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[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
王建国 王建军 曹传旺 孙丽丽
【目的】本文克隆了舞毒蛾的气味受体基因LdOR2,并阐明该基因在舞毒蛾各发育期和组织中的表达特征及其对CO_2浓度胁迫下的行为响应,为进一步研究气候变化下舞毒蛾的嗅觉反应机制提供理论依据。【方法】通过转录组文库筛选克隆出LdOR2基因,利用生物信息学分析其基因特性,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测LdOR2基因在不同发育阶段和组织以及不同CO_2浓度(397、550和750μL/L)下的表达水平,并利用RNA干扰(RNAi)技术研究不同CO_2浓度下LdOR2基因沉默后舞毒蛾的行为学反应。【结果】舞毒蛾LdOR2基因开放阅读框(ORF)为1 203 bp,编码400个氨基酸,蛋白分子量为45.76 kDa,理论等电点为8.22;进化树分析结果表明,舞毒蛾LdOR2与黏虫MsepOR24和双委夜蛾AdisOR21亲缘关系较近,并聚为一类;RT-qPCR结果显示,LdOR2在舞毒蛾各发育阶段均有表达,在雌蛹中表达量最高,雄成虫中表达量最低;在雌、雄成虫不同组织中,雌、雄触角中表达量显著高于其它组织(P <0.05)。LdOR2基因沉默后,舞毒蛾雌、雄成虫对丁香酚和顺-3-己烯-1-醇的趋向性减弱,而在高浓度CO_2处理条件下,舞毒蛾沉默体对7种挥发物的反应率均有所下降。【结论】舞毒蛾LdOR2在其气味识别过程中发挥重要作用,CO_2浓度变化通过调节舞毒蛾LdOR2基因的表达进而影响其对气味的敏感性。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
李欣悦 王振越 曹传旺
【目的】以森林害虫舞毒蛾为对象,研究CO_2介导下LdNPV病毒对舞毒蛾生长发育、解毒酶和保护酶的影响。【方法】利用密闭式CO_2人工气候箱研究了不同CO_2含量(397、550和750μL/L)条件下饲养的舞毒蛾幼虫,LdNPV对其生长发育指标的影响,并采用分光光度计法测定体内保护酶和解毒酶活性。【结果】高CO_2含量胁迫下舞毒蛾3龄幼虫体重累计增长率降低。LdNPV胁迫导致不同CO_2含量(397、550和750μL/L)条件下饲养的舞毒蛾3龄幼虫体重累计增长率分别比对照组增加81.27%、71.63%和68.41%;随着CO_2含量升高幼虫感染LdNPV死亡率增加,750μL/L高含量处理组死亡率为27.09%。高CO_2含量胁迫下舞毒蛾3龄幼虫体内解毒酶CarE和AChE活性随着CO_2含量升高而诱导增加,ALP活性随CO_2含量增加抑制下降;保护酶CAT活性随着CO_2含量升高诱导增加,而SOD活性随着CO_2含量升高抑制减少。高CO_2含量条件下生长的舞毒蛾3龄幼虫接种LdNPV后,随着CO_2含量升高体内CarE、ALP、AChE和CAT活性被抑制,而SOD活性表现为诱导增加。【结论】不同CO_2含量下舞毒蛾饲养至3龄幼虫接种LdNPV,随着CO_2含量增加,幼虫体重累计增长率减少、死亡率增加。舞毒蛾幼虫CarE、AChE、ALP和CAT活性随着LdNPV处理时间和CO_2含量增加而主要表现为抑制减少;SOD活性则主要表现为诱导增加。CO_2含量升高可能通过影响生长发育和生理生化增加LdNPV对舞毒蛾幼虫的致病力。
[期刊] 林业科学
[作者]
曹传旺 孙丽丽 问荣荣 豆晓洁 王志英
G蛋白偶联受体(GPCRs)是生物体内重要膜受体,通过激活三聚体G蛋白参与各种细胞内信号转导,在药物研发中具有重要的作用。从舞毒蛾无参照全转录本文库中鉴定获得GPCR家族中眼白化I型全长基因(命名为LdOA1),该基因全长453 bp,编码150个氨基酸,分子质量为17.54 kDa,理论等电点(pI)为9.76。进化树分析表明LdOA1蛋白与帝王蝶的亲缘关系较近。实时荧光定量PCR分析表明舞毒蛾3龄幼虫在溴氰菊酯、甲萘威和氧化乐果胁迫下LdOA1的表达均表现为显著抑制。
关键词：
舞毒蛾 LdOA1基因 杀虫剂 基因表达
[期刊] 林业科学研究
[作者]
国嘉兴 曾健勇 石疆红 石中斌 张国财 张杰
#N/A
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
问荣荣 王步勇 马玲
从舞毒蛾（Ｌｙｍａｎｔｒｉａ ｄｉｓｐａｒ）３龄幼虫转录组文库中鉴定获得舞毒蛾谷胱甘肽ｓ–转移酶基因全长ｃ ｄｎａ，命名为Ｌｄ Ｇｓｔｅ１。该基因全长６５１ ｂｐ，编码２１６个氨基酸。序列分析显示，Ｌｄ Ｇｓｔｅ１蛋白氨基酸序列含有Ｇｓｔ＿ｃ＿ｄｅＬｔａ＿ｅｐｓｉＬｏｎ与Ｇｓｔ＿ｎ＿ｄｅＬｔａ＿ｅｐｓｉＬｏｎ ２个保守结构域，属于类硫氧还蛋白和谷胱甘肽ｓ–转移酶２个超家族。系统进化树分析表明，舞毒蛾Ｌｄ Ｇｓｔ蛋白属于Ｇｓｔ ｅｐｓｉＬｏｎ家族。蛋白结构显示，Ｌｄ Ｇｓｔｅ１蛋白包含一个ｎ端和一个ｃ端结构，α–螺旋与β–折叠为主要结构元件。实时荧光定量ｐｃｒ结果表明，在４．０、１０．０ ｍＧ／．．．
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
张凯 周艳涛 王皙玮 姜虹 王嘉冰 张文一 严善春
为了探讨重金属铜、镉污染胁迫下舞毒蛾体内排毒代谢酶活性的变化，本文以３种不同质量分数的铜（Ｃｕ，４００、７００、１ ０００ ｍｇ／ｋｇ）、镉（Ｃｄ，１．０、３．０、６．０ ｍｇ／ｋｇ）处理土壤，用处理后的土壤盆栽１年生小黑杨扦插苗，研究舞毒蛾体内排毒代谢酶活性的变化趋势。结果发现，Ｃｕ、Ｃｄ不同浓度处理的杨树对舞毒蛾３龄、４龄幼虫体内排毒代谢酶活性有显著的干扰作用。与对照组相比，中、高质量分数Ｃｕ、Ｃｄ处理组３龄幼虫体内ＳＯｄ、ＡＣＰ和ＡｋＰ酶活性显著降低（Ｐ０．０５）。而ＰＯｄ和ｇＳＴＳ酶活性变化恰恰相反，中、高质量分数Ｃｕ、Ｃｄ处理组．．．
关键词：
重金属胁迫 小黑杨 舞毒蛾 排毒代谢酶
[期刊] 林业科学
[作者]
苑冉 李欣悦 吴韶平 曹传旺
【目的】以林业食叶害虫舞毒蛾为对象,研究CO_2浓度升高对个体生长发育、营养利用和体内解毒酶及保护酶的影响。【方法】利用密闭式CO_2人工气候箱研究了不同CO_2浓度(397、550和750μL·L~(-1))对人工饲料饲养舞毒蛾生长发育指标和营养利用的影响,并采用分光光度计法测定CO_2升高对体内保护酶和解毒酶活性的影响。【结果】CO_2浓度升高可延长舞毒蛾卵孵化历期、增加产卵量和孵化率;同时显著延长了幼虫总发育历期,而对蛹和成虫历期影响不显著。CO_2浓度升高可降低舞毒蛾幼虫相对取食率和近似消化率,同时增加食物利用率和食物转化率。750μL·L~(-1) CO_2浓度可显著诱导舞毒蛾幼虫体内超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性,分别比397μL·L~(-1) CO_2浓度处理组增加了32.05%和13.47%;随着CO_2浓度的升高,550μL·L~(-1)和750μL·L~(-1) CO_2浓度下细胞色素P450的活性比397μL·L~(-1)CO_2浓度下分别增加了78.79%和93.50%;谷胱甘肽S转移酶(GST)活性在550μL·L~(-1) CO_2浓度处理下最高,分别比397μL·L~(-1)和750μL·L~(-1)CO_2处理组活性增加71.03%和50.00%(P<0.05)。【结论】CO_2浓度升高能够影响舞毒蛾幼虫生长发育和生理代谢功能,同时舞毒蛾通过改变发育历期、增加食物的利用和转化以及改变体内解毒酶和(或)保护酶活性来维持生长以抵抗高浓度CO_2环境。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
祝孟茹 问露洁 占铭 公洁 席昌俊 闻海波 沈怀舜
为了解自噬相关基因Atg2在克氏原螯虾(Procambarus clarkia)先天免疫中的作用，本研究克隆了克氏原螯虾Atg2 (PcAtg2)基因全长序列。生物信息学分析显示，PcAtg2蛋白编码序列全长为9966 bp，推测其编码2189个氨基酸。组织定量表达分布显示，PcAtg2在克氏原螯虾的各个组织中均有表达，其中在肝胰腺中表达最高，在眼柄中表达最低。在白斑综合征病毒(WSSV)感染实验中，PcAtg2基因表达量在不同组织中均呈现显著上调趋势。RNA干扰(RNAi)实验显示，PcAtg2基因沉默后，WSSV在克氏原螯虾体内的增殖明显被抑制，同时自噬相关基因的表达量上调。透射电镜分析结果显示，在WSSV感染后，PcAtg2基因沉默组中克氏原螯虾肝胰腺组织中的自噬小体多于对照组。本研究结果可为了解克氏原螯虾应对WSSV胁迫下的调控机制提供理论参考。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
刘鹏 孙丽丽 张琪慧 曹传旺
昆虫小分子热激蛋白(smHsp)是分子质量在1243 k Da、具有分子伴侣活性的应激蛋白,可以在环境胁迫下帮助蛋白质折叠和转运。本文为明确舞毒蛾的smHsp基因特性及对杀虫剂甲萘威胁迫的响应,从舞毒蛾无参照全转录本文库中鉴定获得6个小分子热激蛋白家族基因,全长基因开放阅读框为444567 bp,编码147188个氨基酸,理论等电点为5.586.17。根据分子质量大小分别命名为Ld Hsp17.0、Ld Hsp18.7、Ld Hsp19.1、Ld Hsp20.3、Ld Hsp21.3和Ld Hsp21.4
关键词：
舞毒蛾 smHsp 甲萘威 表达分析
[期刊] 林业科学
[作者]
党英侨 殷晶晶 陈传佳 孙丽丽 刘鹏 曹传旺
【目的】舞毒蛾是林业重要害虫,细胞色素P450是昆虫体内广泛分布的参与外源化合物代谢关键酶系,探讨P450家族基因CYP6AN15v1对杀虫剂代谢解毒功能,为舞毒蛾有效治理提供依据。【方法】通过RT-PCR法获得Ld CYP6AN15v1基因c DNA全长,采用传统酶切连接的方法构建转CYP6AN15v1基因果蝇载体,通过转基因技术获得表达Ld CYP6AN15v1果蝇品系(命名为att P40>CYP6AN15v1)。采用分光光度计法研究低剂量氯虫苯甲酰胺(7.17mg·L(-1))处理对转基因和非转基
[期刊] 中国农业科学
[作者]
任鸿雁 魏强
【目的】分析水稻OsRCI2-9的功能,进而解析其耐低磷胁迫的作用机制,以利于磷高效作物的改良与选育。【方法】通过对比分析水稻磷信号中心调控因子OsPHR2超表达(OsPHR2(O))与干涉(OsPHR2(Ri))转基因植株和野生型植株基因芯片数据,发现一个在OsPHR2(O)背景下诱导表达的RCI2家族基因——OsRCI2-9,首先利用实时荧光定量PCR对芯片数据进行验证。然后根据TIGR上的基因序列设计引物,扩增其全长cDNA;进而利用DNAStar来寻找其开放阅读框,并利用TMHMM2.0对蛋白序列的跨膜结构进行预测;在Phytozome中利用BLAST搜索拟南芥和玉米中的同源基因,并将...
关键词：
水稻 RCI2家族 胁迫响应 磷
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王丹丹 王星 周翘楚
[目的]探究红光熊蜂低温胁迫不同时间、不同温度下GS、Akt2基因的表达差异,为研究红光熊蜂抵御低温胁迫的分子机制提供参考。[方法]以RT-PCR结合RACE技术,克隆、测序红光熊蜂GS、Akt2基因,通过ORF Finder、Prot Param和TBtools等生物信息学软件预测红光熊蜂GS和Akt2蛋白的结构、理化特性以及染色体定位等信息;设计GS、Akt2基因特异性引物,采用实时荧光定量PCR技术检测不同温度、不同处理时间下GS、Akt2基因相对表达量的差异。[结果]红光熊蜂GS基因全长1 417 bp,开放阅读框(ORF)1 020 bp,编码339个氨基酸;GS蛋白二级结构包括无规则卷曲(51.92%)、α-螺旋(23.89%)、延伸链(12.09%)和β-转角(12.09%),具有12个Ser、6个Thr、2个Tyr,可能为GS蛋白激酶磷酸化位点。Akt2基因全长926 bp,ORF为837 bp,编码278个氨基酸;Akt2蛋白二级结构包括α-螺旋(34.89%)、无规则卷曲(33.45%)、延伸链(23.74%)和β-转角(7.91%),具有7个Ser、8个Thr、5个Tyr,可能成为Akt2蛋白激酶磷酸化位点。亚细胞定位GS、Akt2蛋白均存在于线粒体中,为亲水性蛋白,且无信号肽序列,故均为非分泌蛋白。GS、Akt2基因分别位于红光熊蜂1H和3H号染色体上。5～25℃时,红光熊蜂GS基因相对表达量随温度降低而显著下调,而Akt2基因相对表达量则随温度降低呈明显上升趋势,且15℃时其相对表达量显著升高,5℃达到峰值。8℃低温胁迫不同时间,随胁迫时间延长,GS基因相对表达量显著下降;而Akt2基因的相对表达量显著升高,且胁迫12 h达到峰值,随后其相对表达量随胁迫时间延长而缓慢恢复。[结论]红光熊蜂GS、Akt2基因可能通过调控PI3K/Akt或Mtor/FoxO通路以抵御低温胁迫。
关键词：
红光熊蜂 基因克隆 低温胁迫 基因表达
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李清明 刘彬彬 邹志荣
【目的】探讨黄瓜幼苗对CO2浓度倍增和干旱胁迫的光合响应机理。【方法】以‘津优1号’黄瓜水培幼苗为试材,采用裂区设计,主区设大气CO2浓度(约380μmol.mol-1)和倍增CO2浓度(760±20μmol.mol-1)2个CO2浓度处理,裂区设对照、中度和重度干旱胁迫3个水分处理,研究CO2浓度倍增对干旱胁迫下黄瓜幼苗光合特性的影响。【结果】(1)干旱胁迫显著降低了黄瓜幼苗叶片净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)和气孔导度(Gs)。在干旱胁迫条件下,CO2浓度倍增可显著降低Tr和Gs、显著提高Pn,从而显著提高水分利用效率(WUE),而且CO2浓度与干旱胁迫对黄瓜幼苗叶片的Pn、Tr、WU...
关键词：
CO2浓度倍增 干旱胁迫 黄瓜 光合特性
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
冯雅楠 王迎宾 任宏芳 张东升 宗毓铮 史鑫蕊 李萍 郝兴宇
为探究干旱胁迫条件下CO_2浓度升高对谷子抗旱性的影响机理，设置2个CO_2浓度（400μmol/mol左右正常CO_2浓度和高CO_2浓度，600μmol/mol）和2个水分（正常供水和干旱处理）处理，测定孕穗期谷子光合能力、光合色素积累、叶绿素荧光、抗氧化酶、渗透调节物质、激素、信号转导相关蛋白激酶和逆境相关基因表达量等指标。结果表明：干旱胁迫下高CO_2浓度（600μmol/mol）处理显著提高谷子叶片水分利用效率（WUE）、净光合速率（Pn）、类胡萝卜素含量（Car）和类胡萝卜素/叶绿素（the ratio of carotenoids to chlorophyll）；显著增加光化学淬灭系数（qP）、非光化学淬灭系数（NPQ），降低蒸腾速率（Tr）；显著增加谷子叶片热休克蛋白（HSP-70）含量、脯氨酸（Pro）和脱落酸（ABA）含量及其相关基因表达量。干旱胁迫下高CO_2浓度（600μmol/mol）处理可显著增加谷子叶片丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）含量及其相关基因表达量，过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽-S-转移酶（GST）活性也显著增加。综上，高CO_2浓度（600μmol/mol）处理可通过缓解干旱胁迫下谷子叶片气孔导度和水分利用效率的降低、提高谷子渗透调节及信号转导能力，从而促进抗旱相关基因表达来提高谷子的抗旱能力。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
肖瑞霞 王新国 夏国军 李永春 牛洪斌 王翔 尹钧 任江萍
【目的】克隆与逆境胁迫相关的基因,并对其序列特征、进化关系和表达特性进行分析,探讨该基因在小麦抗逆调控过程中的生物学功能,为进一步解析植物的抗逆机制提供候选基因和理论依据。【方法】以cDNA芯片数据获得的水分胁迫诱导上调表达基因EST序列为探针,对小麦EST数据库进行搜索,筛选与探针同源性在97%以上的EST序列,通过电子克隆结合RT-PCR获得该基因cDNA全长,采用生物信息学软件分析比较克隆基因的保守结构域及序列特征;采用MEGA6.0软件构建该基因的系统进化树;将测序正确的该基因片段通过EcoRⅠ和HindⅢ限制性内切酶酶切连接至原核表达载体pMAL-c2X,重组质粒转化大肠杆菌BL21...
关键词：
小麦 C2结构域蛋白 基因克隆 表达分析
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