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[期刊] 中国农业科学
[作者]
于渤洋 吕文涛 巨婷婷 刘洋 姜美华 尹靖东
【目的】以小鼠成肌细胞(C2C12)为模型探讨蛋氨酸代谢产物腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)对肌肉来源的多能干细胞成脂分化及脂肪沉积的影响。【方法】分别用含有0、0.25、1.0和2.0 mmol·L-1SAM的培养基处理细胞,在处理后的0、24、36和48 h分别对各处理组细胞进行油红O染色观察细胞形态并测定光密度(OD)值;在处理后第2天收集细胞总RNA与总蛋白,分别用RT-PCR和western blotting方法检测细胞成脂相关基因的mRNA与蛋白表达水平。【结果】经SAM处理后,细胞表现出脂肪细胞的形态特征;细胞内脂肪沉积水平上升,并且随SAM处理浓...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
冉宏标 赵丽玲 王会 柴志欣 王吉坤 王嘉博 武志娟 钟金城
【目的】拟通过腺病毒介导的超表达及siRNA干扰试验，分析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的影响，为解析lncFAM200B对牦牛肌内脂肪细胞脂质沉积的调控机制奠定基础。【方法】采集牦牛背最长肌组织，采用酶消化法和差速贴壁法分离牦牛肌内前体脂肪细胞；构建包装lncFAM200B超表达腺病毒，设计合成其siRNA干扰序列；通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析lncFAM200B超表达与干扰后脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα、AP2,lncFAM200B潜在靶基因SIRT1、PTEN的表达水平；采用油红O染色、甘油三酯（TAG）测定、CCK-8检测等方法检测细胞内脂滴沉积情况、甘油三酯含量变化及细胞增殖情况。【结果】从牦牛背最长肌成功分离获得肌内前体脂肪细胞；lncFAM200B超表达后，脂肪分化标志基因C/EBPα、AP2表达量显著升高（P<0.05），随着诱导分化时间的增加，lncFAM200B潜在靶基因SIRT1表达量呈先降低后升高的趋势，PTEN表达量呈现先增高后降低趋势；细胞脂滴沉积显著增加（P<0.05），降低细胞脂肪沉积，且诱导分化第6天细胞内甘油三酯含量显著降低（P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
皇甫一凡 昝林森 王洪宝 成功 刘扬 高建斌 李耀坤 杨宁
【目的】建立稳定成熟的牛成肌细胞胰岛素诱导成脂分化体系,为肉牛肉脂品质的改良提供参考。【方法】取1日龄荷斯坦公牛犊后腿肌肉,用Ⅳ型胶原酶消化法分离成肌细胞,用胰岛素诱导成肌细胞成脂分化,以未添加胰岛素的培养基为对照组,检测成肌细胞成脂分化过程中细胞形态的变化,并分析与成肌细胞和脂肪细胞分化相关基因(C/EBPα、C/EBPβ、C/EBPδ、PPARγ、Myf5、MyoD)分别诱导第3,6,9,12,15天相对表达量的变化,分析牛成肌细胞的诱导分化情况。【结果】成功分离培养了牛原代成肌细胞。胰岛素处理组细胞中脂滴的油红O染色明显,C/EBPβ、C/EBPδ、PPARγ和MyoD相对表达量明显增高...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
欧阳文文 李垚 赵伟 王明昊 金芳
【目的】研究槲皮素对肉鸡脂肪细胞甘油三酯沉积过程中环腺苷酸(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)信号通路的作用。【方法】将脂肪细胞随机分5组,每组6个重复;空白对照组为基础培养液,溶剂对照组为含2‰二甲基亚砜(DMSO)的培养液,试验组为含10、20和40 mg.L-1槲皮素的培养液,分别于24、48和72 h收集细胞及培养液;ELISA法测定乙酰CoA羧化酶(acetyl CoA carboxylase,ACC)、脂肪酸合成酶(fatty acidsynthase,FAS)、脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)、cAMP、腺苷酸环化酶...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孙文星 谷淑华 韩海银 褚维伟 喻世刚 陈杰
［目的］本文旨在研究核受体共激活蛋白２（ｎｕｃｌｅａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ ２，ｎｃｏａ２）对猪肌内前体脂肪细胞分化能力的影响。［方法］用荧光定量ｐｃｒ（ｑｒｔ－ｐｃｒ）法检测ｎｃｏａ２在猪肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达变化；通过ｎｃｏａ２小干扰ｒｎａ（ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ｒｎａ，ｓｉｒｎａ）抑制内源ｎｃｏａ２的表达，并用油红ｏ染色检测沉默ｎｃｏａ２对肌内前体脂肪细胞分化能力的影响，通过ｑｒｔ－ｐｃｒ检测沉默ｎｃｏａ２对脂肪分化关键基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒγ，ｐ．．．
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李鑫 张浩 王佳美 王永 俄木曲者 李艳艳 朱江江 林亚秋
为分析山羊KLF16对肌内前体脂肪细胞分化的调控作用,利用RT-PCR克隆得到山羊KLF16基因序列,利用生物信息学分析山羊KLF16基因序列特征,通过过表达、油红O染色和qPCR等方法从形态学及分子水平分析过表达山羊KLF16后肌内脂肪细胞脂滴积聚及分化标志基因表达水平的变化。结果表明:1)克隆得到包含CDS区的山羊KLF16基因序列986bp,编码251个氨基酸,具有典型锌指结构;2)KLF16在山羊各组织广泛表达,其中腹部皮下脂肪组织表达量极显著高于其他组织(P<0.01);3)过表达山羊KLF16与对照组相比脂肪细胞脂滴积聚减少,分化标志基因PPARγ和PPARα极显著下调(P
关键词：
山羊 KLF16 过表达 脂肪细胞分化
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
吴丹 胡兰
为了确定MSTN RNAi双元表达载体pEGFP-N1-M1-M2对成肌细胞增殖和分化的影响,利用脂质体介导法将该双元表达载体转染成肌细胞,MTT法检测MSTN RNAi双元表达载体对成肌细胞增殖的作用,Giemsa染色检测pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体对成肌细胞融合率的影响。试验结果表明,pEGFP-N1-M1-M2双元表达载体有促进成肌细胞增殖和分化的作用,能够促进成肌细胞大量融合。该结果为进一步探讨MSTN基因的作用机理提供了更为便捷的研究方法。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
姜锦鹏 赵茹茜 陈杰 韦习会 陆天水 池豪
将160头体质量27 kg左右的杜×(长×梅)三元杂交商品猪随机分成试验组和对照组,每组设4个重复,每个重复20头,公母各半。在试验组基础日粮中添加75 mg.kg-1脂肪细胞膜蛋白抗体(简称OAAb),饲喂104 d后,从每组选出体质量相近的12头猪(公母各半)屠宰,记录内脏器官和脂肪组织质量,同时采集血样。结果显示:试验组平均日增质量、饲料报酬分别提高13.03%(P<0.01)和7.49%;试验组背膘厚、肾周脂肪指数、肠系膜脂肪指数和皮下脂肪指数分别下降24.14%(P<0.01)、27.27%(P<0.05)、20.42%(P<0.01)和29.11%(P<0.01),而肌内脂肪含量则...
[期刊] 华北农学报
[作者]
付玲娟 史金平 张全伟 刘婷 赵德宝 马维华 马海蛟 孟泉禄 唐致雄 成述儒
为研究PPARA对绵羊肌内脂肪(IMF)沉积的影响及作用机制，寻找绵羊肌内脂肪沉积相关分子标记，以小尾寒羊(STH)和萨寒杂交(STH×SFK)F_1群体为研究对象，通过测定其肉品质，利用H&E染色和油红O染色比较2个绵羊群体背最长肌组织学结构及脂滴分布；利用qRT-PCR和WB技术检测PPARA mRNA水平和蛋白水平在不同群体间的表达差异，并分析PPARA基因与肌内脂肪的相关性；Sanger测序技术检测PPARA基因SNP位点以评估其作为绵羊肌内脂肪沉积相关遗传标记的可能性。结果表明：小尾寒羊剪切力和失水率极显著高于萨寒杂交，但是pH值极显著低于萨寒杂交，大理石花纹评分小尾寒羊低于萨寒杂交群体；组织学染色显示，小尾寒羊肌纤维较粗，排列紧密，肌内脂肪在肌纤维间隙集中分布；萨寒杂交肌纤维较细且结构松散，肌内脂肪在肌细胞间及肌纤维间隙均匀、广泛分布，含量更高；PPARA mRNA表达量小尾寒羊群体显著高于萨寒杂交群体，PPARA蛋白表达量小尾寒羊群体极显著高于萨寒杂交群体；相关性分析显示，PPARA基因表达量与绵羊脂滴面积比及pH值呈极显著负相关，与剪切力和失水率呈极显著正相关，与大理石花纹评分弱相关；Sanger测序结果分析显示，2个绵羊群体PPARA基因第2内含子T49885C、T50007C、G50013A、G50835A、G50942A及G51154C位置上发生碱基突变，但小尾寒羊群体未检测到C49885T突变。SNP遗传多样性分析显示，SNP位点群体纯合度均大于杂合度，在群体中处于中低度多态；除G50835A突变偏离了Hardy-Weinberg平衡，其余SNPs均符合Hardy-Weinberg平衡，遗传基础稳定。研究认为，PPARA基因对绵羊肌内脂肪沉积具有重要影响，可作为绵羊肌内脂肪性状选择的潜在分子遗传标记。
关键词：
绵羊 肌内脂肪 PPARA 多态性
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
高倩 赵丽丽 宋子仪 王少璞 张雅卿 杨公社
【目的】探讨体外培养条件下,LiCl诱导大鼠脂肪基质细胞向成骨细胞分化的潜能。【方法】采用Ⅰ型胶原酶消化组织块法分离获得大鼠脂肪基质细胞,将其分为处理组和对照组,分别用25 mmol/L LiCl和25mmol/L NaCl处理3周,采用形态学、SQ RT-PCR、免疫荧光染色、碱性磷酸酶染色及茜素红染色等方法,检测大鼠脂肪基质细胞向成骨细胞分化的能力。【结果】大鼠脂肪基质细胞在LiCl诱导24 h后,细胞形态由成纤维样变成方块状;诱导3周后,SQ RT-PCR检测发现,细胞表达碱性磷酸酶(AP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)和骨γ羧基谷氨酸(Bglap)等成骨细胞特异性基因,与处理0 d相比,差异达...
关键词：
脂肪基质细胞 氯化锂 成骨分化 大鼠
[期刊] 水产学报
[作者]
宋理平 冒树泉 马国红 张延华 许鹏
以鱼油为脂肪源,分别配制脂肪水平为3.7%、6.8%、9.6%、13.1%、15.6%的5种实验饲料,对平均初始体质量为(7.13±0.03)g的许氏平鲉进行为期60 d的饲养实验,探讨饲料脂肪水平对许氏平鲉形体指数、脂肪沉积、血液生化指标与脂肪代谢酶活性的影响。结果表明:肝体指数、脏体指数随着饲料脂肪水平的升高显著提高(P0.05);许氏平鲉鱼体脂肪沉积随饲料脂肪水平的增加显著提高(P<0.05),15.6%全鱼、肌肉、肝脏脂肪含量最高,显著高于3.7%、6.8%组(P<0.05)。随着脂肪添加量的增加,许氏平鲉肝脏葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杨苗苗 向海 李瑞瑞 赵振华 王钱保 黄正洋 李春苗 梁忠 吴兆林 黄华云
为探究gga-miR-17-5p在鸡脂肪沉积和肌肉发育中的作用，本研究以矮小品系S3(DW)和隐性白羽鸡（RR）为试验素材，分析gga-miR-17-5p在不同时期腿肌、肝脏、腹脂组织及细胞中的表达差异，并通过KEGG及蛋白互作分析筛选关键靶基因。结果表明：1)gga-miR-17-5p在腹脂、肝脏和腿肌组织中均可表达。在腹脂中，ggamiR-17-5p在0周表达有品种差异（P<0.05），且2个品种在0周时显著高于其他周龄（P<0.05）；在肝脏中，ggamiR-17-5p在16周有品种差异（P<0.05）,S3系在16周显著高于其他周龄（P<0.05），隐性白羽肉鸡在16周显著高于0周和8周（P<0.05）；在腿肌中，gga-miR-17-5p在0周有品种差异（P<0.05）,S3系在0周和2周显著于其它周龄（P<0.05），隐性白羽肉鸡在0周显著高于其他周龄（P<0.05）。2）在脂肪细胞中，gga-miR-17-5p在肌内脂肪细胞诱导分化6 d后的表达显著高于增殖期和分化1 d(P<0.05)；腹脂细胞分化1 d的表达最低，显著低于增殖期、分化4 d和分化6 d(P<0.05)。3）在成肌细胞中，gga-miR-17-5p的表达量随分化时间的延长而升高，且分化6 d的表达显著高于增殖期（P<0.05）。4)KEGG及蛋白互作分析表明，PTEN、MAPK3、PIK3R1、BECN1和PLCB4是gga-miR-17-5p重要的靶基因。RT-qPCR结果表明，PTEN和PIK3R1在成肌细胞增殖期的表达显著高于分化期（P<0.05）。综上，gga-miR-17-5p的表达存在显著的品种和组织差异性，miR-17-5p很可能通过PTEN、MAPK3、PIK3R1、BECN1和PLCB4来影响肌肉发育和脂肪沉积，其中PTEN和PIK3R1尤为关键。本研究为深入研究gga-miR-17-5p的功能和机制提供了坚实的理论基础和数据支撑。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
严思思 李鑫 刘翔燕 刘水平 周迎芳 王吉 罗非君 文利新 林亲录
为分析两种脂肪供能条件下3种不同油脂饮食对小鼠腹股沟皮下脂肪沉积及其巨噬细胞分型的影响，90只C57BL/6J小鼠被随机分为6组，分别饲喂低脂猪油（Lar-10%）、低脂菜籽油（Rap-10%）、低脂橄榄油（Oli-10%）、高脂猪油（Lar-30%）、高脂菜籽油（Rap-30%）和高脂橄榄油（Oli-30%）,16周后解剖取腹股沟皮下脂肪组织，并对其进行苏木精-伊红染色，活性氧（Reactive oxygen species,ROS）含量检测，M1、M2型巨噬细胞标记物（CD11c和CD206）荧光双染，并通过ELISA检测其含量。结果表明：1）在低脂饮食条件下，三种油脂对小鼠腹股沟皮下脂肪组织重量、脂肪细胞横截面积、腹股沟皮下脂肪ROS含量均无显著影响（P>0.05）;2）随着脂肪供能水平的提高，小鼠腹股沟皮下脂肪沉积显著增加（P<0.05），在高脂饮食条件下，Lar-30%组的小鼠腹股沟皮下脂肪组织重量显著高于Rap-30%和Oli-30%组（P<0.05），并且相对于其他两组，Oli-30%组小鼠腹股沟皮下脂肪组织中ROS含量极显著降低（P
关键词：
猪油 橄榄油 菜籽油 巨噬细胞
[期刊] 中国农业科学
[作者]
姜美华 巨婷婷 刘洋 许玲 孙文娟 赵泮峰 尹靖东
【目的】利用C2C12成肌细胞探讨肌源性干细胞成脂过程与调控成脂和成肌分化的关键转录因子PPARγ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma)、C/EBPα(CCAAT/enhancer binding protein alpha)和Myogenin启动子区甲基化的关系。【方法】分别用2%马血清和三联诱导剂诱导C2C12细胞成肌和成脂分化,在马血清促进的成肌分化第0、1、3和5天收集细胞进行姬姆萨染色观察肌管形成情况;在三联诱导的成脂分化第0、2、4、6和10天收集细胞进行油红O染色观察脂滴形成情况;提取成肌诱导第0、1、3、5天和成脂诱...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
付言峰 李兰 周艳红 李碧侠 方晓敏 王学敏 任守文
［目的］研究瘦素受体（ｌｅｐｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｌｅｐｒ）的ｍｒｎＡ表达和编码序列单核苷酸多态性（ｃ ＳｎｐＳ）对猪脂肪沉积性状的影响。［方法］本文旨在利用实时荧光定量ｐｃｒ（ｒｔ－ｑ ｐｃｒ）方法和免疫印迹方法检测了该基因在高脂猪和低脂猪背最长肌、背膘、心、肝和肾共５种组织样中的ｍｒｎＡ和蛋白表达量，利用直接测序方法检测了ｌｅｐｒ第１８外显子ｃ ＳｎｐＳ，并对ｌｅｐｒ表达量、编码序列单核苷酸多态位点与苏钟猪脂肪沉积相关性状进行了关联分析。［结果］ｒｔ－ｑ ｐｃｒ结果表明：ｌｅｐｒ ｍｒｎＡ在这５种组织中均有表达，且差异显著（ｐ＜０．０５），其中背膘组织中的表达量显著高于其他组织（ｐ＜０．．．
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