚 赵瑞霞 刘志雄 黄灵忠 姜丽丽
为了获得玉米籽粒双向电泳中蛋白质提取的最佳方法,建立最佳的玉米籽粒蛋白双向电泳技术体系,对酚抽提法、三氯乙酸/丙酮沉淀法(TCA/丙酮沉淀法)和可溶性蛋白提取法3种不同提取方法得到的蛋白质进行了分析,并在相同条件下进行双向电泳比对分析,结果表明:可溶性蛋白提取法获得的蛋白纯度高、浓度适中、双向电泳蛋白质点最丰富,最适合双向电泳研究;利用可溶性蛋白提取法获得的蛋白,对第一向等电聚焦参数等条件,以及不同p H值范围的IPG预制凝胶条进行了比较分析,结果表明:采用p H值3~10的IPG预制凝胶条时,采取电压梯度上升的方式,总聚焦70 000 Vhs、上样量800μg效果最佳,采用p H值4~7的I...
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玉米 籽粒 蛋白组学 双向电泳
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