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[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
赵侠 李燕 孙慧敏 郑昌亮 宋益善
食源性二肽基肽酶IV（dipeptidyl peptidase-IV，DPP-IV）抑制肽和抗氧化肽分别有助于清除体内自由基和调节机体血糖。为实现脱脂南极磷虾粉的高值化利用，为糖尿病治疗寻找新方法，从脱脂南极磷虾粉酶解产物中制备DPP-IV抑制肽和抗氧化肽。使用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰酶水解脱脂南极磷虾粉，探究时间与水解度、活性、产率的关系，并分离纯化多肽，最后通过分子对接确定抑制作用位点。结果表明，酶解液经超滤、Sephadex G15分离纯化和液相-质谱联用技术鉴定后，得到了4条具有DPP-IV抑制和抗氧化作用的肽，氨基酸序列分别为WPPLSPFRCPR、IPDWFLNRQ、FLWLKKTPLPL和DTVPWFPR。其中IPDWFLNRQ具备较高DPP-IV抑制活性，DPP-IV抑制活性IC_(50)值为（0.616±0.097) mmol/L；WPPLSPFRCPR具有较高的抗氧化活性，DPPH EC_(50)值为(0.0983±0.011) mmol/L，ABTS EC_(50)值为(0.116±0.073) mmol/L。分子对接结果表明这4种肽主要通过氢键与DPP-IV活性中心及其以外的位点相结合，从而达到抑制DPPP-IV活性的作用。本研究基于脱脂南极磷虾粉制备食源性DPP-IV抑制肽和抗氧化肽，以期为南极磷虾粉的开发利用提供理论依据。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵晓蕾 田甜 胡远亮 赵述淼 梁运祥
通过高效凝胶过滤层析和反相高效液相色谱先后对大米渣蛋白酶解后的多肽溶液进行分离纯化,分别得到组分2和组分RF9;再经反相高效液相色谱-质谱联用对组分RF9进行分析鉴定得到抗氧化肽氨基酸序列L-Q-P-Y(Leu-Gln-Pro-Tyr),分子质量为520.277u。合成的抗氧化肽片段L-Q-P-Y质量浓度为1 mg/mL时,对DPPH自由基清除率达到85.84%。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
李芙蓉 施文正 李燕
采用复合蛋白酶酶解南极磷虾得到虾粉多肽,经超滤分离和高速逆流色谱技术进行分离纯化并检验其体外抗氧化活性。结果表明:经超滤分离后的多肽在分子量范围为5～10 ku时多肽抗氧化活性最好,当浓度为10 mg/m L时,其超氧阴离子自由基清除率达到21. 28%,DPPH自由基清除率为86. 52%,对羟基自由基清除率为53. 49%,Fe~(2+)螯合率为85. 35%。对分子量范围在5～10 ku的多肽进行高速逆流色谱分析,采用体积比为氯仿∶丁醇∶甲醇∶水=4∶0. 75∶3∶2作为两相溶剂体系,下相作固定相,上相作流动相;反转,转速900 r/min,恒温水浴温度为25℃,在流动相的流速1. 5 m L/min,进样浓度20 mg/m L的条件下分离得到5个组分。经测定:当浓度为5 mg/m L时,P3组分清除超氧阴离子自由基的能力和Fe~(2+)螯合能力均显著高于其余4个组分,分别为37. 18%和92. 33%,P2组分的DPPH自由基清除率最高,为90. 33%,P5组分的羟基自由基清除率最高,为70. 11%。与未经HSCCC分离的对照组相比,抗氧化活性均得到明显增强。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
潘月 雷美玲 吕兆林 任美玲 王小玉 王媛媛 张柏林
对超临界CO2流体萃取技术提取的竹叶粗多糖采用分级醇沉、脱蛋白质及纤维素柱层析等技术分离纯化,研究分离纯化后的竹叶多糖产物的物化指标。研究结果表明:经超临界CO2流体萃取技术提取得到的毛竹叶粗多糖,采用体积分数为70%的乙醇沉淀,得到预纯化产物,预纯化产物得率17.75%,多糖含量9.586 mgg,总抗氧化能力2.556 mgg VC;预纯化产物再经Sevag法脱蛋白质及DEAE-52纤维素层析柱层析,获得一种中性竹叶多糖,其平均分子量为5.051×104,IC50值为0.178 mgg竹叶多糖,与VC(IC50值为0.158 mgg)相比,具有较好的DPPH清除能力。
关键词：
毛竹 竹叶多糖 分离 纯化
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张名位 郭宝江 张瑞芬 池建伟 魏振承 徐志宏 张雁
目的分离、纯化和鉴定黑米抗氧化的主要活性成分。方法以体外总抗氧化能力为活性跟踪指标,对黑米抗氧化提取物用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇等不同极性溶剂萃取分部后得到抗氧化能力最强的部分,再用SephadexLH-20分离得到抗氧化主活性成分,采用紫外-可见光谱、红外光谱、ESI-MS质谱和核磁共振(1HNMR和13CNMR)波谱法对其进行结构解析。结果黑米抗氧化提取物的5种溶剂萃取物以水部和正丁醇部的抗氧化能力最强,其总抗氧化能力分别为383和392ku·g-1,其中,从水部可得到4种抗氧化主活性成分,总抗氧化能力分别为976、878、1134和1087ku·g-1。波谱结构解析表明,4种成分均...
关键词：
黑米 抗氧化活性成分 结构鉴定
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
张元元 汪之和 陈敏 施文正
本文研究了３种不同的蛋白酶（木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶）分别水解南极磷虾得到多肽的体外抗氧化活性，以清除超氧阴离子、羟自由基和ＤＰＰＨ的能力为指标。结果表明，木瓜蛋白酶水解制备的多肽抗氧化活性比较好，其次是碱性蛋白酶。用响应面法优化木瓜蛋白酶水解南极磷虾制备多肽的工艺参数，经凝胶电泳测定其分子量，显示该多肽有３个明显条带，其分子量大多位于３～７ ｋｕ。将上述多肽溶液脱氟后经超滤系统分离，按分子量（ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇＨｔ，ｍｗ）大小分为ｍｗ≥１０ ｋｕ，５～１０ ｋｕ，ｍｗ≤５ ｋｕ的３种多肽，并比较其抗氧化活性的强度。在本实验体系浓度范围内，３种不同分子量的多肽对超氧阴离子、羟．．．
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
葛智超 郎蒙 李燕
以裸藻为原料，将粗提后的裸藻多糖（EGPS）经DEAE-纤维素和Sephadex G-100柱层析进行分离纯化，得到3个主要组分EGPS1-A、EGPS1-B、EGPS3-A，并对其进行纯度鉴定和抗氧化活性分析，将纯化后抗氧化活性较好的裸藻多糖进行分子量测定、单糖组成分析。纯度鉴定结果表明柱层析后得到的3个多糖组分纯度较高，红外光谱表明其均具有典型的糖类特征吸收峰。抗氧化实验表明3个多糖组分中EGPS1-A的综合抗氧化活性最高，EGPS1-A的分子量为136.8ku，单糖组成包括甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖，单糖组分间物质的量比值是0.072：0.43：0.049：0.01：0.26：0.62：0.53：0.18：1.01。
关键词：
裸藻多糖 分离纯化 单糖组成 抗氧化活性
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
荣雅利 周婷婷 施文正 汪之和 李燕
南极磷虾生活在在极寒环境，其体内特殊的蛋白酶系统是其维持正常新陈代谢的关键因素。羧肽酶为南极磷虾蛋白酶系统中一类主要且关键的蛋白酶，酶学性质研究对其后续基础研究开展及商业利用都具有指导意义。本研究以南极磷虾为原料，采用缓冲液提取、硫酸铵分级盐析，DEAE-琼脂糖凝胶FF阴离子层析和Sephadex G-100凝胶层析，从南极磷虾匀浆液中分离纯化出一种羧肽酶，SDS-PAGE结果显示其分子量为30ku。酶学性质研究结果显示：该酶最适温度为30℃；最适pH为8.0。热稳定性较差，即使在4℃下保温超过2h酶活性会急剧下降。金属离子Ni~(2+)、Mn~(2+)、Zn~(2+)、Mg~(2+)具有激活作用，且激活作用依次增强；而Ca~(2+)、Fe~(3+)、Cu~(2+)起抑制作用，Cu~(2+)抑制效果最明显。对巯基有修饰作用的抑制剂DTT、β-巯基乙醇对其有抑制作用，推测该酶活性中心存在二硫键；金属蛋白酶抑制剂EDTA、1,10-菲罗啉对该酶活性有明显的抑制作用，说明了其具有金属蛋白酶特性；而丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF对该酶抑制作用并不强烈。以脲酰-L-苯丙氨酸为底物溶液，测得该酶Km为0.0059mg/mL、Vmax为4.9091U/min。
关键词：
南极磷虾 羧肽酶 分离纯化 酶学性质
[期刊] 水产学报
[作者]
林娜 马德蓉 刘志东 倪玲 段蕊 张俊杰
为了探究南极磷虾致敏问题，从南极磷虾中筛选、鉴定、分离纯化其主要过敏原，并对过敏原的性质进行研究，实验通过缓冲盐溶液提取南极磷虾蛋白；采用SDS-PAGE和Western blot (WB)筛选南极磷虾过敏原；使用高效液相色谱-串联质谱鉴定过敏蛋白；通过等电点沉淀、硫酸铵盐析、阴离子交换柱层析分离纯化过敏原；采用SDS-PAGE及WB分析南极磷虾主要过敏原的耐热性及对模拟胃肠液的消化稳定性。结果显示，南极磷虾肌浆蛋白(SP)和肌原纤维蛋白(MF)电泳条带丰富且分子量范围广。南极磷虾蛋白与虾蟹过敏患者血清能发生免疫反应，其中至少有4个蛋白条带发生了阳性反应；免疫反应最强烈的蛋白分子量约为35 ku，能够被所有的患者血清识别，经液质联用鉴定此过敏蛋白为南极磷虾原肌球蛋白(TM)。硫酸铵分级盐析纯化TM的最佳饱和度为50%；分离纯化后得到了纯度较高的TM，其等电点为4.4，热稳定性好，能与虾蟹过敏患者血清发生强烈的免疫反应。TM随着模拟胃液消化时间的延长，主条带分子量逐渐降低，最后稳定在33 ku左右，并且分子量为15和12 ku的降解片段含量逐渐增多且稳定存在；这些降解条带仍然能与过敏患者血清发生较强的免疫反应。随着模拟肠液消化时间的延长，TM原始片段逐渐减少直至消失，最后完全降解成分子量更小的多肽；TM经肠液消化后其降解产物免疫活性大大降低。研究表明，南极磷虾中存在过敏原，TM是其最主要的过敏原，且具有免疫反应性。TM还具备了过敏原的一般特性，比如耐高温、耐胃蛋白酶消化、对胰蛋白酶消化部分稳定。研究结果对于阐明南极磷虾潜在致敏问题的预警和防控具有现实意义，也为南极磷虾加工利用及过敏原消减技术构建提供基础信息。
[期刊] 水产学报
[作者]
欧阳杰 赵昕源 马田田
虾青素由于结构稳定性较差，在高温条件下易降解和异构化。为了掌握南极磷虾粉加工过程中虾青素含量、结构及抗氧化能力的变化情况，采用高效液相色谱法测定虾青素在各加工阶段的含量及结构变化，对比虾青素在各加工阶段的抗氧化性差异，分析虾青素结构与功能活性的相关性。结果显示，南极磷虾原料中虾青素含量为110.6 mg/kg，其中全反式结构虾青素占比90.7%,13-顺式虾青素和9-顺式虾青素占比分别为4.7%和4.6%，经过蒸煮和干燥后，虾青素含量分别为88.7和52.1 mg/kg，全反式虾青素占比分别为76.2%和72.2%,13-顺式虾青素占比分别为19.9%和21.9%,9-顺式虾青素占比分别为3.9%和5.9%。南极磷虾原料中虾青素的3S, 3′S,3S, 3′R和3R, 3′R三种光学异构体含量分别为16.8、17.9和72.1 mg/kg，蒸煮后分别为12.0、25.5和55.3 mg/kg，干燥后分别为2.8、8.1和12.4 mg/kg。各阶段虾青素清除DPPH自由基能力均显著强于Vc，在羟基自由基清除实验中，蒸煮和干燥后的虾青素抗氧化能力强于原料中的虾青素，在FRAP铁离子还原实验中，蒸煮和干燥后的虾青素也表现出了更高的还原能力。研究表明，在虾粉加工过程中，虾青素的几何异构主要发生在蒸煮阶段，光学异构主要发生在干燥阶段，相对于磷虾原料，经蒸煮和干燥后的虾青素抗氧化能力增强。本研究可为南极磷虾粉加工工艺优化及虾青素提取利用提供理论依据和技术参考。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
黄文 谢笔钧 王益 杨尔宁 罗锐
选用江苏省泰兴市大佛指白果为原料,采用盐溶和盐析的方法,从白果中分离制备出清蛋白(GAP)、球蛋白(GGP)和盐溶蛋白(GSP)。白果蛋白中以清蛋白和球蛋白为主,醇溶蛋白、碱溶蛋白和复合蛋白含量很少。化学成分分析表明,制得的GAP、GGP和GSP中以GAP的蛋白质纯度高,氨基酸组成丰富、合理,属于优质蛋白质。活性试验结果表明GAP的抗氧化活性远高于GGP。
关键词：
白果 盐溶 盐析 清蛋白 抗氧化
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
魏文志 夏文水 吴玉娟
从小球藻中提取蛋白质,并研究了小球藻蛋白质抗氧化特性。通过反复冻融、细胞破碎、离心、盐析和凝胶层析,从小球藻中得到两种蛋白质(ProⅠ和ProⅡ),获得率分别为0.280%和0.664%。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示为单条带,分子量分别为20.2 ku和20.4 ku。紫外可见光谱显示,ProⅠ在280 nm有一特征吸收峰,ProⅡ在280 nm和675 nm处各有一特征吸收峰。体外设计清除超氧阴离子自由基(O2?.)和羟自由基(.OH)实验,结果显示两种蛋白质能清除超氧阴离子自由基,黑暗条件下能清除羟自由基,但光照条件下生成羟自由基。
关键词：
小球藻 蛋白质 分离纯化 抗氧化活性
[期刊] 中国水产科学
[作者]
韩星星 叶坤 王志勇 陈丰林 柴志强 詹炜 王秋荣
本实验旨在探讨脱脂黑水虻(Hermetia illucens)虫粉(DBSFLM)替代鱼粉(FM)对大黄鱼(Larimichthys crocea)幼鱼生长、体成分、血清生化指标及抗氧化能力的影响。实验设计6组等氮(粗蛋白45%)等脂(粗脂肪10%)饲料,用黑水虻脱脂虫粉分别替代饲料中0%、20%、40%、60%、80%和100%的鱼粉蛋白,分别记为G0、G20、G40、G60、G80和G100。选用2160尾平均体重为(50.08±3.31)g的大黄鱼幼鱼随机分为6组,每组3个重复,每个重复120尾,在室内水泥池(2 m×1 m×1 m)进行为期7周的投喂实验。结果表明:(1) G100组大黄鱼幼鱼存活率显著低于其他实验组, G40组大黄鱼增重率(WGR)、蛋白质效率(PER)均显著高于其他组(P<0.05);(2)大黄鱼肌肉粗蛋白含量随着DBSFLM替代FM水平的增加而下降,替代40%及以上鱼体粗蛋白含量显著降低(P<0.05);肌肉的粗脂肪和粗灰分含量则随DBSFLM替代FM水平的增加而升高,其中替代60%及以上鱼体粗脂肪和粗灰分含量显著升高(P40%),大黄鱼血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性显著上升(P<0.05),甘油三酯(TG)和胆固醇(CHOL)水平显著下降(P<0.05);(4)G20组大黄鱼肝脏总抗氧化能力(T-AOC)及G40组实验鱼肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性均为最高,G40组大黄鱼肝脏丙二醛(MDA)含量最低。过氧化氢酶(CAT)活性随着DBSFLM替代FM水平升高呈现下降趋势,替代40%及以上CAT活性显著下降(P<0.05)。综上所述,在本实验条件下,脱脂黑水虻虫粉替代饲料中40%鱼粉蛋白对大黄鱼幼鱼的生长性能、体成分及健康状况无负面影响。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
安贤惠 梁建国 李卫国 徐春花 吕毅 王旭 董靖 张崇星 张克云
以水产病害的病原菌为目标菌,从中国对虾(Penaeus chinesis)体液中分离筛选抗菌肽,通过Sephadex G-50、RP-HPLC等分离纯化技术,得到一种抑制水产病原菌的抗菌肽PC-V-2。经初步鉴定,该抗菌肽具有广谱抗性,不仅抗鲁克氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri),而且对金黄色葡萄球菌(Staphyloccus aureus)、枯草杆菌(Bacillus subttilis)等革兰氏阳性菌,大肠杆菌(Escherichia coli)等革兰氏阴性菌和白色念珠菌(Candida albicans)等真菌也有较强的抗性。另外,该抗菌肽还有一定的抑制凝血的活性,但没有检...
[期刊] 海洋渔业
[作者]
杨程 高权新 张晨捷 彭士明 施兆鸿
以银鲳(Pampus argenteus)幼鱼为研究对象,设置4组不同南极磷虾粉替代鱼粉水平(0%、10%、20%、40%,其中0%为对照组)的饲料,进行60 d的饲养实验,探讨饲料中添加南极磷虾粉对银鲳幼鱼生长、非特异性免疫及抗氧化功能的影响。结果显示:饲料中添加南极磷虾粉的处理组银鲳增重率与特定生长率(SGR)较对照组均有显著性提高(P 0.05)。血清中碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)及溶菌酶(LZM) 20%饲料组活性均为最高,但与对照组无显著差异;肝脏AKP活性、肾脏LZM活性10%饲料组均分别显著高于其它各组(P 0.05);添加南极磷虾粉的饲料组血清和肌肉中过氧化氢酶(CAT)的活性均高于对照组,其中40%饲料组血清和肌肉CAT的活性均显著高于对照组(P <0.05)。结果表明,本实验条件下,结合银鲳幼鱼生长性能、非特异性免疫及抗氧化能力的分析,南极磷虾粉替代饲料中鱼粉的适宜比例建议控制在10%～20%。
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