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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杜重波 李学瑞 张德林 李惠萍
弓形虫病的免疫是以细胞介导为主的免疫,其中,Mφ是机体抗弓形虫感染重要的效应细胞.本文旨在明确 TF 在体外激活小鼠腹腔 Mφ后的形态变化及对弓形虫消化的影响进行初步观察.按常规方法制备健康昆明鼠腹腔 Mφ,加含犊牛血清的1640培养液37℃培养,2 h 后洗去非沾附细胞,胰酶消化,洗涤、计数 Mφ,按6×10~5/mL 分装含飞片的培养瓶(1 ml/瓶~(-1)),另制备弓形虫免疫的猪脾脏细胞 TF_1和未免疫健康猪脾 TF_2加入含 Mφ培养瓶.另设不含 TF 的 Mφ对照瓶(组)。37℃密闭培养60 min
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李纯静 周天缘 于正青 储稳 徐立新 宋小凯 严若峰 李祥瑞
[目的]本试验旨在探究刚地弓形虫热休克蛋白21（TgHSP21）在体外对小鼠巨噬细胞系(Ana-1)功能的调节作用。[方法]构建重组表达载体pET-32a (+)/TgHSP21，获得重组蛋白TgHSP21（rTgHSP21）。用免疫荧光抗体试验（IFA）验证rTgHSP21在体外与Ana-1细胞的结合情况。Ana-1细胞分别用不同浓度的rTgHSP21处理后，采取细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖情况，应用Transwell细胞小室检测细胞趋化情况，应用流式细胞术检测Ana-1细胞凋亡和吞噬能力。Ana-1细胞NO(一氧化氮)和肿瘤坏死因子α (TNF-α) 、白介素12（IL-12）、白介素6（IL-6)、白介素1β (IL-1β) 的分泌量分别用总NO试剂盒和细胞因子酶联免疫吸附剂测定（ELISA）试剂盒来检测。[结果]成功获得纯化的rTgHSP21，具有与Ana-1细胞结合的能力。rTgHSP21在浓度为5和10 μg·mL~(-1)时显著促进Ana-1细胞的增殖，各个浓度的rTgHSP21均显著促进细胞凋亡和吞噬能力。80 μg·mL~(-1)的 rTgHSP21明显促进Ana-1细胞NO的分泌。在不同浓度下，细胞因子IL-6和TNF-α的表达量均明显上升。而在浓度为10、20、40和80 μg·mL~(-1)时细胞因子IL-12的分泌被抑制。此外，rTgHSP21显著抑制了Ana-1细胞的迁移能力。[结论]TgHSP21能够与Ana-1细胞结合并在体外条件下影响Ana-1细胞的凋亡比例、趋化性、增殖和吞噬能力，对Ana-1细胞的细胞因子IL-6、TNF-α、IL-12和NO的分泌也有影响。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杜重波 张德林 李惠萍 李学瑞
用细胞培养方法制备了弓形虫(GJS 株)ES 抗原(Exceted/Sereted Antigen,E/SA),用油佐剂 M206按不同剂型制备 ES 苗,随机分组免疫健康小鼠(昆明鼠,23～25 g·只~(-1)),每组5只,皮注/腹注0.3 mL·只~(-1)。其中:组1,E/SA 浓缩苗;组2,E/SA 苗;组3,E/SA-H 浓缩苗;组4,E/SA-H;组5,培养液对照;组6,M206对照.另设:组7,健康攻毒对照;组8,健康对照.先后免疫2次(间隔15 d),第28 d 用弓形虫 GJS 速殖子强毒攻毒,每鼠腹注10~2.免疫前后分别取尾血片检测弓形虫血清抗体(IHA 法).
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李能秀 焦健 左雨霏 马忠梅 常意行 孟庆玲 才学鹏 乔军
【目的】分离和鉴定感染单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，LM）小鼠巨噬细胞外泌体（Exosomes，Exos）并分析其miRNA表达谱，为揭示巨噬细胞Exos miRNA在LM感染中的调控机制奠定良好的研究基础。【方法】以未感染LM的巨噬细胞为对照组，感染LM的巨噬细胞为试验组，采用超速离心法分离提取巨噬细胞上清中的Exos，通过透射电镜、纳米颗粒追踪技术和Western blot对Exos形态、大小及表面标志分子特征进行鉴定。利用Illumina SE50测序平台对两组巨噬细胞ExosmiRNA进行Small RNA-seq测序，筛选出显著差异表达的miRNA。使用Targetscan、miRDB和miRWalk数据库对差异表达miRNA靶基因进行预测，并对差异miRNA靶基因进行GO和KEGG-Pathway功能富集分析。利用Cytoscape软件绘制前20位Hub基因的miRNA-mRNA调控网络图。【结果】Exos直径在30～150 nm之间，具有典型的双层膜结构，Exos表面标志分子CD9、CD63和TSG101呈阳性表达。高通量测序结果显示，与对照组相比，试验组Exos中共筛选出9个显著差异表达的miRNA，其中显著下调基因8个（mmu-miR-7a-5p、mmu-miR-365-2-5p、mmu-miR-122-5p、mmu-miR-122b-3p、mmu-let-7i-5p、mmu-miR-151-3p、mmu-miR-182-5p和mmu-miR-1198-5p），显著上调基因1个（mmu-miR-192-5p），共预测miRNA调控靶基因1064个。GO富集分析结果显示，差异miRNA靶基因主要富集在轴突形成、细胞连接组装、肌动蛋白结合和金属离子跨膜转运等过程；KEGG分析显示，靶基因显著富集在cGMP-PKG信号通路和FcγR介导的吞噬作用通路。【结论】感染LM的小鼠巨噬细胞ExosmiRNA表达谱发生了显著的改变，其调控的潜在靶基因主要参与感染和免疫反应等信号通路。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孟显华 于洋 郝璐 刘天明 付越 李敬双
【目的】阐明华蟾毒精（ＣＢＧ）对巨噬细胞功能的影响，为ＣＢＧ的开发和利用提供理论依据。【方法】利用ＢａｌＢ／Ｃ小鼠制备与纯化腹腔巨噬细胞，采用不同质量浓度（０．５，１．０，１．５，２．０ｍＧ／ｌ）ＣＢＧ作用于巨噬细胞，采用ｍＴＴ法检测ＣＢＧ对巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的影响；采用Ｇｒｉｅｓｓ法检测ＣＢＧ对巨噬细胞分泌ＮＯ的影响；采用ｅｌｉｓａ法检测ＣＢＧ对巨噬细胞分泌ｉｌ－６、ＴＮＦ－α和Ｇｍ－ＣｓＦ的影响。【结果】ＣＢＧ质量浓度为１．０，１．５和２．０ｍＧ／ｌ组均能极显著提高巨噬细胞的吞噬功能；ＣＢＧ质量浓度为０．５ ｍＧ／ｌ组能显著促进巨噬细胞ＮＯ的分泌，而１．０，１．５和２．０ｍＧ／ｌ ．．．
关键词：
华蟾毒精 巨噬细胞 吞噬功能 分泌功能
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张朝莹 文兆海 张玥 李嫄 徐立新 陆明敏 宋小凯 李祥瑞 严若峰
[目的]旨在研究旋毛虫钙网蛋白（rTs-CRT）对宿主免疫系统的影响。[方法]用原核表达技术获得纯化旋毛虫钙网蛋白，并进行Western Blot验证；将rTs-CRT与小鼠巨噬细胞共孵育，检测该蛋白对小鼠巨噬细胞增殖、NO释放和凋亡的影响；将rTs-CRT与大鼠外周血单核细胞（PBMC）共孵育，检测该蛋白对大鼠PBMCs转录因子和细胞因子的影响。[结果]Western Blot结果显示rTs-CRT可以被感染旋毛虫的大鼠血清所识别；rTs-CRT可促进小鼠巨噬细胞的增殖和NO的分泌，抑制小鼠巨噬细胞的凋亡；rTs-CRT下调大鼠PBMCs T-bet、Gata-3和PU.1的转录水平，上调Foxp3、Ahr、RORγt和Bcl-6的转录水平；rTs-CRT上调大鼠PBMCs IFN-γ、IL-17、IL-10、TGF-β、Il-9和IL-22等细胞因子的转录水平，下调IL-4和IL-21的转录水平。[结论]旋毛虫钙网蛋白可刺激宿主产生Th1、Th17、Treg、Th9和Th22等多种类型的免疫反应，抑制Th2和Tfh免疫，对宿主免疫调节作用复杂。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张志敏 王建华 赵兴华 公小兵 余永涛 崔忠华 耿果霞
【目的】探索苦马豆素(SW)与小鼠腹腔巨噬细胞功能之间的关系,为SW免疫研究提供新的试验依据。【方法】将70只小鼠随机分为7组,其中5组分别按0.05、0.2、0.8、3.2和6.4mg·kg-1每天灌服SW生理盐水,连续21d,另2组为生理盐水和空白对照组。收集小鼠腹腔巨噬细胞,经脂多糖(LPS)诱导活化,用ELISA法检测TNF-α生成,酶法检测一氧化氮合酶(NOS)活性,化学法检测H2O2浓度,MTT比色法检测杀伤肿瘤细胞活性及吞噬中性红能力。【结果】SW剂量在0.2～3.2mg·kg-1之间,能够提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬和杀伤活性﹑NOS活性,促进TNF-α和H2O2生成,且均呈剂量...
[期刊] 华北农学报
[作者]
温立斌 何孔旺 杨汉春 刘梦雅
采用实时定量PCR技术对类猪圆环病毒因子P1感染猪不同时相猪肺泡巨噬细胞中外源性抗原加工递呈相关分子SLA-DR、SLA-DM和CD74及共刺激分子CD40、CD80和CD86 mRNA的表达进行了检测。结果表明,病毒感染后3 d,上述分子的mRNA表达皆低于对照组相应分子的mRNA表达。其中,CD80 mRNA的表达呈下调趋势(P<0.1),CD40、CD74和SLA-DR的mRNA的表达显著下调(P<0.1);...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
徐晓津 桑本红 覃映雪 邹文政 毛勇 邹峰 罗罡 苏永全
由刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)感染引发的"白点病"为大黄鱼(Larimichthys crocea)养殖业带来重大损失,但仍未找到安全、有效的治疗方法。本研究应用免疫组织化学方法,对健康大黄鱼和患刺激隐核虫病大黄鱼肠、脾、头肾与肝组织中巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)蛋白进行检测,研究刺激隐核虫病大黄鱼组织中MIF的表达情况及其对预后的影响。结果表明,MIF在健康大黄鱼肠、脾、头肾、肝各组织中均无表达;MIF在刺激隐核虫病大黄鱼各组织中高表达,表达强度从弱到强依次是肠、肝、脾、头肾,MIF表...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
韩谦
弓形虫病 Toxoplasmosis 是一种人兽互通的寄生虫场,其病原体为龚地弓形虫 Toxoplasma gondii.自1908年法国人 Nicolle 首次在北非的一种啮齿动物中分离出弓形虫以来,现已在200多种哺乳动物和鸟类中发现弓形虫.美国人 Ferrell 在1952年首次报告了猪弓形虫病.1957年,我国的于恩庶在猪体内首次分离到了弓形虫.进入70年代,我国部分地区猪群出现"无名高热"病,后证实病原为弓形虫,弓形虫病的重要性开始得到认识.
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
韩谦 王庆华 鲁炳义 经字 沈震宇 吴志坚 李爽 甘绍伯
1996年秋季北京有许多猪场发生了弓形虫病 Toxoplasmosis,为搞清此次弓形虫病的发生原因,受北京鲲鹏集团公司的资助进行了规模化猪场弓形虫感染的血清学调查工作。本次调查采用 SPA-ELISA 法,其原理是利用金黄色葡萄球菌 A 蛋白代替第二抗体,与哺乳动物血清中的 IgG 结合;其特点是敏感性高,兼容性强,适应于多种哺乳动物及人的血清学检查.
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
杨娜 丁莹莹 李佳祺 李承桓 武安和 邢蒙恩 王大为 郭晓改 吴元华
弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫,宿主类型众多,寄生于人、畜、野生动物及禽类等几乎所有的有核细胞中,引发人兽共患寄生虫病,在世界范围内流行,对人类和畜牧业都具有潜在威胁。猫科动物是弓形虫唯一的终末宿主;弓形虫的中间宿主极其广泛,包括各种哺乳类动物、禽类和人等,其中感染最为严重的动物是猪。猪弓形虫病在不同地区均有流行发生,感染率也较高,平均感染率达22.3%。而猪肉是人类主要的肉食消费品之一,人在摄入未煮熟的含有弓形虫包囊的猪肉或内脏时可获得弓形虫感染,危害人类健康。故本试验对辽宁省不同地区的猪弓形虫病进行流行病学调查,并分析其感染因素。目前,检测弓形虫的金标准是改良凝集实验(MAT),其特点是操作简单、检测快速、结果准确,避免了酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金试验、间接血凝试验等造成的假阳性和假阴性。从辽宁省不同地区采集猪的血清样品,采用MAT方法对血清样品进行猪弓形虫血清抗体检测并对其感染因素进行分析,结果显示:各个地区弓形虫感染率有所不同,抚顺感染率最高(27.9%),本溪感染率最低(6.28%);不同发育阶段的猪均有感染,繁殖母猪感染率(25.14%)>育肥猪感染率(12.23%)>仔猪感染率(6.04%),且繁殖母猪经产次数越多其感染率越高,经产5胎的繁殖母猪的感染率约是经产1胎繁殖母猪的13倍;大白猪较长白猪更易感弓形虫。另外,弓形虫可以通过母猪的胎盘传播方式(即垂直传播)传染给仔猪,使其获得先天性感染;仔猪也可以通过水平传播方式获得感染,即通过接触环境中的卵囊感染弓形虫。研究结果可为预防和控制猪弓形虫的感染提供一定的数据参考。
关键词：
弓形虫 猪 流行病学 影响因素
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陆瑶瑶 苏瑞景 董辉 王梦瑶 杨玉荣
【目的】通过ME 49株弓形虫速殖子对小鼠致病性的研究,了解该虫株速殖子的毒力特点,为深入研究弓形虫弱毒株的致病特征提供研究基础。【方法】以ME 49株弓形虫速殖子为研究对象,用血球计数板将速殖子梯度浓度稀释为<10~0、10~0、10~1及10~2处死小鼠的大脑组织研磨镜检,结果显示
[期刊] 华北农学报
[作者]
程瑜 张华屏 乔中东
通过雄激素诱导小鼠骨髓巨噬细胞凋亡以及对Fas信号传导通路的研究来探讨雄激素对免疫系统抑制作用的机制。采用不同浓度(1~10 nmol/L)的雄激素处理小鼠骨髓巨噬细胞24 h后,先用DNA片段电泳法和Annexin-V/PI双染后流式细胞仪检测不同处理组的细胞凋亡的情况;再用RT-PCR半定量法观察雄激素对Fas途径中一些基因表达的影响。发现10 nmol/L雄激素处理的巨噬细胞凋亡率31.7%比对照组7.4%显著升高,并伴随Fas途径中相关基因(Fas,FasL,FADD,caspase-8和caspase-3)转录水平的升高。雄激素可能是通过Fas途径来诱导小鼠骨髓巨噬细胞发生凋亡,从而...
关键词：
雄激素 凋亡 骨髓巨噬细胞 免疫抑制
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
严思思 李鑫 刘翔燕 刘水平 周迎芳 王吉 罗非君 文利新 林亲录
为分析两种脂肪供能条件下3种不同油脂饮食对小鼠腹股沟皮下脂肪沉积及其巨噬细胞分型的影响，90只C57BL/6J小鼠被随机分为6组，分别饲喂低脂猪油（Lar-10%）、低脂菜籽油（Rap-10%）、低脂橄榄油（Oli-10%）、高脂猪油（Lar-30%）、高脂菜籽油（Rap-30%）和高脂橄榄油（Oli-30%）,16周后解剖取腹股沟皮下脂肪组织，并对其进行苏木精-伊红染色，活性氧（Reactive oxygen species,ROS）含量检测，M1、M2型巨噬细胞标记物（CD11c和CD206）荧光双染，并通过ELISA检测其含量。结果表明：1）在低脂饮食条件下，三种油脂对小鼠腹股沟皮下脂肪组织重量、脂肪细胞横截面积、腹股沟皮下脂肪ROS含量均无显著影响（P>0.05）;2）随着脂肪供能水平的提高，小鼠腹股沟皮下脂肪沉积显著增加（P<0.05），在高脂饮食条件下，Lar-30%组的小鼠腹股沟皮下脂肪组织重量显著高于Rap-30%和Oli-30%组（P<0.05），并且相对于其他两组，Oli-30%组小鼠腹股沟皮下脂肪组织中ROS含量极显著降低（P
关键词：
猪油 橄榄油 菜籽油 巨噬细胞
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