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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张长庆 刘婷 赵生国 雷赵民 王欣荣 孙国虎 李世歌 李耀东 吴建平
【目的】研究脂联素基因在荷斯坦公牛不同组织及月龄间的相对表达差异性,为脂联素基因作为荷斯坦公牛育肥指标的分子辅助标记提供依据。【方法】运用实时荧光定量PCR法检测了脂联素基因在15和17月龄荷斯坦公牛脂肪组织(背部脂肪、腰部脂肪、肾周脂肪、肠系膜脂肪)和肌肉组织(背最长肌和半腱肌)间的相对表达差异性。【结果】15月龄时脂联素基因在荷斯坦公牛肾周脂肪和肠系膜脂肪中的相对表达量极显著高于腰部脂肪、背部脂肪、背最长肌和半腱肌(P<0.01),17月龄时仅显著高于背最长肌和半腱肌(P<0.05);17月龄时该基因在背部脂肪中的相对表达量显著高于15月龄时(P<0.05)。【结论】脂联素基因在15和17...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
宁越 吴森 张乐 昝林森
【目的】研究IRX3（Iroquois homeobox 3）基因在秦川牛各组织中的表达规律，为通过现代分子技术手段改良秦川牛肉用性状提供理论依据。【方法】根据秦川牛IRX3的mRNA序列设计实时定量特异性引物，采用实时荧光定量PCR方法,检测IRX3基因在秦川牛不同生长发育阶段(胎儿、6月龄、24月龄)不同组织（心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大肠、小肠、肌肉（背最长肌））及在6月龄、18月龄、24月龄、60月龄秦川牛脂肪组织中的表达水平。【结果】IRX3基因在秦川牛胎牛、6月龄、24月龄3个阶段均在
[期刊] 华北农学报
[作者]
王学清 李魁英 裴翠娟 张峰 吴占军 刘小虎 马书林 张新同 王昆
为揭示牛MHC-DRB3上游调控区多态对其表达调控作用,利用PCR-SSCP和DNA序列测定技术分析并建立BoLA-DRB3*exon2和BoLA-DRB3 URR之间的连锁关系。结合不同近端调控区与转录因子结合模式预测结果,选择3种不同上游调控序列的连锁组合,应用实时定量RT-PCR技术对牛MHC-DRB3基因mRNA相对表达量进行了验证分析。结果表明,上游调控区基因型为H17H17的BoLA-DRB3基因mRNA相对表达量显著高于(P<0.01)基因型H1H1及H5H6。初步证明上游调控区中的多态会引起结构基因表达量的变化。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王桂华 唐彦君 李辉
为了探讨瘦蛋白受体(OBR)基因在肉鸡不同组织中的表达差异,采用半定量RT-PCR和Northern blot方法检测OBR基因在不同发育阶段的肉鸡高脂系公鸡多种组织中的表达情况。结果表明:OBR基因在所检测的8种组织中均有表达,且表达量存在差异,其中大脑、心脏中的表达量高,并显著高于其他组织(p<0.05),腿肌和胸肌中的表达量较低。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
蒋向 戴雄泽 李育强 黄丽华 戴倩 张学文
5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸合成酶(EPSPs)是植物芳香族氨基酸合成途径的重要酶,是优良除草剂草甘膦作用的靶酶.根据已克隆的抗草甘膦植物薤白EPSPs基因cDNA序列的3′端非保守区域设计引物,采用RT-PCR半定量技术,研究了该基因在薤白不同组织中的表达情况.利用18S rRNA为表达的内参基因,建立一个针对EPSPs特异、稳定的RT-PCR半定量检测体系.对EPSPs基因表达的检测表明,薤白幼叶中基因表达水平最高,总表达水平高低依次为:幼叶,根,茎,壮叶.相对18S rRNA表达量为:幼叶0.631,根0.246,茎0.218,壮叶0.120.
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
毛秀敏 张雪梅 杨帆 贺三刚 刘明军
【目的】克隆和表达新疆荷斯坦牛中性粒细胞防御素5(BNBD5)基因,对BNBD5蛋白进行纯化并分析其抗菌活性。【方法】利用RT-PCR方法扩增新疆荷斯坦奶牛BNBD5的cDNA序列,将BNBD5 cDNA克隆到原核表达载体pGEX-4T-2,测序分析后转化大肠埃希菌BL21(DE3)。经IPTG诱导后,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析;利用GST亲和柱纯化BNBD5蛋白,并进行体外抑菌试验。【结果】通过PCR扩增获得了218bp的牛BNBD5全长cDNA序列,经IPTG诱导,获得了约33 ku的牛BNBD5蛋白。牛BNBD5蛋白在15~25℃培养时的可溶性较...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
裴杰 刘小林 杜卫华 林秀坤
利用PCR技术从雄性中国荷斯坦牛的基因组DNA中克隆了Y染色体性别决定基因(Sex-deter-m in ing R eg ion on the Y Chrom osom e,SRY)的编码区全长序列,构建了表达载体pET-28a/SRY,并将其在大肠杆菌(E.coli)中进行了诱导表达,对表达产物进行了检测。结果表明,SRY基因编码区长687 bp,编码229个氨基酸;表达载体pET-28a/SRY构建成功;表达产物中含有相对分子质量为33 ku的SRY蛋白。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘安芳 朱庆 刘益平 张增荣
【目的】了解鸡钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin,CAST)基因的组织特异性表达情况和在不同鸡品种间的表达差异。【方法】利用半定量RT-PCR方法研究CAST基因在鸡不同组织和品种中的表达差异。【结果】CAST基因表达于鸡的各个不同组织中,在胸肌中的表达量最多并显著高于其它组织(P<0.05);不同鸡品种胸肌组织中CAST基因表达量差异显著(P<0.05),艾维茵肉鸡胸肌组织中CAST基因的表达量显著高于其它几个品种(P0.05),但显著高于蛋鸡(P<0.05)。【结论】结果表明钙蛋白酶抑制蛋白是一种在鸡体内普遍存在的蛋白,CAST基因在鸡不同...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
温泽星 余四九 翟羽佳 杨琨 刘鹏刚 何俊峰 崔燕
【目的】探索热休克蛋白70-2(heat shock 70kD protein-2,HSPA2)在牦牛不同组织器官中的表达差异。【方法】选取3头1岁龄的健康青海高原雄性牦牛为研究对象,在正常生理条件下,于2013年9月中旬采集不同组织器官(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑和睾丸)样本。(1)从牦牛不同组织器官中提取RNA,将RNA反转录成第一链cDNA,参照牦牛HSPA2和β-actin基因序列(登录号为KC790105.1和DQ838049.1)设计特异性引物,首先采用RT-PCR来验证实时荧光定量PCR(RT-qPCR)是否能应用于牦牛不同组织器官中HSPA2表达差异的测定;然后采用RT-...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
朱占伟 彭彦 赵燕 胡清云 张学文
为了解拟南芥和荠菜形态差异与其生长素极性分布的关系,采用荧光定量PCR,以–actin为内参基因,对拟南芥和荠菜的根、茎、叶、花等组织中与生长素极性运输相关的PIN1、PIN3、PIN7基因的表达进行定量分析。结果表明:拟南芥各组织中PIN1的表达量都高于荠菜各组织中PIN1的表达量,拟南芥的茎和花中PIN1的表达量分别比荠菜茎和花中PIN1表达量高3倍和10倍;拟南芥各组织中PIN7的表达量也高于荠菜各组织的PIN7表达量,其叶片中PIN7的表达量比荠菜叶片中PIN7的表达量高10倍以上;荠菜各组织中PIN3的表达都高于拟南芥相应组织中PIN3的表达量,在茎、叶中的表达分别高3倍和10倍以上...
关键词：
拟南芥 荠菜 PIN基因 定量分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
王文涛 何鑫淼 张冬杰 彭福刚 吴赛辉 刘娣
采用RT-PCR技术,对90日龄大白猪心肌、肝脏、胃、肾脏、肺、大肠、小肠、背肌和腿肌组织中表达情况进行研究,得到Cst B基因在肾脏、肺、大肠和小肠中有较高的表达,而在心肌、背肌和腿肌等肌肉组织中表达量相对较低。
关键词：
猪 RT-PCR Cst B
[期刊] 中国农业科学
[作者]
施力光 荀文娟 岳文斌 张春香 王茜 武晓英 任有蛇 石磊 杨茹洁 雷福林
【目的】研究磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)在山羊各种组织中的表达特点及在性腺中的定位情况。【方法】提取各种组织总RNA,应用实时荧光定量PCR方法检测各种组织PHGPx mRNA表达规律,利用免疫组化技术对睾丸和附睾PHGPx进行定位分析。【结果】PHGPx mRNA在各种组织表达水平由高到低依次为:睾丸>>心>脑>附睾>肾>肝>肺>脾>背最长肌,在性腺和附睾中:睾丸>>附睾尾>附睾头>附睾体;免疫组化结果显示睾丸间质组织、生精细胞均有阳性产物,附睾头部平滑肌纤维表达弱阳性,附睾尾部附睾管中的单层柱状上皮表达呈强阳性。【结论】PHGPx在不同组织广泛表达,发挥重要的生物学功能,免疫组化...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
刘汝祥 侯明海 李彦芹 王玲玲 宋杰 仲跻峰 李文立
取20头荷斯坦种公牛,随机分为4组,单因子饲养试验设计,分别饲喂不同维生素A水平的日粮,维生素A的添加水平分别为0、10 000、20 000、40 000 IU/kg(按日粮干物质计),试验期为8个月。结果表明:不同维生素A水平对荷斯坦种公牛血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC)活性影响极显著(P<0.01),对血清一氧化氮(NO)差异显著(P0.05)。综合分析不同维生素A水平下试验牛抗氧化指标的变化表明:维生素A的适宜添加量为20 000 IU/kg日粮干...
关键词：
维生素A 荷斯坦 种公牛 抗氧化指标
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李瑞瑞 虎红红 冯雪 杨文飞 马云
【目的】旨在探究前期GWAS筛选出的与荷斯坦奶牛产奶相关的二肽基肽酶样6（Dipeptidyl Peptidase-like 6，DPP6）和E3泛素连接酶基因（Parkin gene，PRKN）的生物学性质及表达特性，为后续验证DPP6和PRKN基因对于荷斯坦奶牛相关调控机制研究提供基础。【方法】利用ProtParam、Phyre2、NetPhos 3.1等软件分析DPP6和PRKN的理化性质与蛋白结构，并采用实时荧光定量PCR（Real-Time quantitative PCR，RT-qPCR）检测DPP6和PRKN基因在荷斯坦奶牛的心脏、脾脏、肝脏、肺脏、肾脏、乳腺、子宫、卵巢、瘤胃、黄体10个组织中的表达规律；通过脂多糖（lipopolysaccharide， LPS）诱导乳腺上皮细胞（bMECs），初步检测DPP6和PRKN基因在炎症反应中的表达模式。【结果】DPP6蛋白编码863个氨基酸，与山羊的亲缘关系最近；PRKN蛋白编码488个氨基酸，其中甘氨酸含量最多，其序列与马鹿的相似性最高，保守型较强。本研究推测2个物种的DPP6和PRKN蛋白可能具有相似的生物学功能，并且2个蛋白均属于不稳定亲水性蛋白。DPP6和PRKN基因在组织中普遍表达。其中，DPP6基因在乳腺、肺脏、脾脏以及肾脏组织中的表达量显著高于其他组织，而PRKN基因在乳腺、肾脏、瘤胃组织中显著高表达。此外，相比于空白对照组，DPP6与PRKN基因均能够在LPS诱导的bMECs中极显著表达（DPP6基因极显著下调，PRKN基因极显著上调）。【结论】本研究结果说明DPP6与PRKN基因可能在调控荷斯坦奶牛乳房炎症过程中发挥潜在作用，为后期荷斯坦奶牛DPP6与PRKN两个基因在奶牛bMECs炎症反应相关调控机制研究提供理论依据。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
武建明 王长法 何洪彬 胡桂学 杨宏军 杨少华 高运东 仲跻峰
【目的】实现荷斯坦牛中性粒细胞防御素BNBD12基因在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组BNBD12的抗菌活性。【方法】RT-PCR扩增荷斯坦牛中性粒细胞BNBD12基因,序列分析后人工合成了适于在大肠杆菌中表达的BNBD12成熟肽,构建原核表达载体pET32a(+)/BNBD12,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。通过琼脂扩散法分别确定重组蛋白对牛源乳腺炎主要致病菌革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的抗菌效果,应用扫描电镜观察重组蛋白的杀菌效应。【结果】测序结果表明扩增片段长度为180bp,可编码含60个氨基酸的成熟蛋白。SDS-PAGE和Western blotting分析显示人工合成的BN...
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