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[期刊] 华北农学报
[作者]
袁廷杰 王加启 杨永新 卜登攀 章玉涛 赵圣国 周凌云 李发弟
为探讨脲酶B(Ure B)亚单位疫苗免疫后奶牛血清蛋白质组分的表达变化。选用8头健康的泌乳荷斯坦奶牛,分为免疫处理组和空白对照组,分别于胯部两侧肌肉注射Ure B亚单位疫苗(含抗原蛋白0.2 mg)和生理盐水,每隔2周进行加强免疫,并于免疫后第56天采集奶牛血样,用间接ELISA法测定血清中特异性IgG、IgM和IgA效价,用二维凝胶电泳(2-DE)结合MALDI-TOF-TOF质谱技术研究血清蛋白质组表达变化。免疫处理组奶牛血清中特异性IgG效价显著高于对照组(P0.05)。血清蛋白质组分析发现6个差异表达蛋白...
关键词：
脲酶B亚单位疫苗 奶牛 血清 蛋白质组
[期刊] 中国农业科学
[作者]
袁廷杰 王加启 杨永新 卜登攀 杨晋辉 周凌云
【目的】从血清蛋白组研究运输对奶牛机体的影响,充分理解运输对奶牛的生理病理影响及其潜在的作用机制提供理论依据。【方法】采用二维凝胶电泳(2-DE)结合MADIL-TOF-TOF串联质谱的方法对运输前第7天、运输后3 h和第7天奶牛的血清进行蛋白质组分析鉴定。【结果】运输可引起奶牛血清中14个蛋白点的表达丰度发生变化,有12个蛋白点得到有效鉴定。与运输前第7天相比,血清白蛋白、IgG1重链恒定区、类型II细胞骨架I和转甲状腺素蛋白在运输后3 h表达量降低,而α1-酸性糖蛋白、结合珠蛋白、nesprin-2、微管微丝交联因子1、酪氨酸蛋白激酶Fps85D、输出蛋白5和一个未知蛋白点在运输后3 h的...
关键词：
运输 奶牛 血清 蛋白组
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
屈泰龙 李润成 钱幸 杨宇 余兴龙
为探寻转移因子(TF)对猪圆环病毒亚单位疫苗免疫效果的影响,将猪脾脏研磨,并反复冻融研磨液,离心获取冻融上清,用超滤法从上清液中提取转移因子。TF经理化检验合格后,以添加剂的形式与猪圆环病毒亚单位疫苗(Cap疫苗)混合,制成TF–Cap疫苗,并和未添加TF的Cap疫苗同时进行小鼠免疫试验。TF–Cap疫苗和Cap疫苗免疫的小鼠都设一免组和二免组,首次免疫后每隔10 d对实验鼠进行尾静脉采血,并用间接ELISA方法测定血清中猪圆环病毒2型(PCV2)的抗体水平。结果表明:用超滤法制得的TF,多肽含量为1.83 mg/mL;抗体检测数据显示,4个免疫组与对照组(注射生理盐水)的抗体检测值有极显著差...
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈瑾 黄春娟 于晓明 侯立婷 乔绪稳 郑其升 侯继波
为了研究ＰＥＤＶ的新型亚单位疫苗，提高ＰＥＤＶ亚单位疫苗的免疫原性，选取免疫增强剂ＣＶＣ１３０２、ＣＶＣ１３０３与国家兽用生物制品工程技术研究中心构建的可溶性表达ＰＥＤＶ Ｓ蛋白核心表位ＣＯＥ的重组蛋白（Ｐ ＱＺＣＯＥ－ＬＴＢ）混合乳化制成疫苗，免疫４周龄的ＩＣＲ小鼠，首免１４ Ｄ后加免１次，随后采集首免１４（加强免疫前），２１，２８，５５ Ｄ的小鼠血清，分别用琼扩试验的方法定性检测血清Ｉｇｇ抗体以及用ＥＬＩＳＡ试剂盒定量检测小鼠血清Ｉｇｇ抗体滴度动态变化，肠组织ＳＩｇＡ抗体滴度。结果表明，重组蛋白与ＣＶＣ１３０３配合使用免疫小鼠能产生显著高于灭活苗（ＣＶ７７７）阳性对照组的Ｉｇｇ和ＳＩｇＡ抗．．．
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王水莲 冯建忠 李文平 夏迪 卢向阳 杨利国
将24头产后7 d的荷斯坦奶牛随机分为4组,高、中、低剂量免疫组(记为T1、T2、T3)分别注射1010、109、108 CFU/mL无抗性基因的抑制素真核表达质粒基因疫苗(重组菌C500(pXAIS))各3 mL,对照组(CK)注射10%生理盐水3 mL。初次免疫28 d后进行加强免疫。用B超诊断仪检测产后奶牛子宫恢复情况。结果表明:加强免疫能提高抗抑制素抗体P/N值,各免疫组P/N值均高于对照组,其中T1和T2组均与对照组差异显著(P
关键词：
奶牛 抑制素 基因免疫 子宫
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
秦磊 陆承平 陈怀青
将嗜水气单胞菌的胞外毒素(HEC) 和胞外蛋白酶(ECPase) 与迟缓爱德华氏菌脂多糖(LPS)、脱毒多糖(PS) 偶联, 制成3 种亚单位偶联疫苗 (HEC-PS、HEC-LPS、ECPase-PS), 分别免疫小鼠。另设这两种细菌的全菌灭活苗免疫及注射生理盐水对照组, 每组8 只。在第2 次免疫后第7 天用四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT), 检测脾淋巴细胞转化率与腹腔巨噬细胞吞噬活性, 并检测各组小鼠的全菌凝集抗体。结果表明, 亚单位疫苗的这两项细胞免疫指标明显高于对照组,但略低于全菌灭活苗免疫组, 而细胞免疫指标与抗体水平无对应的平行关系。
[期刊] 水产学报
[作者]
姜倩雯 张丽珊 李小艳 武瑶 赵怡扬 徐慧铭 林向民
为了筛选细菌的疫苗候选蛋白，本实验根据课题组前期的研究发现，挑选了2个嗜水气单胞菌外膜蛋白（A0KLQ6和A0KH89）并以A0KHR9（OmpAII）为对照,比较外膜蛋白与碳纳米管载外膜蛋白，分别在腹腔注射与浸泡免疫模式对斑马鱼的免疫反应与免疫保护效果。结果显示，腹腔注射组和浸泡组与普通蛋白组对比，碳纳米管载蛋白能够显著提高斑马鱼免疫相关基因表达量。腹腔注射组在5 μg剂量下免疫A0KHR9、A0KLQ6和A0KH89蛋白分别获得61.6 %、65.39 %和84.96 %相对免疫保护率（relative immune protection rate，RPS），在5 μg剂量下免疫碳纳米管载蛋白SWCNTs-A0KHR9、SWCNTs-A0KLQ6和SWCNTs-A0KH89分别获得68.10 %、77.50 % 和90.43 %的RPSs。浸泡组在40 mg/L剂量下免疫A0KHR9、A0KLQ6和A0KH89蛋白分别获得30.80 %、25.85 %和37.80 % 的RPSs，在40 mg/L最高剂量下免疫碳纳米管载蛋白疫苗SWCNTs-A0KHR9、SWCNTs-A0KLQ6和SWCNTs-A0KH89分别获得63.60 %、73.74 % 和68.49 % 的 RPSs。研究表明，铁离子限制下嗜水气单胞菌外膜蛋白A0KLQ6和A0KH89等蛋白能够作为抗嗜水气单胞菌的亚单位疫苗候选蛋白，而单壁碳纳米管载蛋白通过注射免疫与浸泡免疫均能显著提升免疫疗效，是一种疫苗的适宜纳米载体。以上研究为寻找高效的嗜水气单胞菌亚单位疫苗候选蛋白及佐剂提供了理论依据。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈昌福 罗宇良 曾妍雄 魏富兵
从 3种不同血清型的柱状嗜纤维菌中提取菌体脂多糖 (LPS) ,测定了其中蛋白质含量及其成分的变化 ,并分别作为免疫原接种翘嘴鳜 ,对LPS的免疫原性进行了比较。结果表明 ,不同血清型的柱状嗜纤维菌菌体LPS中蛋白质含量没有明显差别 (t测验 ,P >0 .0 5 ) ,而其中蛋白质成分则有明显的血清型特异性。不同血清型的菌体LPS对翘嘴鳜的免疫原性没有明显差别 (t测验 ,P >0 .0 5 )
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘国阳 华涛 乔绪稳 唐波 常晨 侯继波 李锦春 张道华
【目的】研制PCV2ORF2基因编码的Cap蛋白与PPV VP2结构蛋白二联亚单位疫苗。【方法】设计截去NLS信号肽序列的Cap蛋白氨基酸序列和VP2蛋白氨基酸全序列,分别进行大肠杆菌偏嗜密码子优化,构建重组表达质粒,利用大肠杆菌表达系统表达出可溶性的Cap蛋白和VP2重组蛋白。将重组蛋白纯化后分别与ISA201佐剂混合制备单苗和二联亚单位疫苗,免疫ICR小鼠,同时设立PBS空白对照和大肠杆菌BL21对照。首免后21d进行加强免疫,利用MTT比色法、细胞中和试验法和ELISA法对免疫小鼠淋巴细胞的转化功能及细胞因子(IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α)mRNA水平、免疫后中和抗体效价以及ELISA抗体水平进行检测。小鼠二免21d后进行PPV和PCV2混合攻毒,利用Real-time PCR法定量测定攻毒后小鼠脾脏的病毒含量。【结果】成功构建了重组质粒pET32a-Cap和pET32a-VP2,表达出可溶性蛋白Cap和VP2,经GEM颗粒和饱和硫酸铵沉淀法纯化蛋白,获得的PCV2Cap蛋白质量浓度为1 213μg/mL,PPV VP2蛋白质量浓度为1 025μg/mL。两种蛋白混合乳化制苗后无相互免疫抑制作用,并且能够诱导机体产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。免疫后42d,单苗免疫组和二联亚单位疫苗组PCV2ELISA抗体效价均能达到800以上,中和抗体达到32~38,PPV HI抗体效价均高于6,PPV中和效价高于300,并且诱导机体产生强烈的淋巴细胞增殖反应,提高IL-4和IFN-γ的mRNA表达水平。攻毒试验结果显示,免疫组小鼠脾脏中PCV2和PPV含量显著低于对照组,免疫组组间无显著性差异。【结论】利用大肠杆菌表达的PCV2Cap蛋白和PPV VP2蛋白制备的二联亚单位疫苗免疫ICR小鼠,其抗体水平与Cap、VP2单苗免疫水平相当,且对ICR小鼠有较好的免疫保护作用。
[期刊] 水产学报
[作者]
李岩 庞欢瑛 鲁义善 吴灶和 简纪常
用免疫蛋白质组学的研究方法鉴定了哈氏弧菌的免疫反应蛋白。将哈氏弧菌接种于TSB培养基28℃培养18h,利用裂解液裂解细菌,提取全菌可溶性蛋白,一向电泳采用7cmpH4～7的胶条进行等电聚焦,二向用12.5%的SDS-PAGE胶分离蛋白质,考马斯亮蓝染色,获得双向电泳图谱,再结合免疫转印技术检测免疫反应的蛋白质,利用ImageMaster 2D Platinum进行配对分析得到15个非特异性的免疫反应性蛋白点,30个特异性的免疫反应性蛋白点。经过鉴定得到13种非特异性的免疫反应性蛋白质,这其中有2对蛋白在胶上的位置不同,但鉴定为同一种蛋白;同时得到28种特异性的免疫反应性蛋白质,有一个蛋白点没有...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈昌福 曾妍雄 楠田理一
从培养不同时间后的柱状嗜纤维菌中提取菌体脂多糖 (LPS) ,测定了其中蛋白质含量及成分的变化 ,并分别作为免疫原接种翘嘴鳜对其免疫原性进行了比较。结果表明 ,培养时间对菌体LPS中蛋白质含量没有明显影响 ,对其蛋白质成分则有一定影响 ,而菌体LPS中蛋白质成分与其免疫原性有关 ,从培养 36h的菌体中提取的菌体LPS的免疫原性最强
关键词：
柱状嗜纤维菌 脂多糖 翘嘴鳜 免疫原性
[期刊] 水产学报
[作者]
王吉桥 王文辉 李文宽 骆小年 李敬伟
将黄颡鱼种放养在网箱中,投喂蛋白质含量30.0%、38.0%或46.0%和维生素C磷酸酯0、500、1000或1500mg·kg-1的半纯饲料。50d的饲养表明:饲料蛋白质含量在38%～40%时,鱼的特殊生长率和蛋白质效率最高,饲料系数最低。饲料维生素C磷酸酯含量为847、850、994和634mg·kg-1时,血清总蛋白、γ球蛋白、溶菌酶活性最高,超氧化物歧化酶活力最低。饲料蛋白质含量从30%上升到38%时,鱼体蛋白含量由60.95%升到69.86%,脂肪由29.27%降至21.69%;达46%时,鱼体蛋白(64.35%)含量下降,而脂肪(26.06%)含量上升。饲料粗蛋白含量为38%时,鱼...
关键词：
黄颡鱼 蛋白质 维生素C 生长 免疫力
[期刊] 水产学报
[作者]
陈乃松 肖温温 梁勤朗 周恒永 马秀丽 赵明
为探讨大口黑鲈饲料中不同脂肪与蛋白质含量比对其生长、体组成和非特异性免疫的影响,实验设计了8种(D1~D8)不同脂肪与蛋白质含量比的总能递增饲料。D1~D8饲料的脂肪水平递增(9.0%～26.5%),而蛋白质水平递减(52.0%～31.0%)。用上述饲料饲养体质量为(10.06±0.02)g的大口黑鲈88 d,每饲料设3重复,每重复30尾鱼。结果显示,特定生长率、饲料效率、蛋白质消化率、脂肪消化率和脂肪沉积率均以D2组最高,但随饲料中脂肪与蛋白质含量比的进一步升高呈现显著下降趋势。D3~D5组的蛋白质效率显著高于D1和D8组。D2、D3组与D4组间的蛋白质沉积率差异不显著,但显著高于其他各组。...
关键词：
大口黑鲈 生长 体组成 非特异性免疫
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王美琴 李勇 车向荣 王华 夏苏东 孙国祥
在封闭循环水养殖条件下,进行5×3双因素随机设计动物试验,即5种饲料蛋白质水平(43%、46%、49%、52%和56%;以A—E组表示)和3种饲喂饱食度水平(100%、90%和80%;以Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ水平表示),共15个处理,每处理3重复,试验期108d。探寻蛋白质营养与饱食度对工厂化养殖半滑舌鳎幼鱼(110±25g)生长与免疫的影响。结果表明,(1)高蛋白水平与高饱食度投喂的增重效果最佳,E组增重率极显著高于其他组13.75%～50.16%,Ⅰ水平比Ⅱ和Ⅲ水平分别极显著提高7.57%和14.08%;中蛋白水平蛋白效率较高而死亡率最低,C组死亡率比其他组降低50%～75%;低饱食度的饲料利用率和蛋...
[期刊] 林业科学
[作者]
郭红彦 彭方仁 吴青霞 白晋华
依据银杏枝条中32和36ku蛋白质含量的明显季节变化,推测它们是银杏的营养贮藏蛋白质。采用间接免疫组织细胞化学定位技术,对这2种蛋白质进行细胞化学定位。32和36ku蛋白质具有一定的免疫相关性,它们分布在一些皮层薄壁细胞和韧皮部的韧皮薄壁细胞中,存在于这些细胞的小液泡里。研究结果揭示这2种蛋白质的组织分布式样,为这2种蛋白质是银杏的营养贮藏蛋白质提供有力证据。
关键词：
银杏 营养贮藏蛋白质 免疫细胞化学定位
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