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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘卿 梁运祥 葛向阳
在腊样芽胞杆菌DNF409中,narGHJI基因负责编码呼吸过程中硝酸盐还原酶基因nar的α、β、γ、δ四个亚基。通过基因同源重组的方法,利用一段带有终止序列和Ω环的链霉素抗性片段,取代nar中的部分基因片段,实现硝酸盐还原酶的基因敲除,从而得到专一降解亚硝酸盐的突变体菌株,其硝酸盐还原酶的活性降低了80%。该菌与DNF409共同使用,可解除DNF409单独使用时亚硝酸盐严重积累的现象。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
李今煜 肖水华 黄天培
以苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensis subsp.kurstaki)8010为研究材料,通过PCR技术获得Bt 8010菌株NAD(P)H:醌氧化还原酶基因上下游2个片段,以含有卡那霉素抗性基因的pDG780质粒为中间载体,通过酶切、连接和PCR,构建含待敲除NAD(P)H:醌氧化还原酶基因上下游片段、卡那霉素抗性基因的重组质粒pRN5101DKU,为后续Bt8010菌株NAD(P)H:醌氧化还原酶基因的敲除做准备.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
应碧 昌晓宇 刘志文 周通 陈瑶 钟平安 徐波
【目的】研究亚硝酸盐胁迫下植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)WU14亚硝酸盐还原酶(nitrite reductase,Nir S)的作用机制,为发酵食品中应用乳酸菌纯种培养技术降解亚硝酸盐奠定基础。【方法】在37℃培养条件下,测定含0.02%—0.16%Na NO2的MRS培养液中L.plantarum WU14 24 h的生长密度、p H及Na NO2降解量。通过PCR扩增和TA克隆得到Nir S,并克隆到乳酸乳球菌食品级细胞内高效诱导表达载体p RNA48中,获得重组菌L.lactis NZ9000/p RNA48-Nir S。重组菌经30 ng·m L-1 n...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
何玲 罗佳 郭宁 杨公明
为了给浆水芹菜的安全生产和消费提供理论依据,以芹菜为原料,在不同热烫时间、发酵温度和不同食盐含量条件下进行浆水芹菜发酵,测定了发酵过程中芹菜硝酸还原酶活性、亚硝酸盐含量及发酵汁pH的变化。结果表明,发酵过程中硝酸还原酶活性和亚硝酸盐含量的变化趋势基本一致,即随着发酵时间的延长逐渐增大,到第3天达最大值,然后迅速下降到较低水平;pH为4.5时硝酸还原酶活性与亚硝酸盐含量均达最大值;硝酸还原酶活性和亚硝酸盐含量在热烫3 min、发酵温度25~30℃、食盐含量为40 g/kg时均较低。
关键词：
硝酸还原酶 亚硝酸盐 芹菜 浆水发酵
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
赵小英 刘明月 肖杰 宋勇 刘选明
为寻求降低蕹菜硝酸盐含量,且有利于提高产量的最优施肥方案,采用水培法和3因素5水平正交旋转组合设计,建立了N,K,Mo施用量与蕹菜硝酸盐含量的数学模型.结果表明:适量施用K,Mo肥可提高蕹菜硝酸还原酶(NR)活性,从而控制因施N肥而引起硝酸盐在植株体内的积累.经数学模拟和综合选优,理论上得到水培蕹菜N,K,Mo施用最优组合方案:N354.9～382.2mg/L,K514.8～557.7mg/L,Mo62.4～81.6μg/L.
[期刊] 西南农业学报
[作者]
黄莎莎 何鹏飞 何月秋 李兴玉 吴毅歆
【目的】二斑叶螨是一种分布于世界各温带、亚热带地区的害螨，其防治成已为农作物虫害亟待解决的重要问题之一。W1菌株是从自然死亡二斑叶螨虫体内分离出来，对二斑叶螨有高致死性的解淀粉芽孢杆菌。研究拟通过构建W1菌株突变体及其杀螨抑菌活性检测以从分子水平探究并验证此菌株的杀螨机理，为二斑叶螨的防治提供一种新的微生物资源和防治策略，为后续开发利用更多微生物资源奠定基础，也为新型微生物杀螨剂的研发与应用提供理论基础。【方法】前期对解淀粉芽孢杆菌W1的次级代谢产物的活性化合物进行研究，已确定其对二斑叶螨的杀虫活性物质为二酮哌嗪类，大环内酯类及巨杆菌素类等化合物。大环内酯类化合物中以大环内酯A为主要杀螨活性物质，而大环内酯A是由mln基因簇调控合成。通过构建敲除整合载体pBS-mlnB-kan~(R)转化导入W1菌株自然感受态细胞等操作，获得了其杀螨活性化合物——大环内酯生物合成缺陷突变体W1 △mlnB::kan~(R)，利用PCR扩增及产物测序和HPLC-MS/MS技术证实敲除突变体的成功构建，并检测其杀螨抑菌活性。【结果】mlnB基因的敲除不仅导致W1菌株无法合成大环内酯A，还削弱了其对大白菜软腐病菌、柑橘溃疡病菌、大白菜黑腐病菌及茄科青枯菌的拮抗活性，相比W1野生型菌株二斑叶螨的致死率73.33%～77.22%，大环内酯合成缺陷突变体的杀螨活性也下降了46.66%～50.55%。【结论】解淀粉芽孢杆菌W1菌株合成的大环内酯A具有杀二斑叶螨活性，同时还能抑制大白菜软腐病菌、柑橘溃疡病菌、大白菜黑腐病菌以及茄科青枯病菌。大环内酯A合成受阻后，W1菌株的活性均明显地被削弱。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
李今煜 潘智雄 黄天培
以苏云金芽孢杆菌(Bt)库斯塔克亚种(subsp.kurstaki)8010为研究材料,通过PCR技术获得Bt 8010的外孢囊蛋白基因上下游序列,以含有卡那基因的pDG780质粒为中间载体,通过酶切、连接和PCR,构建含外孢囊蛋白基因上游序列、卡那基因、外孢囊蛋白基因下游序列的基因敲除载体pRN5101UKD,为后续外孢囊蛋白基因敲除工作做准备.
[期刊] 中国水产科学
[作者]
周敏 宁文 陈红菊 季相山 赵燕
为得到稳定高效降解亚硝酸盐的益生菌,通过菌株富集分离培养、菌株鉴定、发酵培养基优化等实验对菌株进行了分离、鉴定,对菌株降亚硝酸盐效果进行了分析,并克隆了亚硝酸盐还原酶基因。结果显示,从养殖池塘、污水处理厂等5处混合水体中分离、筛选出一株具有亚硝酸盐降解能力的菌株,命名为JY-1。菌株生理生化和16S rDNA序列分析显示, JY-1是大山芽孢杆菌(Bacillus gaemokensis);发酵培养基优化显示, JY-1的最适氮源和碳源分别是蛋白胨和葡萄糖。JY-1降亚硝酸盐效果分析显示, 3 h JY-1可将水体中0.6 mg/L的亚硝酸盐降到0.0 mg/L。安全性评价检测显示,菌株JY-1菌落周围无溶血环出现,且高浓度JY-1 (10~9 CFU/mL)灌服尼罗罗非鱼对其无明显影响。克隆获得了JY-1亚硝酸盐还原酶基因,结合JY-1对水体中氨氮、亚硝酸盐、总氮等的影响实验,初步推测JY-1是通过酶降解途径把亚硝酸氮还原后将其移出水体的。本研究为制备高效降解亚硝酸盐的微生态制剂产品提供了重要原料。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
汤倩 张淑静 郭蔷薇 王永宏 张兴
【目的】通过同源重组技术敲除嗜线虫致病杆菌（Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａ）Ｙｌ００１中ｃｐＸｒ基因，为进一步研究ｃｐＸｒ调节子调控抗菌物质产生的机理奠定基础。【方法】通过融合ｐｃｒ技术，将ｃｐＸｒ基因的上、下游同源片段及质粒ｐＪｃＶ５３上的卡那抗性基因Ｋｍｒ ３个片段连接，克隆到自杀载体ｐｄｍ４中，将重组质粒转化到大肠杆菌ｓ１７－１λｐｉｒ中，经接合转移导入嗜线虫致病杆菌内，通过同源重组敲除ｃｐＸｒ基因；采用琼脂扩散法和抑制菌丝生长速率法分别测定突变菌株对枯草芽孢杆菌和番茄灰霉病菌的抑制作用。【结果】从Ｘ．ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａ Ｙｌ００１基因组中成功敲除ｃｐＸｒ基因，得到了．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
宋蓉 许春苹 梁运祥
为了解乳酸菌去除养殖水体亚硝酸盐的作用机理,实验研究了一株干酪乳杆菌L821a(Lactobacillus casei)对淡水鱼养殖水体亚硝酸盐的去除状况,通过对菌体、酶及代谢产物的实验,证明其去除亚硝酸盐的机理包括胞内酶作用、代谢产物乳酸的直接化学反应2H++3NO2-=NO3-+2NO↑+H2O作用和间接促进微生物反硝化作用3种作用机理。在养殖水体中主要以间接作用方式发挥作用。分析认为乳酸促进反硝化作用的原因在于为反硝化微生物提供了易于利用的有机碳源(能量物质)。
关键词：
干酪乳杆菌 乳酸 亚硝酸盐 反硝化
[期刊] 林业科学研究
[作者]
苏梦云 吴祖洪
在桤木生长期间 ,叶片中的一氧化氮 (NO)含量和一氧化氮合成酶 (NOS)活力随生长而变化 ,即生长初期水平较低 ,以后逐渐升高 ,生长高峰期达到最高值 ,随后在叶片开始衰老时下降。硝酸还原酶 (NR)和谷氨酰胺合成酶 (GS)的活力变化与 NOS活力的变化类似 ,但 NR活力高峰出现比 NOS早 ,而 GS活力高峰期在 NOS之后。用 NO处理 ,叶片中 NO含量和 NOS活力都有所增加 ,但 NR活力只在幼苗中表现增加 ,而在离体枝条的叶片中则下降。在 NO处理时供给枝条 0 .0 5mol· L-1KNO3 溶液 ,可明显提高叶片中的 NR活力。如只用 KNO3 溶液诱导处理 ,除 N...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李林妍 王俊玲 王梅 高志奎
【目的】通过研究不同光强下外源水杨酸(SA)对韭菜叶片硝酸盐(NO3-)累积、氮代谢关键酶活性、光系统II电子传递速率(ETR)及主要氨基酸和可溶性蛋白合成的调控效应,以期明确遮光水平下SA对硝酸盐还原同化的影响。【方法】以韭菜品种‘新世纪雪韭’为供试材料,在前期试验工作基础上,采用显著降低韭菜硝酸盐累积的3.0 mmol.L-1SA对韭菜叶面进行喷施处理,设自然光(900—1 050μmol.m-2.s-1)和遮光(40%自然光)2种光照强度,分析SA对韭菜硝酸盐累积及NO3-还原同化的影响。【结果】SA处理缓解了遮光水平下韭菜叶片氮代谢关键酶硝酸还原酶(NR)、谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨...
[期刊] 林业科学
[作者]
彭勇 彭福田 姜远茂 周鹏 张青
在盆栽条件下,以沾化冬枣为试材,研究植株不同器官、不同时期NR活性的变化动态以及不同形态氮素对NR活性的影响。结果表明:叶片是冬枣NO3-还原的主要部位,NR活性以新生叶片中最高,其次为中部叶和基部叶;根系中NR活性以细根中较高,但明显低于叶片,而新生吸收根中几乎检测不到。日变化表明NR活性呈单峰曲线,以上午11:00左右最高。从NR活性的季节变化看:叶片NR活性先增加后下降,以夏季8月中旬较高;根系NR活性在6月、8月初和10月出现3次高峰。叶片涂抹不同浓度与不同形态氮素对NR活性的影响存在差异。涂抹40mmol.L-1KNO34h后,NR活性达到高峰,涂抹低浓度KNO3(<80mmol.L...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
丁海霞 牛犇 范海燕 李燕 王琦
为深入研究蜡样芽胞杆菌９０５（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ ９０５）的促生防病机制以及为进一步优化该菌株提供遗传学信息，采用４５４焦磷酸测序技术对Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ ９０５基因组进行了测序，并使用相关软件对测序数据进行了基因组拼接、基因功能预测与注释、基因本体分析（ＧＯ）、直系同源基因簇（ｃＯＧ）聚类分析以及共线性分析。结果表明：Ｂ．ｃｅｒｅｕｓ ９０５基因组草图序列大小约为５．３９ ＭＢ，Ｇｃ含量３５．０５％，由１２７个片段重叠群组成；该序列已提交ＧｅｎＢａｎｋ数据库，登录号为ｌｓＴＷ００００００００；分析发现菌株９０５的基因组与其他蜡样芽胞杆菌的基因组有显著的共线性关系；菌株９０５基因组中．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
谢鑫 王俊玲 高志奎
以多年生日光温室韭菜为试材,以10 mmol/L的硫为总量,研究了无机硫形态及配施对韭菜硝酸盐含量、氮代谢关键酶活性和营养品质的影响。结果表明:NaHSO3和Na2S2O3配合施用可明显提高硝酸还原酶(NR)、谷氨酸草酰乙酸转氨酶(GOT)、谷氨酸丙酮酸转氨酶(GPT)活性,有效降低硝酸盐含量,其中以7.5 mmol/L NaHSO3+1.25mmol/L Na2S2O3(S6处理)效果最为明显,降低了35.79%。施硫处理后,韭菜叶片可溶性蛋白质、游离氨基酸、可溶性糖、维生素C含量均有不同程度的增加,且以游离氨基酸增加幅度最大,2.5 mmol/L NaHSO3+3.75 mmol/L Na...
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