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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
周文丽 唐永红 陈耀锋 成巨龙 王会强 杨梅
【目的】利用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,GV3101)介导法获得转芪合酶基因烟草,改良烟草对根黑腐病的抗性。【方法】以普通烟草品种"97204"叶片为受体,采用根癌农杆菌介导法,将芪合酶基因导入烟草基因组并进行分子检测,利用灌根法对4株转芪合酶基因烟草植株接种烟草根黑腐病菌,观察烟草地上部分和根部的变化,并测定苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)活性。【结果】通过根癌农杆菌介导、抗性选择和分子检测,获得32株转芪合酶基因烟草。从中选取长势一致的4株转基因烟草用于抗病性鉴定,结果表明,2株在灌根接种后生长正常,另外2株在接种第7天时出现轻微黄化,3株...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
安娜 陈耀锋 崔志刚 白延红
【目的】研究根癌农杆菌介导的芪合酶基因转化烟草遗传体系的优化条件。【方法】以"中烟99"叶片为受体,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,GV3101)介导法,将芪合酶基因导入烟草基因组,并对其遗传体系进行了优化,对筛选获得的转基因烟草植株进行检测。【结果】根癌农杆菌介导的芪合酶基因遗传转化的最佳条件为:将预培养2 d的烟草外植体,用稀释10倍的GV3101菌株菌液(OD600=0.6)浸染8 min后,共培养3 d,然后转入含卡那霉素(Km)50 mg/L和羧苄青霉素(Cb)500 mg/L的筛选分化培养基上诱导分化,待抗性芽长到2~3 cm后,转入含Km 50...
关键词：
芪合酶基因 烟草 根癌农杆菌 遗传转化
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
梁燕 王鸣 陈杭 陈大明
采用农杆菌介导的叶盘法 ,用胡萝卜茄红素 -β-环化酶反义 RNA基因对烟草 SRI野生类型种及Xanthi品种进行了遗传转化。 GU S检测结果表明 ,胡萝卜茄红素 -β-环化酶反义 RNA基因对两个不同烟草材料的遗传转化率均为 4 1 .7% ;Xanthi Southern杂交的阳性率为 6 7% ;转基因烟草当代叶片组织中茄红素和胡萝卜素含量与对照植株不同
[期刊] 林业科学
[作者]
李春秀 齐力旺 史胜青 汪阳东 王建华 张守攻
克隆毛白杨纤维素合酶基因(PtoCesA1),全长为3215bp,与欧洲颤杨的PtrCesA1基因的同源性为97%,具有开放的阅读框,编码区在52~2988碱基之间,为2937bp。构建PtoCesA1基因的全长正义植物表达载体为pBIPA1,经酶切和PCR鉴定确认载体构建正确。通过农杆菌介导的方法将pBIPA1表达载体转入烟草中,转基因植株的纤维细胞壁厚度和木质部厚度都有不同程度的下降,形态表征为植株明显变矮,叶片变小。
关键词：
毛白杨 纤维素合酶基因 遗传转化
[期刊] 林业科学
[作者]
罗在柒 郭辉力 杨亚东 杨明峰 马兰青 王有年
【目的】白藜芦醇作为植物次生代谢产物不但能提高果树抗真菌能力,还能改善果品质量。遗传转化芪合酶基因能够增强植物的抗真菌能力,虎杖芪合酶基因具有较高的催化合成白藜芦醇的效率,研究虎杖芪合酶基因遗传转化壶瓶枣,以期获得具有抗真菌能力且改善枣果实品质的遗传转化新材料。【方法】通过组织培养再生体系与目的基因转化技术,优化获得茎诱导丛生芽,构建植物表达载体,优化遗传转化体系,采用农杆菌介导法将虎杖白藜芦醇生物合成关键酶基因Pc PKS5遗传转化壶瓶枣。【结果】优化壶瓶枣茎段诱导得到高分化率的丛生芽遗传转化体系,再生增植率为11.0,为壶瓶枣成功实现遗传转化奠定了基础。将壶瓶枣0.8~1.0 cm含茎尖和...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
翟晓霏 张文 赵旭勉 王琼 朱元娣
植物DELLA蛋白是赤霉素信号传导途径的反向调节因子,DELLA蛋白突变体导致植株矮化。苹果MdRGL1a是编码苹果DELLA蛋白家族的基因之一,为了研究该基因的生理功能,用从‘威赛克’苹果中克隆的MdRGL1a基因,分别构建GFP瞬时表达载体和植物表达载体。通过基因枪法轰击洋葱表皮细胞,激光共聚焦显微镜下观察MdRGL1a基因的亚细胞定位。利用农杆菌EHA105介导的叶盘法转化烟草(Nicotianna tabacumL.),对转基因烟草进行PCR扩增和GUS染色法检测,观察转基因烟草的形态学性状,利用ELISA方法测定烟草的内源激素水平。结果表明,MdRGL1a-GFP融合蛋白定位在细胞核...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
庞宏东 向林 赵凯歌 李响 杨楠 陈龙清
为研究蜡梅SAMT基因的调控功能,利用农杆菌介导法将其转入烟草中。经PCR方法对转基因烟草进行检测,结果显示:16株转化植株中有15株扩增出了目的条带,进一步的RT-PCR检测结果表明,阳性植株均发生了正确转录。对转基因烟草植株和未转基因对照植株进行植株大小、叶片形态、花色、花瓣大小以及花期进行观察,均未发现有明显差异。采用顶空固相微萃取以及气相色谱--质谱技术(HS-SPME-GC-MS)对转基因烟草鲜花进行花香成分分析,结果表明,转CpSAMT基因烟草中有较高含量的苯甲醇、己烯醇、芳樟醇、石竹烯和苯甲醛等成分,但未能检测到水杨酸甲酯和苯甲酸甲酯成分。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
杨友才 周清明 朱列书
为探明烟草品种青枯病抗性遗传规律,采用温室苗期叶片人工注射接种法对生产上的烟草主栽品种共57份材料进行了青枯病抗性鉴定,结果显示,Ti448A,D101,G80等3个品种对青枯病表现高抗;表现中抗的有NC82,中烟90等17个,大部分品种表现感病或高感,没有发现免疫品种.并选用高感青枯病品种红花大金元作母本与高抗青枯病品种Ti448A作父本进行杂交,对两亲本及其杂交后代F1,F2,BC1P1代进行抗病性鉴定,表明抗病亲本材料Ti448A的抗病性由一对显性基因控制.
关键词：
烟草 青枯病 品种抗性 抗性遗传
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵曾强 韩泽刚 李会会 李潇玲 张析 张薇
为了进一步验证ＧｈＷＲＫＹ４４（登录号：ＫＪ８０１８０７）基因在烟草异位表达后的功能，构建了Ｃａ ＭＶ３５Ｓ启动子调控、ＮｏＳ为终止子的棉花抗枯萎病相关基因（ＧｈＷＲＫＹ４４）的过表达载体；电击法将其导入农杆菌ＧＶ３１０１，菌液ＰＣＲ筛选鉴定阳性菌株，采用农杆菌介导法转化烟草；Ｔ０转化植株经卡那霉素筛选、ＰＣＲ检测后，随机从转基因Ｔ０中选取５株进行ＲＴ－ＰＣＲ检测，均为阳性株，说明ＧｈＷＲＫＹ４４基因不仅整合到烟草基因组中而且还能正常转录。对过表达ＧｈＷＲＫＹ４４基因的转基因烟草Ｔ１株系进行实时荧光定量ＰＣＲ（ｑＲＴ－ＰＣＲ）分析。结果表明，在正常生长情况下，ＰＲ５和ＮＰＲ１的表达量在转ＧｈＷ．．．
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
包梅荣 谭晓风 乌云塔娜 张琳
为研究油茶种子成熟调控蛋白基因的功能,以pCAMBIA1304质粒为载体,根据油茶种子成熟调控蛋白基因的cDNA序列设计了小干扰RNA(Si RNA)序列,构建了油茶种子成熟调控蛋白基因小干扰RNA植物表达载体pCAMBIA1304-si RNA,并借助农杆菌介导叶盘法将pCAMBIA1304-si RNA转化到野生型烟草中,获得了稳定表达的转基因烟草苗。为下一步的油茶种子成熟调控蛋白基因的功能鉴定奠定了基础。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
许石剑 肖炳光 高玉龙 李永平
以含抗烟草花叶病毒(TMV)基因的烟草Ti245为抗病亲本,以K326为感病亲本,经杂交得到F1,F1自交得到F2群体,分析了Ti245抗TMV的遗传规律,并对抗性基因进行SSR标记定位。结果表明:Ti245对TMV的抗性由1对隐性基因控制;基因定位发现,Ti245抗TMV的位点位于LG9连锁群,标记*Tp217200距目的基因最近,遗传距离为3.3cM。
关键词：
烟草 烟草花叶病毒:遗传分析 基因定位
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
崔红 慕平利 李雪君 刘梦林
为研究fps基因在烟草发状根中的表达对发状根生长及物质代谢的影响,对fps转基因发状根株系k-3离体培养条件下的生长特性及抗菌性进行了研究.在摇瓶悬浮培养过程中,发状根生长呈现"S"型曲线,最初生长缓慢,到第10天开始迅速生长,25 d进入生长平台期;利用气升式内环流生物器,在25℃通气量为2 L/min,接种量为1 g的条件下培养25 d,发状根鲜重达94.7 g/L;以赤星病菌(Alternaria alternata)粗毒素为诱导子对发状根诱导培养,转基因发状根浸提液在黑胫病根刺接种试验中,能够明显提高烟草幼苗对黑胫病的抗性.
[期刊] 林业科学
[作者]
王桂英 杨敏生 霍雪梅 王艳平 李珊珊
以含有Cry3Aa基因的重组质粒pBCC3为基础,利用PCR和DNA重组技术,从pBCC3中克隆出抗虫基因Cry3Aa,将其正向插入载体pCAMBIA1305的CaMV35S启动子和NOS终止子之间,构建成pCAMBIA1305-Cry3Aa植物表达载体,并导入根癌农杆菌EHA105。采用农杆菌介导的遗传转化法,将Cry3Aa基因转入已转Cry1Ac+API基因的741毛白杨无性系pB29中,获得转双Bt基因的741杨。在含潮霉素的培养基中进行多次继代筛选,获得抗性稳定的无性系9个,编号为pCCA1—pCCA9。采用特异引物分别对转基因植株进行PCR检测,结果显示Cry1Ac基因稳定存在于pB...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
郭娜 胡冠军 赵晋铭 黄婧 孙聚涛 李丽红 盖钧镒 邢邯
[目的]大豆疫霉根腐病是大豆毁灭性的病害之一,防治该病最安全有效的方法是培育和利用抗性品种。迄今为止,已在大豆基因组上鉴定了21个大豆疫霉根腐病抗性基因,但是在中国只有少数基因(如Rps1c、Rps1k等)抗性有效。因此,急需发掘新的大豆疫霉根腐病抗性基因,以满足抗病育种的需要。‘大方六月早’对大豆疫霉菌的抗谱较广,是目前筛选出的优异抗源。[方法]采用下胚轴创伤接种方法进行抗病性鉴定,以品种‘大方六月早’为抗病亲本与品种‘矮脚早’配置杂交组合获得F2∶3代家系群体,并进行遗传分析,通过SSR(simple sequence repeat)标记对‘大方六月早’的抗性基因进行定位。[结果]该群体的...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
郭娜 胡冠军 赵晋铭 黄婧 孙聚涛 李丽红 盖钧镒 邢邯*
[目的]大豆疫霉根腐病是大豆毁灭性的病害之一，防治该病最安全有效的方法是培育和利用抗性品种。发掘大豆疫霉根腐病抗性基因，是抗病育种的关键。[方法]采用下胚轴创伤接种方法进行抗病性鉴定，以品种‘大方六月早’为抗病亲本与品种‘矮脚早’配置杂交组合获得F2:3代家系，并进行遗传分析，通过SSR标记（Simple Sequence Repeat）对‘大方六月早’的抗性基因进行定位。[结果]‘大方六月早’对大豆疫霉菌株AH的抗性由1对主效基因控制，抗病对感病表现为显性。通过分子作图，将抗病基因RpsAH定位在大豆3号染色体（即连锁群N）上，距离标记Sat_166为4.1 cM。[结论]大豆品种‘大方六月...
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