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[期刊] 淡水渔业
[作者]
郑尧 赵志祥 史磊磊 宋超 徐跑 陈家长
在快速生长期日粮中添加较高浓度芦丁(0、0.1和0.3 g/kg),通过免疫、生殖器官组织切片和Tunel细胞凋亡分析,探究芦丁作为饲料免疫增强剂对吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)幼鱼组织切片及细胞凋亡的影响。结果表明低浓度芦丁会使肠道血小板增多,杯状细胞不规则;肝脏kupffer细胞少;并会造成肠道和肝脏细胞凋亡阳性率增高。高浓度芦丁组肝、脾脏出现细胞凋亡和含铁血黄素沉着;且造成肝脏和脾脏细胞凋亡阳性率增高;脾脏黑色素巨噬细胞中心少。此外,高浓度芦丁会对精巢、卵巢的发育起到抑制作
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李连歌 曹哲明 陶易凡 张丽 马俊蕾 李鸣霄 包景文 朱昊俊 徐跑 强俊
钙敏感受体(calcium-sensing recceptor, CaSR)在Ca~(2+)刺激下可参与调控细胞凋亡等生理过程,在机体适应逆境胁迫中发挥重要作用。为研究吉富罗非鱼(Genetically Improved Farmed Tilapia, GIFT)CaSR基因的特点及其在缺氧胁迫下参与细胞凋亡的调控机制。本研究利用RT-PCR技术克隆了吉富罗非鱼CaSRcDNA全长序列,利用qRT-PCR技术分析了该基因在不同组织中的表达模式,并进一步检测了缺氧胁迫下(0.55mg/L)肝脏中该基因和细胞凋亡相关基因mRNA的表达变化,同时利用ELISA法检测了肝脏中抗氧化酶活性的变化,以及通过HE和TUNEL染色法分别观察了肝细胞的形态变化和凋亡情况。结果显示,吉富罗非鱼CaSR cDNA序列全长3265 bp,包括21 bp 5′非编码区、2823 bp开放阅读框和421 bp 3′非编码区,编码940个氨基酸。CaSR基因mRNA在不同组织中均有表达,其中肌肉中表达量最高,肾脏次之;组织切片观察发现缺氧可导致肝脏组织结构损伤,促进肝细胞凋亡;与对照组(5.0mg/L)相比,缺氧可增强SOD、CAT和GSH-Px抗氧化酶活性,上调CaSRmRNA的表达,并引起Bcl-2、Caspase-3和P53凋亡基因mRNA的表达变化。研究结果表明, CaSR可能通过介导Ca2+调控细胞凋亡,从而参与吉富罗非鱼的缺氧应对机制。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王磊 宿红艳 王媛 穆春华 赵志文
采用热激处理烟草愈伤组织诱导细胞凋亡的产生,通过对处理烟草基因组的DNA电泳分析,力求找出促进凋亡产生的最佳温度及时间,以期为深入研究逆境条件下植物细胞程序性死亡提供一理想模型.结果表明:在53℃下处理烟草细胞2.25 h后,再经25℃恢复培养10 h能观察到较清晰的DNA梯状条带,此时烟草细胞进入凋亡状态.
关键词：
细胞凋亡 烟草 温度 热激 DNA梯形带
[期刊] 淡水渔业
[作者]
杨长庚 文华 王美姿 陆星 蒋明 田娟 喻丽娟
探讨低温胁迫下,干扰生长抑制特异性基因2(Gas2)对罗非鱼肾脏细胞系增殖和凋亡的影响。采用脂质体转染法介导Gas2短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)及阴性对照短发夹RNA处理罗非鱼肾脏细胞,24 h后,以5℃/d降温速率对转染后的罗非鱼肾脏细胞进行低温胁迫,分别在25、20、15、10℃进行细胞采集。随后,利用实时荧光定量PCR检测Gas2基因及P53基因mRNA表达变化,利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并开展WST-1细胞增殖实验检测细胞的增殖情况。结果表明,低温胁迫下,阴性对照组及Gas2干扰组中Gas2和P53基因mRNA的表达在15℃和10℃时均显著升高;Gas2干扰组中Gas2和P53基因mRNA的表达水平在所有温度下均显著低于阴性对照组;随着温度降低,阴性对照组及Gas2干扰组的细胞凋亡率均明显升高,但Gas2干扰组的细胞凋亡率明显低于阴性对照组;低温胁迫下,对照组及Gas2干扰组的细胞增殖率与25℃时相比均显著下降;当温度降至15℃时,Gas2干扰组的细胞增殖率显著高于对照组。罗非鱼肾脏细胞在受低温胁迫时,抑制Gas2基因能够降低P53基因mRNA的表达水平以及细胞的凋亡率,并增加细胞的增殖。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李彦美 马静 张志伟 李希阳 文渚媛 徐江昊 陶宁
【目的】研究丁香酚诱导癌相关成纤维细胞(CAF)的凋亡表现及其相关机制,为丁香酚的开发利用提供参考。【方法】用0(CK),30,60,90,120μmol/L丁香酚处理正常成纤维细胞(NF)24 h后,用MTT法检测细胞活力。用0(CK),30,60,90,120,150,180μmol/L丁香酚处理CAF细胞24 h后,用MTT法检测细胞活力。用0(CK),30,60μmol/L丁香酚处理CAF细胞24 h,用Annexin V-FITC和PI双染色法对细胞染色后进行流式细胞分析。用60μmol/L丁香酚处理CAF细胞0(CK),15,30,60,120 min,用Western blotting法检测凋亡相关蛋白表达水平的变化。【结果】30～120μmol/L丁香酚处理对NF细胞活力无显著影响;30～180μmol/L丁香酚处理对CAF细胞活力有显著或极显著的抑制作用,丁香酚对CAF细胞的半数抑制浓度为84.47μmol/L。60μmol/L丁香酚能够显著诱导CAF细胞凋亡。凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、P-P53、Caspase 9、Cleaved Caspase 3、Cytochrome C参与了丁香酚诱导的CAF细胞凋亡调控过程。【结论】丁香酚对CAF细胞有抑制作用,其作用可能是通过P53蛋白途径和内源性凋亡途径实现的。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵金坤 梁宏伟 邹桂伟 王焕岭 李忠
【目的】通过磷脂结合蛋白Ｖ／碘化丙啶（Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／Ｐｉ）流式细胞分析法和原位末端脱氧核苷酸转移酶标记（ＴＵｎｅＬ）法检测低氧胁迫下鲢肝、脑细胞的凋亡情况。【方法】将鲢分成对照组和低氧处理组，对照组正常饲养，低氧处理组用保鲜膜将水箱上口封住进行低氧处理，分别在鲢浮头期以及死亡期取其肝、脑组织，同时取对照组鲢肝、脑组织，采用Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／Ｐｉ流式细胞分析法和ＴＵｎｅＬ法检测其细胞凋亡情况。【结果】Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ／Ｐｉ流式细胞仪分析结果表明，在鲢肝脏中细胞凋亡率依次是对照组８．８５％、低氧处理组浮头期２２．０６％、低氧处理组死亡期２２．９１％；脑中细胞凋亡率依次是对照组８．１８％、．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
秦真东 杨敏璇 卢志杰 施斐 李亚男 詹凡玢 万全元 李军 林蠡
为系统研究草鱼血红蛋白对草鱼肾细胞（Ctenopharyngodonidelluskidney CIK）细胞的损伤机制，实验探究了血红蛋白和血红素刺激CIK细胞后细胞的生长情况，结果显示，血红蛋白和血红素明显抑制了CIK细胞的正常生长。其次，检测了血红蛋白和血红素刺激对CIK细胞内铁代谢相关基因的表达情况，结果表明，血红蛋白和血红素的刺激不同程度的上调了铁代谢相关基因的表达。通过检测被血红蛋白和血红素刺激后的CIK细胞其细胞炎症和抗氧化酶相关基因的表达情况，结果表明，血红蛋白和血红素可以通过NF-κB途径激活下游炎症因子的表达，如促炎因子TNF-α，IL-1β和IL-6，抑炎因子IL-10以及趋化因子IL-4和IL-8等，也同时激活了超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、过氧化氢酶（catalase，CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-PX）3种抗氧化酶基因的表达水平。为进一步检测血红蛋白对CIK细胞的毒性作用，实验也检测了血红蛋白刺激CIK细胞后，细胞内铁离子和ROS的变化情况，结果显示，血红蛋白的刺激显著增加了细胞内铁离子和ROS的含量。最后，实验检测了CIK细胞受血红蛋白和血红素刺激后，胞凋亡相关基因的表达情况，结果显示，血红蛋白和血红素都在不同程度上显著激活了CIK细胞凋亡相关基因的表达水平。总之，本研究结果表明，高氧化活性的血红蛋白可以激活细胞内铁代谢和炎症因子相关基因的表达，同时增加细胞内铁离子和ROS水平导致CIK细胞凋亡基因的高表达。本研究结果将丰富鱼类血液免疫基础理论，同时也为水产健康养殖提供新的参考。
关键词：
草鱼 血红蛋白 氧化损伤 凋亡
[期刊] 中国水产科学
[作者]
余欣欣 武纪文 郑国栋 邹曙明
为探究急性低氧对团头鲂(Megalobrama amblycephala)鳃组织氧化还原稳态及细胞凋亡的影响,本研究通过测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutases,SOD)、过氧化氢酶(catalases,CAT)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量,检测急性低氧胁迫下鳃组织的氧化应激水平,并采用Hoechst染色法观察了团头鲂鳃组织细胞的凋亡,同时还利用qRT-PCR技术检测了团头鲂鳃组织中凋亡相关基因Caspase 3、Caspase 8的表达量。结果显示,在溶解氧含量为(2.0±0.1) mg/L的低氧环境下,团头鲂鳃组织中SOD、CAT活性及MDA的含量均在6 h、12 h时显著增加(P<0.05)、2.32倍(P<0.05)及2.59倍(P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张书霞 陈万芳 鲍恩东
用SPF来杭鸡复制MD肿瘤模型 ,取MD肿瘤组织和相同日龄鸡的正常组织 ,制成单个细胞悬液 ,碘化丙锭染色后 ,用流式细胞仪检测细胞DNA含量和细胞凋亡率。结果 :(1)MD肿瘤有二倍体肿瘤和异倍体肿瘤 ,31例MD肿瘤中2 6例为二倍体肿瘤 ,5例是异倍体肿瘤 ;(2 )MD肿瘤细胞动力学特点是 :DNA合成期 (S期 )细胞比例明显增加 ,肾、肝、卵巢和睾丸MD肿瘤细胞S期分别为 12 13 % ,11 30 % ,12 31%和 15 2 6 % ,相应组织细胞依次为 1 37% ,1 2 7% ,1 5 4%和 0 0 7% ,增殖指数 (proliferationindex ...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
燕娜娜 邓清超 王克荣 林海洋
Bcl-2家族蛋白是目前已知的细胞凋亡中最重要的调控因子,在细胞凋亡通路中起着重要的调节作用。本研究通过把外源bcl-2基因转入栗疫病菌中,采用RT-PCR的方法检测bcl-2基因在栗疫病菌株中的表达情况,对表达bcl-2基因的转化子及野生型的菌株进行病毒传递率和致病性测定。结果表明:表达bcl-2基因的转化子表现出病毒传递率提高、致病性增强等一系列特征。由此可知:bcl-2基因对栗疫病菌细胞凋亡起调节作用,并对病菌的生物学特征有一定影响。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王洋 盛宇 李钟淑 方南洙 金一
为探究茶多酚(Tea polyphenols,TP)对体外培养鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibrolast,MEF)凋亡的影响。在MEF细胞培养液中添加质量浓度为0、10、40、70、100和150μg/mL的TP,分别培养24、48、72和96h,使用MTT法(3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,噻唑蓝,MTT法)检测细胞活力;细胞培养72h,以RT-PCR检测B-细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因(B cell lymphoma leukemia-2,Bcl-2)、和Bcl相关的蛋白X(Bcl-as-sociated X protein,Bax)、...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王帅 贾琦珍 陈根元 王连群 张玲
研究小花棘豆中毒对家兔睾丸生精细胞凋亡的影响,进一步探讨小花棘豆的中毒机理。将24只雄性家兔随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,试验组分别按照Ⅰ组15%(苦马豆素含量30 mg/kg)、Ⅱ组30%(苦马豆素含量60 mg/kg)、Ⅲ组45%(苦马豆素含量90 mg/kg)的比例添加小花棘豆,对照组仅饲喂苜蓿干草,试验期70 d。分别于攻毒后第14、35、70天每次每组随机采集2只家兔的睾丸,通过TUNEL法定位,Hoechst 33258荧光染色细胞核,流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期。从第35天开始,试
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘涛 李向臣 关伟军 马月辉
利用不同浓度(0,0.8,1.6,2.4μg/mL)的氯化镉(CdCl2)对处理牛卵母细胞前后对其成熟率、凋亡率、Ca2+分布、线粒体膜电位、Bcl-2与Bax的基因表达的影响,初步为重金属对雌性哺乳动物生殖细胞发育及细胞凋亡机制的进一步研究打下基础。利用0,0.8,1.6,2.4μg/mL的氯化镉(CdCl2)处理牛卵母细胞22 h,统计其凋亡率及死亡率;利用Annexin V-FITC检测牛卵母细胞的早期凋亡;分别用Fluo-3/AM和Rh123检测卵母细胞的Ca2+分布及其线粒体膜电位的变化;利用RT-PCR检测促凋亡基因Bcl-2和抑凋亡基因Bax的相对表达。经过上述处理后,0.8μg...
关键词：
CdCl2 牛卵母细胞 体外成熟 凋亡
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
车勇良 孙谧 欧阳五庆 姚如永 王跃军 王春波 张琇
观察扇贝多肽 (PolypeptidefromChlamysferreri) (PCF)对实验性氧化所致小鼠胸腺细胞凋亡的影响。采用台盼蓝 (TrypanBlue)活细胞拒染法在普通光学显微镜下观察细胞的存活率 ;以四甲基氮唑盐 (MTT)法测定细胞的增殖活性 ;以生化检测 (DNAladder)法观察PCF对细胞DNA片断化的影响 ;用透射电镜观察细胞的超微形态结构变化。台盼蓝染色法证实PCF能增强细胞的活性并与PCF浓度成正比 ;MTT法表明PCF不仅能保护细胞免受损伤 ,而且还能促进细胞的增殖 ,并有PCF依赖性 ;生化检测显示PCF能减少细胞凋亡的DNA片断化数目 ;细胞的超微结构还表...
关键词：
栉孔扇贝 过氧化氢 胸腺细胞 凋亡
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
郭亮 杜娟 狄和双 李忠浩 王根林
用细胞流式、台盼蓝染色、免疫组织化学等方法研究单一高温(40℃1 h)或连续高温(40℃1 h.d-1)3~7 d对乳腺上皮细胞细胞周期、凋亡及热休克蛋白(HSP70)表达的影响。结果表明:40℃1 h单一高温处理乳腺上皮细胞后24 h,G2比例极显著高于对照组(37℃)(P<0.05)。结果提示:高温诱...
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