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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
马立 金鑫 林佳佳 陈佳雯 海思娆 裘知 王正 汪洋 赵杰 李玉 冯士彬 吴金节 王希春
[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯(Deoxynivalenol，DON)诱导仔猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)焦亡的分子机制。[方法]以500ng·mL~(-1)DON和1μmol·mL~(-1)4-PBA(内质网应激抑制剂)单一及联合染毒IPEC-J2细胞24h。采用CCK-8测细胞活率；倒置显微镜观察细胞生长状况；透射电镜观察细胞超微结构;WB和qRT-PCR测内质网应激通路和细胞焦亡关键分子的基因相对表达量和蛋白表达水平；流式细胞仪测ROS含量。[结果]与对照组相比，DON组细胞缝隙变宽、细胞密度降低、超微结构被破坏，ROS、MDA、IL-1β、IL-18含量极显著升高（P<0.01），GRP78、IRE1、ATF6，、GSDMD和Caspase-1的mRNA相对表达量极显著升高（P<0.01），GRP78、CHOP、ATF6、IRE1、GSDMD和Caspase-1的蛋白表达水平极显著升高(P<0.01)，SOD、GSH-Px、CAT的活性极显著下降（P<0.01）。与DON组相比，DON和4-PBA联合处理组的细胞数量增多，细胞缝隙变小，细胞器形态正常，ROS、MDA、IL-1β、IL-18含量以及ATF6、Caspase-1的mRNA相对表达量极显著下降（P<0.01），GSDMD、GRP78和IRE1的mRNA相对表达量显著下降（P<0.05)，GRP78、CHOP、ATF6、IRE1、GSDMD和Caspase-1的蛋白表水平极显著降低(P<0.01)，SOD、GSH-Px活性极显著上升（P<0.01）。[结论]DON可通过激活内质网应激通路诱导IPEC-J2细胞焦亡。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
萧晟 刘丹丹 甘芳 黄克和
[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)暴露对体外培养的仔猪空肠上皮(IPEC-J2)细胞增殖、凋亡和屏障功能的影响,探讨DON的肠道毒性作用及其相关机制。[方法]以不同浓度的DON(0、0.5、1、2、4、8、和16 μmol/L)处理IPEC-J2细胞24 h后,采用MTT法、Hoechst 33258、western blot、Millipore-ERS和IFA检测DON对IPEC-J2细胞增殖、对细胞凋亡、屏障功能和自噬的影响;通过添加自噬激活剂雷帕霉素(RAPA)来升高细胞的自噬水平,用上述方法检测RAPA对DON引起的IPEC-J2细胞增殖毒性、凋亡和屏障功能的影响。[结果]与对照组相比,当DON浓度达到4、8和16 μmol/L时:1)细胞增殖显著下降(P<0.05);2)凋亡细胞数量和凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3表达显著增加(P<0.05);3)细胞跨膜电阻和紧密连接蛋白occludin表达显著下降(P<0.05);4)自噬相关蛋白LC3-II和Atg5表达显著下降(P<0.05);5)当添加自噬激活剂雷帕霉素(Rapa)时,可以显著缓解DON引起的细胞增殖毒性、凋亡和屏障障碍。[结论]DON暴露通过抑制自噬引起IPEC-J2细胞增殖下降、凋亡增加和屏障功能障碍。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
萧晟 刘丹丹 甘芳 黄克和
[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对体外培养的仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)增殖、凋亡和屏障功能的影响,探讨DON的肠道毒性作用及相关机制。[方法]以不同浓度(0、0.5、1、2、4、8、和16μmol·L~(-1))DON处理IPEC-J2细胞24 h后,采用MTT、Hoechst 33258、Western blot、Millipore-ERS和IFA法检测DON对IPEC-J2细胞增殖、凋亡、屏障功能和自噬水平的影响;在4μmol·L~(-1) DON处理组添加自噬激活剂雷帕霉素(Rapa)来提高细胞的自噬水平,用上述方法检测Rapa对DON引起的IPEC-J2细胞增殖毒性、凋亡和屏障功能的影响。[结果]与对照组相比,当DON浓度为4、8和16μmol·L~(-1)时,细胞活性显著(P<0.05)或极显著(P<0.01),细胞跨膜电阻(TEER)值和紧密连接蛋白Occludin表达显著下降(P<0.05),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Atg5表达显著下降(P<0.05)。添加Rapa可以显著缓解DON引起的细胞毒性、凋亡和屏障功能障碍。[结论]DON通过抑制自噬引起IPEC-J2细胞增殖下降、凋亡增加和屏障功能障碍。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
许伟 范梦雪 孟婷婷 胡文娟 宫佳杰 陈晓芳 姜云晶 朱电峰 冯士彬 李玉 吴金节 王希春
［目的］本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇（ｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ，ｄｏｎ）诱导ＰＣ１２细胞凋亡及对相关基因ＢＣｌ－２、Ｂａｘ、Ｂｉｄ ｍＲｎａ和蛋白Ｃｌｅａｖｅｄ－ＣａｓＰａｓｅ ３、Ｃｌｅａｖｅｄ－ＣａｓＰａｓｅ ９表达水平的影响。［方法］用不同质量浓度的ｄｏｎ（０、１２５、２５０、５００、１ ０００和２ ０００ ｎｇ·ｍ ｌ～（－１））对ＰＣ１２细胞染毒２４ ｈ，采用透射电镜观察、流式细胞术、荧光定量ＰＣＲ、ＷｅｓｔｅＲｎ－Ｂｌｏｔ等方法，研究ｄｏｎ对ＰＣ１２细胞的超微结构、凋亡率、凋亡相关基因及蛋白表达的影响。［结果］不同浓度的ｄｏｎ均可诱导细胞凋亡，各试验组细胞凋亡率均极显著高于．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈晓芳 张娅菲 储小燕 姜云晶 朱电锋 范梦雪 冯士彬 李玉 吴金节 王希春
[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对仔猪海马神经细胞的凋亡及其信号通路的影响。[方法]体外培养仔猪海马神经细胞至对数生长期,以不同质量浓度的DON(0、125、250、500、1 000和2 000 ng·mL~(-1))进行处理,采用倒置显微镜和透射电镜观察细胞的形态学变化及线粒体结构,CCK-8试剂盒检测细胞的存活率,流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化,ELISA试剂盒检测caspase-3酶活性,荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Bcl-2和Bax mRNA的表达水平。[结果]DON可显著抑制仔猪海马神经细胞存活率并诱导细胞发生明显的形态学变化,且具有剂量和时间效应;DON可降低线粒体膜电位,增强caspase-3酶活力,并通过上调Bax mRNA和下调Bcl-2 mRNA的表达,增加Bax/Bcl-2值。[结论]DON可通过引起线粒体功能障碍,激活caspases-3并调节Bcl-2家族基因,从而诱导仔猪海马神经细胞凋亡。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
姜云晶 杨子鹏 朱电锋 范梦雪 陈晓芳 储小燕 张娅菲 刘秦 刘锦芳 李玉 冯士彬 吴金节 王希春
【目的】研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对PC12细胞自噬的影响。【方法】以不同质量浓度(0(CK),125,250,500,1 000和2 000ng/mL)的DON处理PC12细胞24h后,采用倒置显微镜、透射电镜、免疫荧光、荧光定量PCR、Western-blot等技术,研究DON对PC12细胞形态和超微结构、LC3聚点率及自噬相关基因classⅢPI3 K、Beclin-1、P62 mRNA和蛋白LC3Ⅱ、P62、classⅢPI3K表达的影响。【结果】不同质量浓度的DON均可诱导PC12细胞自噬,各试验组细胞自噬水平均高于对照组(CK),并随着DON质量浓度的增大而先增加后下降,在DON质量浓度为1 000ng/mL时达到峰值。与对照组相比,各试验组classⅢPI3 K mRNA和Beclin-1mRNA表达水平均极显著增高(P<0.01),P62mRNA表达水平随着DON质量浓度的增加总体呈下降趋势,差异达显著(P<0.05)或极显著(P<0.05)或极显著(P<0.05)或极显著(P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
丁举静 何成华 刘俐君 马彦娜 张海彬
为了探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对体外培养仓鼠肾细胞(BHK-21)的线粒体膜电位及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响,采用细胞培养、流式细胞术、免疫细胞化学染色等方法,研究DON对细胞早期凋亡率、线粒体膜电位及Bax和Bcl-2蛋白表达的变化。结果显示:不同浓度的DON均可诱导BHK-21细胞凋亡,各浓度组的凋亡率都显著高于对照组(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
史建荣 刘馨 仇剑波 祭芳 徐剑宏 董飞 殷宪超 冉军舰
脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON),又称呕吐毒素,是由小麦赤霉病菌禾谷镰刀菌复合群(Fusariumgraminearum species complex)产生的单端孢霉烯族毒素,毒素在小麦籽粒中累积。作为B型单端孢霉烯族毒素,DON可以引起呕吐、拒食、腹泻、出血甚至死亡,对猪的危害尤其严重。近年来,小麦赤霉病在世界各地高频率流行,尤其在中国长江中下游小麦生产区以及黄淮部分小麦产区、美国中西部小麦主产区,导致小麦中DON毒素严重超标,并引发了严重的食品安全问题。本文对国内外小麦中DON毒素的污染现状、产毒镰刀菌种类及其化学型的分布及其趋势、毒素产生的调控机制以及小麦中DON毒素的防控途径进行了论述,...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
徐剑宏 祭芳 王宏杰 王建伟 林凡云 史建荣
【目的】分离筛选能够降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的细菌,以期能在该毒素的生物解毒处理中得到应用。【方法】用高产毒禾谷镰刀菌F-25接种灭菌的小麦籽粒,培养后获得DON毒素;然后以DON毒素为唯一碳源进行DON毒素降解菌的驯化富集培养,得到能够降解DON毒素的混合菌群,逐一对分离到的细菌进行DON毒素降解能力检测,得到能够降解DON毒素的菌株。【结果】筛选得到的菌株DDS-1对液体培养基中的DON毒素的降解能力达95%以上,显著高于其它菌株;从形态、生理生化特性以及16S rDNA序列进行分析,DDS-1菌株初步鉴定为徳沃斯氏菌Devosia sp.;把DDS-1添加到小麦饲料中后,饲料中的...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王育伟 吴文达 施志玉 任喆 何成华 张海彬
[目的]脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)是饲料及原料中广泛存在的真菌毒素,本文以幽门结扎大鼠为模型研究DON对大鼠胃液组成的影响。[方法]将24只禁食Wistar大鼠随机分为4组,分别以0、1、5和25 mg·kg(-1)的DON灌胃染毒0.5 h后进行幽门结扎术,4 h后收集胃液。测定胃液体积、p H值、胃蛋白酶含量及活性、黏蛋白和金属离子含量等。[结果]与对照组相比,1、5和25 mg·kg(-1)DON染毒大鼠胃液体积分别下降了24.88%、51.39%和60.88%(P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
宋玉立 陈利锋 聂理 徐朗莱 徐雍皋
脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小麦愈伤组织ＳＯＤ活力的影响宋玉立１陈利锋１聂理２徐朗莱２徐雍皋１（１南京农业大学植物保护学系，２理学院，南京２１００９５）ＥＦＦＥＣＴＯＦＤＥＯＸＹＮＩＶＡＬＥＮＯＬＯＮＴＨＥＡＣＴＩＶＩＴＩＥＳＯＦＳＵＰＥＲＯＸＩＤＥＤＩＳ...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
朱电锋 张娅菲 储小燕 陈晓芳 刘秦 冯士彬 李玉 吴金节 王希春
[目的]本试验旨在通过脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)体内试验,根据仔猪血清细胞因子水平、肠黏膜sIgA水平及肠道免疫球蛋白mRNA相对表达量的变化,研究DON对断奶仔猪免疫机制的影响。[方法]选取30头21日龄"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪,随机分为对照组、DON低剂量组和DON高剂量组,对照组饲喂基础饲粮,低剂量组和高剂量组分别饲喂含1和2 mg·kg-1DON的基础饲粮。试验期60 d。在试验开始后的0、14、28、42和60 d,所有仔猪经前腔静脉采血,检测血清细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6水平;试验结束时,每组随机选取5头仔猪剖杀,取十二指肠、空肠和回肠,检测肠道黏膜sIgA水平及肠组织IgA、IgM、IgG mRNA相对表达量。[结果]DON能显著或极显著降低仔猪平均日采食量与平均日增重,增加料重比(P<0.05,P<0.05),其中DON高剂量组的作用效果比低剂量组更加明显。[结论]DON可以降低仔猪的生长性能、血清细胞因子及肠道免疫水平,对断奶仔猪具有一定的免疫毒性作用。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
何成华 樊彦红 刘国芳 张海彬
以脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)为唯一碳源,通过富集培养从土壤中分离到一株可以转化DON的真菌,命名为NJA-1。用引物Bt2a、Bt2b扩增了该菌的β-tubulin基因序列,GenBank的登录号为DQ902579。通过基因序列分析和形态学观察最终鉴定该菌株为塔宾曲霉(Aspergillus tubingensis)。该菌与塔宾曲霉AY820009的同源性为99%。在pH6.0、30℃、14 d内其对DON的平均转化率为94.4%。HPLC-MS分析结果表明,DON转化产物的相对分子质量为314.4,比DON的相对分子质量(296.3)增加了18.1。该菌在无机...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孟佳佳 郭文博 聂冬霞 韦阳 赵志辉 韩铮
[目的]脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON）是农产品中广泛存在的一种重要真菌毒素，给人和动物带来了较大的安全风险。目前关于DON标准物质的研究主要集中在溶液标准物质和成分分析标准物质上，未见DON有证纯度标准物质的报道。本项目拟研制DON国家级纯度标准物质，为农产品中DON的检测等工作提供物质基础。[方法]利用质量平衡法和定量核磁法两种不同原理的方法对DON纯度标准物质进行纯度定值。质量平衡法包括利用液相色谱面积归一化法进行DON主成分含量测定，卡尔费休库仑法进行纯度标准物质中水分含量的测定，顶空气相色谱-质谱法进行挥发性杂质含量的测定，电感耦合等离子质谱法进行无机离子杂质含量测定。定量核磁法采用苯甲酸为内标，选择合适的共振峰，内标法定量标准物质的纯度。并对标准物质进行了均匀性、稳定性检测和不确定度评估。[结果]质量平衡法的纯度定值结果为99.47%，定量核磁法定值结果为99.45%，最终所研制的DON纯度标准物质的纯度为99.5%，扩展不确定度为0.4%，均匀性良好，且满足12个月以上的稳定性要求。[结论]研制的DON纯度标准物质符合国家标准物质技术规范，目前已被批准为国家一级标准物质，并已被用于小麦、玉米等农产品的实际检测过程。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李华 祭芳 徐剑宏 王裕中 史建荣
【目的】建立快速、灵敏、有效的毒素检测方法,以保证麦类作物的安全生产以及谷物食品的安全性。【方法】以主要赤霉病菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)为对象,利用半琥珀酰化脱氧雪腐镰刀菌烯醇的牛血清蛋白偶联物(3-HS-DON-BSA)作免疫原,分别采用腹膜腔注射法和颈、背部多点注射法免疫Balb/c小鼠和豚鼠,获得DON的多抗血清,建立间接ELISA检测方法。【结果】多抗豚鼠血清的效价达到1∶6400,而小鼠混合血清的效价则为1∶12800。引起DON抗体最大结合50%抑制时,所需DON及其类似物3-Ac-DON和T-2毒素的量分别为63μg·ml-1、114μg·ml-1和>1000μg·ml-...
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