利用花楸树人工控制授粉后的未成熟合子胚进行体细胞胚的诱导培养,通过石蜡切片、扫描电镜和透射电镜对合子胚和体细胞胚的发生发育过程进行组织、细胞观察。结果表明:1)体细胞胚发生进程与合子胚相似,均经历了球形期、心形期、鱼雷形期,最终发育成成熟胚;2)直接发生和间接发生在愈伤组织表面的体细胞胚均为单细胞起源,间接发生在愈伤组织内部的体细胞胚存在单细胞起源,同时还存在可能的多细胞起源;3)子叶和愈伤组织表面发生的体细胞胚在发育早期均具明显的胚柄,鱼雷形胚期胚柄退化;4)愈伤组织内部发生的体细胞胚没有胚柄;5)与合子不同,胚性细胞的第1次分裂为均等分裂;6)多细胞原胚周围降解的细胞具有细胞程序性死亡的形...

Maturing seeds were collected from fifty-year-old trees of Fraxinus mandshurica. The cotyledon and hypocotyl zygotic embryos were excised and cultured on 1/2MS media to induce somatic embryos. In cytological study of embryo development, by the way of paraffin, somatic and zygotic embryogenesis was o...

以刺槐不同胚龄的未成熟合子胚为外植体,采用混合正交试验设计,研究幼胚胚龄和不同外源激素种类及质量浓度对刺槐胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚分化、萌发的影响。结果表明:开花后8周(55天左右)是胚性愈伤组织和体胚诱导的最佳外植体取材时期;MS+2,4-D5.0mg·L-1+BA0.5mg·L-1是诱导胚性愈伤组织的最佳培养基,出愈率最高为95.42%±0.02%;MS+NAA0.5mg·L-1+BA0.5mg·L-1+谷氨酰胺250mg·L-1+水解酪蛋白500mg·L-1是体细胞胚诱导和分化的最佳培养基,直接体细胞胚发生率最高为92.40%±0.12%,通过愈伤组织诱导体细胞胚发生的频率最高为90...

以云杉未成熟合子胚为外植体,研究球果采集日期、基因型、植物生长素和细胞分裂素对愈伤组织诱导的影响,同时对影响体细胞胚分化和成熟的关键因素进行探讨。结果表明:合适的胚性愈伤组织诱导和增殖培养基为1/2 LM+2,4-D 2.2 mg·L-1+6-BA 1.1 mg·L-1+蔗糖10 g·L-1+凝胶2 g·L-1+酶解酪蛋白1 g·L-1;合适的分化培养基为1/2 LM+ABA 24 mg·L-1+PEG4000 50 g·L-1+蔗糖30 g·L-1+活性炭1 g·L-1+凝胶4 g·L-1+水解酪蛋白1 g·L-1;合适的萌发培养基为1/4 LM+蔗糖20 g·L-1+活性炭1 g·L-1+...

【目的】探讨不同植物生长调节剂对白刺花胚性愈伤组织诱导的作用,以及培养基中氮源和无机盐浓度对白刺花体细胞胚发生和植株再生的影响,以期建立白刺花体细胞胚发生、发育及调控技术体系,为白刺花种苗快速繁殖体系建立及遗传转化研究提供参考。【方法】以白刺花叶片为外植体,研究生长调节剂2,4-D(1.0、2.0、3.0、4.0 mg·L~(-1))、NAA(0、0.5、0.8、1.0 mg·L~(-1))、6-BA(0.2、0.5、1.0、2.0 mg·L~(-1))和TDZ(0、0.2、0.5、1.0 mg·L~(-1))组合对胚性愈伤组织诱导,及NAA(0、0.2、0.5 mg·L~(-1))、6-BA(0、0.5、1.0 mg·L~(-1))和TDZ(0、0.2、0.5 mg·L~(-1))组合对体细胞胚发生的调控作用,筛选最优生长调节剂组合;并研究培养基中KNO_3和NH_4NO_3比例对体细胞胚发生的作用,及MS培养基中无机盐浓度(1/5MS、1/4MS、1/3MS、1/2MS)对体细胞胚萌发的影响,筛选最佳的体细胞胚发育及成熟萌发条件。【结果】白刺花叶片外植体胚性愈伤组织诱导适宜培养基为MS+2,4-D 3.0 mg·L~(-1)+NAA 0.5 mg·L~(-1)+6-BA 0.2 mg·L~(-1)+TDZ 1.0 mg·L~(-1)+蔗糖40 g·L~(-1)+琼脂7.0 g·L~(-1),诱导率为42.0%。采用MS基本培养基时,最佳的体细胞胚发生培养基为MS+NAA 0.5 mg·L~(-1)+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+TDZ 0.5 mg·L~(-1)+蔗糖40 g·L~(-1)+谷氨酰胺100 mg·L~(-1)+琼脂7.0 g·L~(-1),体细胞胚发生率为78.46%,总胚数为对照的3.6倍;MS培养基中,KNO_3浓度提高1倍、NH_4NO_3降至1/2时,体细胞胚发生率可提高至91.33%,总胚数为采用MS基本培养基时的1.4倍; 1/3MS培养基有利于体细胞胚的萌发,萌发率为82.75%,幼苗长势良好,单株平均鲜质量为76 mg,幼苗驯化移栽1个月后成活率达90%以上。【结论】白刺花叶片接种于添加2,4-D、NAA、6-BA和TDZ不同组合的诱导培养基上,可脱分化形成愈伤组织或胚性愈伤组织,2,4-D浓度对愈伤组织形态和质地有较大影响。TDZ有利于体细胞胚的形成,适宜浓度的生长素与细胞分裂素组合及硝态氮和铵态氮的比例对体细胞胚的形成和发育具有调控作用,降低MS无机盐浓度可提高体细胞胚萌发率,本试验体系的再生植株移栽成活率达90%以上。

【目的】通过龙眼(Dimocarpus longan Lour.)体细胞胚发生早期5个阶段的蛋白质组学研究,为植物胚胎发育相关蛋白基因分离和植物体细胞胚发生相关机制等的深入研究奠定基础。【方法】利用已建立的龙眼体细胞胚发生再生系统,经同步化培养获得龙眼体细胞胚发生早期5个阶段胚性培养物,并采用双向电泳和质谱技术对龙眼体细胞胚发生早期的蛋白质组变化进行分析。【结果】龙眼体细胞胚发生早期5个阶段的蛋白质2D表达谱可检测到1 203—1 798个蛋白点,其在龙眼体细胞胚发生早期各阶段大部分具有阶段差异表达特性,有小部分是阶段特异表达,根据其蛋白数目、表达丰度、分子量和等电点等变化,确定了龙眼体细胞胚...

以香榧Torreya grandis‘Merrillii’胚为外植体,研究了基本培养基、复合添加物、碳源以及植物生长调节物质对愈合组织形成的影响,筛选出胚性愈合组织诱导和增殖的适宜条件,并初步进行了体细胞胚的诱导与萌发试验。结果表明:Schenk and Hildebrandt(SH)是最佳基本培养基,碳源以蔗糖最好,在SH中添加谷氨酰胺,愈合组织诱导率显著高于其他处理,达50.8%;低浓度的萘乙酸(NAA)或2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)能够促进愈合组织的诱导,NAA的促进作用比2,4-D明显,当NAA的质量浓度为0.1 mg.L-1时,愈合诱导率显著高于其他处理,达60.1%;SH+0...

总结了核桃体细胞胚发生的研究进展 ,列表统计已报道的核桃 5个种和 3个杂种体细胞胚发生的外植体与诱导条件 ,重点论述了影响核桃体细胞胚发生与次生胚发生的因素 ,介绍了核桃体细胞胚萌发与转化的方法。还总结核桃转基因研究的进展 ,提出了用核桃体细胞胚发生系统进行外源基因转移的操作模式

研究北美蓝云杉体细胞胚发生技术,对该树种的胚胎发生机理和建立相关的快繁技术体系等具有一定的理论意义。以成熟胚为外植体,分别对基本培养基、生长调节剂种类和浓度对其体细胞胚发生各阶段的影响进行了研究,同时观察体细胞胚发生过程的形态特征。结果表明:1)胚性愈伤组织诱导培养基,首先在DCR培养基+2,4-D5.0mg/L+6-BA4.0mg/L+KT2.0mg/L诱导15d后,之后转入DCR培养基+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L,胚性愈伤诱导率最高为45.3%;2)胚性愈伤组织保持与增殖培养基为1/2LM培养基+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+K...

该文建立了地被菊品种‘玉人面’直接体细胞胚受体体系。试验以‘玉人面’叶片为外植体,研究了培养基、生长调节剂等因子对其直接体细胞胚诱导的影响,同时还进行了抗生素敏感性试验。结果表明:①在相同浓度下,KT诱导体胚的效果优于6-BA;②体胚诱导培养基为MS+KT 2.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,诱导10 d后,转入去除2,4-D的体胚发育培养基MS+KT 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L中培养30 d,体胚发生率最高为93.0%,平均每外植体分化的体胚数为13.6个;③MS基本培养基对‘玉人面’体胚发生的效果优于N6、B5培养基;④‘玉人面’直接体...

用电镜细胞化学定位的方法,对文冠果种胚诱导体细胞胚发生过程中非胚性愈伤组织、胚性愈伤组织及球形胚、鱼雷胚发育期间Ca2+的分布动态进行超微结构水平上的定位比较研究。结果表明:非胚性细胞Ca2+的含量最少,集中分布在细胞壁和细胞间隙中;胚性愈伤组织的细胞Ca2+的含量明显增加,集中分布在液泡膜、质膜和细胞质中;球形胚时,质膜上Ca2+积累的颗粒较大,但量相对较少;鱼雷胚期Ca2+的含量明显增多,集中分布在胚芽端和胚根端,胚根最外层细胞的外侧的细胞壁明显增厚,其细胞壁的外侧Ca2+分布多。推测Ca2+与文冠果体细胞胚发生过程中细胞的发育时期密切相关。

【目的】研究脱落酸、PEG、肌醇、碳源、凝固剂及培养方式等对抗松材线虫病赤松体细胞胚发育及成熟萌发的影响。【方法】通过对抗松材线虫病赤松种质资源库的调查与分析,选用诱导和增殖状态良好的抗松材线虫病赤松无性系22#-1和13#-1为供试材料,通过不同培养条件的对比试验,筛选出最优的抗病赤松体细胞胚发育及成熟萌发条件。采用SPSS17.0等软件对体细胞胚进行统计分析。【结果】添加15 mg·L(-1)ABA和140 g·L(-1)PEG8000的LP培养基上,正常体细胞胚数达到171个·g(-1),高于其他处

将大蒜发芽叶培养于ＭＳ（１／２ＮＨ４ＮＯ３）＋２，４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ上，形成愈伤组织。愈伤组织继代后，转移到ＭＳ（ＫＮＯ３２５２５ｍｇ／Ｌ＋（ＮＨ４）２ＳＯ４１６５０ｍｇ／Ｌ，无ＮＨ４ＮＯ３）＋ＫＴ２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ４ｍｇ／Ｌ＋Ａｄｅｎｉｎｅ２ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．０１ｍｇ／Ｌ培养基上，２５天后，形成体细胞胚并能再生植株。其中，胚状体发生的必要条件是ＮＯ３－／ＮＨ４＋＞１，ＫＴ／ＩＡＡ＞１００，ＩＡＡ＜０．０１ｍｇ／Ｌ。

研究了不同浓度TDZ对两个非洲紫罗兰品种Elizabeth和Nilson Blue叶片外植体愈伤组织形成、类型以及体细胞胚形成与发育的影响。结果表明,Elizabeth与Nilson Blue在培养反应、再生潜力及形态发生途径上均存在显著差异。TDZ提高叶片愈伤率,促进愈伤组织生长,适宜浓度为0.5~1.0 mg.L-1;TDZ与NAA组合能高效诱导Elizabeth胚性愈伤组织形成和体细胞胚发生。扫描电镜观察表明:随TDZ浓度增加,体细胞胚发育加快,同步化程度高。Elizabeth叶片外植体体细胞胚诱导最适培养基为MS+0.2 mg.L-1NAA+1.0 mg.L-1TDZ。

[目的 ]通过研究LaSPL2和LaSPL3的分子特征和表达模式,揭示其在落叶松体细胞胚发育中的功能。[方法 ]利用同源克隆及RACE技术,获得LaSPL2和LaSPL3的全长cDNA序列,通过生物信息学分析其编码蛋白保守结构域、进化关系等,利用烟草瞬时表达体系进行亚细胞定位研究,采用qRT-PCR检测2个基因在落叶松体细胞胚发育过程的表达模式。[结果 ]本研究获得了2个落叶松SPL同源基因LaSPL2和LaSPL3,分别编码532个氨基酸和191个氨基酸,其c DNA序列均存在miR156识别位点。多序列比对分析发现:它们均具有保守的SBP结构域。亚细胞定位结果显示:LaSPL2和LaSPL3定位于细胞核中。qRT-PCR结果表明:在落叶松体细胞胚发育早期,ABA下调LaSPL2和LaSPL3表达;随着体细胞胚的进一步发育,LaSPL2和LaSPL3的表达水平分别在10 d和14 d达到峰值;之后随着体细胞胚发育成熟,它们的转录水平逐渐下降,并在42 d达到最低值。[结论 ]通过分析ABA缺失对LaSPL2和LaSPL3表达的影响,表明ABA可能是落叶松体细胞胚发育早期LaSPL2和LaSPL3下调表达的主要因子;LaSPL2和LaSPL3的表达量在体细胞胚发育的早期阶段均达到最高峰,表明它们可能是早期胚胎形成的一个重要调控因子;LaSPL2和LaSPL3序列分析及表达模式,表明它们在体细胞胚发育中可能受miR156调控,并在体细胞胚的成熟过程中具有重要意义。