Leptin is a new obese gene (ob) product in animal, which related with feed intake, energy balance, lipid metabolism, reproduction and so on. The advances were summarized on structure, secretion and function of leptin. The effects and regulation of energy nutrient on the expression level of leptin we...

用实时荧光定量PCR方法研究了蓝塘猪和长白猪1、27、90、150和180日龄阶段脂肪组织中leptin基因mRNA和下丘脑中leptin受体基因mRNA的变化,并对2个品种不同生长阶段血液中leptin含量的变化规律进行了探讨。结果表明:(1)蓝塘猪180日龄时皮下脂肪中leptin基因表达量显著高于其它各阶段,而与长白猪相比,蓝塘猪除1日龄低于长白猪外,其它各个阶段均高于长白猪,180日龄两者差异极显著;长白猪各阶段间差异不显著;(2)蓝塘猪180日龄时下丘脑中leptin受体基因的表达量显著高于其它各阶段,长白猪180日龄时最高,且显著高于1日龄和27日龄,蓝塘猪与长白猪1日龄时差异显著...

通过对不同填饲期黑羽番鸭产肝性能测定、肌肉和肝脏营养成分分析、肝脏组织学观察,以及脂调控基因的表达检测,探讨黑羽番鸭肝脂肪代谢规律。选取140只体质量相近的12周龄健康黑羽番鸭(公母各半)作为试验动物,其中40只作为对照。填饲期为16 d,采用单人机械填饲方法。填饲饲粮选用煮至6~7成熟的陈年玉米,沥干后趁热拌入12 g·kg-1油脂、7.5 g·kg-1食盐和1 g·kg-1复合维生素,对照组正常饲喂。结果表明:黑羽番鸭填饲16 d后,公番鸭肝质量平均为308.91 g,母番鸭肝质量平均为135.86 g,差异极显著(P<0.01);填饲组肝脏的脂肪含量为51.83%,对照组为8.36%,填...

为探讨Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ在鱼类糖类和脂质代谢中的作用，本实验采用ＲＡＣＥ方法获得了草鱼Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ的全长Ｃ ｄＮＡ序列（登录号：Ｋｐ７３３８４６），利用生物信息学技术对该基因及其所编码蛋白的结构特征进行了分析；采用实时定量ｐＣＲ技术，检测了Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ在１９个不同组织中的表达特性以及高糖（４５％）、高脂（８％）和高糖高脂饲喂对草鱼肝脏中该基因表达的影响。结果显示，草鱼Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ Ｃ ｄＮＡ全长２１８６ Ｂｐ，其中开放读码框为１１２２ Ｂｐ，编码３７３个氨基酸；跨膜结构分析表明草鱼Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ为典型的７次跨膜蛋白；同源性分析结果显示，草鱼Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ与．．．

瘦素(leptin)是一种重要的激素，参与调节动物的摄食、繁殖和能量消耗，其可以通过抑制食欲和促进能量代谢的方式维持机体能量稳态。大多数鱼类具有双重瘦素基因。在本研究中，利用PCR技术克隆了大口黑鲈leptin A基因的编码区，其开放阅读框(ORF)为486 bp，编码161个氨基酸蛋白。通过与其他物种进行同源性比对，发现鲈形目的leptin基因的保守型较高，一致性高达91.46%，在大口黑鲈leptin A中几乎不存在基因特异性突变位点，而且大口黑鲈 leptin A氨基酸序列与鳜同源性最高(92.59%)，与花鲈(89.51%)、布氏鲳鲹(87.04%)、斜带石斑鱼(83.87%)的同源性次之。组织分布结果显示，leptin A基因在肝脏中的表达量最高，在心、头肾、脑、中肾、肠、脾、鳃、肌肉和性腺中的表达量均较低。此外，对大口黑鲈进行不同程度急性低氧胁迫[重度低氧(1.2±0.2)mg/L和中度低氧(3.5±0.2)mg/L]，发现低氧初期时严重低氧组中度低氧组的leptin A的表达量都升高，显著高于对照组 Leptin A 的表达。这表明急性低氧能够诱导大口黑鲈leptin A在肝脏中的表达。综上所述，大口黑鲈leptin A基因与鳜leptin A基因的同源性最高，leptin A主要在大口黑鲈肝脏中显著表达，急性低氧胁迫能显著诱导leptin A的表达。

应用荧光定量ＰＣＲ方法检测团头鲂ｌｅＰｔｉｎ及其相关基因—瘦素受体（ｌｅＰｔｉｎ ＲｅＣｅＰｔｏＲ，ｌｅＰｔｉｎ－Ｒ）和瘦素受体重叠转录产物类似物１基因（ｌｅＰｔｉｎ ＲｅＣｅＰｔｏＲ ｏｖｅＲｌａＰＰｉｎｇ ｔＲａｎｓＣＲｉＰｔ ｌｉｋｅ－１，ｌｅＰＲｏｔｌ－１）在胚胎发育早期及成鱼各组织的表达量。结果显示，３个基因在团头鲂成鱼所有检测组织中均有所表达，表明３个基因在团头鲂机体中具有多重生理功能。早期发育过程中的表达量结果显示ｌｅＰｔｉｎ－Ｒ和ｌｅＰＲｏｔｌ－１基因在胚胎阶段的表达水平变化趋势一致，而ｌｅＰｔｉｎ在破膜后５ｄ前一直处于较低并呈波动性变化；出膜后１２ｄ时ｌｅＰｔｉｎ－Ｒ和ｌｅＰ．．．

【目的】Ｓａｌｌ４是一种锌指结构转录因子，对建立和维持动物多能干细胞具有重要意义。为探索猪Ｓａｌｌ４的表达和转录调控机制，克隆了猪Ｓａｌｌ４启动子，对其进行了功能验证和核心调控区的筛选。【方法】从猪基因组中克隆获得２．１ ｋｂ Ｓａｌｌ４启动子片段，并构建相应的报告载体；将报告载体ｐ Ｅ２．１转染不同种类的细胞，进行细胞特异性表达检测；采用实时荧光定量ｐＣＲ方法，检测Ｓａｌｌ４在猪不同组织和细胞中的表达变化；通过生物信息学方法，分析Ｓａｌｌ４启动子上各种关键顺式作用元件和潜在的转录结合位点；将多能转录因子ＯＣｔ４、ＳＯｘ２、ｋｌｆ４、ＭｙＣ、ＥＳＲＲａ／ｂ和ＳＭａｄ与Ｓａｌｌ４启动子共转染２９．．．

鸡生长激素基因表达及分泌调控的研究进展根据中德农业科技合作的协议，笔者于１９９４年３月赴德国联邦农业科学院Ｃｅｄｅ／Ｊ’动物研究所Ｄｒ．Ｒ．Ｇｒｏｓｓｍａｎｎ的实验室从事合作科研。研究课题为：鸡生长激素基因表达及分泌的调控。实验采用两种不同品种的鸡—...

【目的】分析鸡miR-181a的转录起始位点,并分析其在1日龄和成年鸡不同组织中的表达谱,以期为研究miR-181a的功能奠定基础。【方法】采用qPCR技术构建miR-181a在1日龄和成年鸡肝脏、脾脏、肺、小肠、大脑、小脑、下丘脑、脑干、胸腺、心脏和肾脏组织中的表达谱。用version(1.83)分析miR-181a的保守性,并采用ENCODE数据库进行miR-181a转录起始位点和启动子区域的分析。【结果】①采用qPCR检测miR-181a在鸡下丘脑中的表达量和高通量测序的结果一致,1日龄下丘脑中的表达量显著低于成年鸡的表达量(P<0.05);②miR-181a在11个组织中均有表达,且在...

以肉食性鱼类翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)为研究对象,对其肽YY(peptide YY,PYY)基因进行鉴定和分析,并通过中枢注射人工合成的鳜PYY多肽,研究PYY对翘嘴鳜摄食量的影响。氨基酸序列多重比对结果发现,sc-PYY与各个物种的氨基酸序列高度保守,鱼类中与狼鲈(Dicentrarchus labrax)、红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)一致性较高;实时荧光定量PCR检测sc-PYY mRNA表达的组织分布,结果显示,sc-PYY mRNA在脑中表达量最高,在肠道、肌肉、眼睛中亦有较高的表达;翘嘴鳜中枢注射PYY后,摄食量在4 h相比于对照组(PBS)显著性下降。这表明PYY可能在减少鳜的食物摄入量中发挥着重要的作用。

【目的】MYB转录因子是植物中一类重要的转录因子,在调控次生壁纤维素和木质素等的合成中具有重要作用。为了挖掘参与光皮桦木材形成的MYB基因,本研究通过克隆MYB基因,分析其序列特征、表达模式和下游调控基因,以期为后续功能深入解析和分子辅助育种提供理论依据和基因资源。【方法】利用RACE技术分离到4个光皮桦BlMYB基因的cDNA片段。利用生物信息学工具对这些基因的序列特征进行分析,利用实时荧光定量PCR分析BlMYB及预测的下游基因在不同器官(雌花序、雄花序、嫩芽、嫩叶、成熟叶、茎)、组织(内外层木质部、韧皮部、形成层)中,以及应拉木诱导早期阶段的表达差异。以2个木质部特异表达的BlMYB为指导基因,采用相互排名法和Cytoscape软件构建共表达网;使用Plant CARE在线查询共表达的下游基因启动子区元件。【结果】分离到4个BlMYB的全长cDNA序列,分别命名为BlMYB1、BlMYB2、BlMYB3和BlMYB4,它们编码的蛋白分别由395、252、258、320个氨基酸残基组成,且在靠近N端都有R2R3结构域。4个BlMYB氨基酸序列间一致性27%～37%,而与它们同源的拟南芥AtMYB氨基酸序列间的一致性为39%～55%。4个BlMYB基因都含有1～2个内含子。进化树构建分析发现4个BlMYB分属于4个不同的分支,其中BlMYB2、BlMYB4分别与细胞次生壁形成相关的MYB聚在一起。BlMYB1、BlMYB3在成熟叶片中优势表达,且随叶片成熟表达水平呈递增趋势,可能与叶片的发育有关。BlMYB2在木质化茎段的木质部强烈表达,而在叶片、韧皮部等组织中的表达相对较弱;在应拉木诱导形成的早期阶段,应拉木中BlMYB2呈下调表达,尤其是拉弯处理48 h和7天时的相应数值均显著低于直立木。BlMYB4在茎的木质部、成熟雄花序中优势表达,在根、嫩叶中的表达水平较低;同时,在应拉木诱导形成早期阶段,BlMYB4在应拉木和对应木中分别呈现上调和下调表达。另外,基于共表达分析和特异性AC元件筛选,推测FRK、COMT、HCT、CesA3、CesA4、4CL、CCoAOMT 7个纤维素、木质素合成酶基因可能受BlMYB2和BlMYB4所调控。【结论】获得的4个光皮桦BlMYB基因属于R2R3-MYB家族,具不同的基因结构。4个基因呈现不同的表达模式暗示它们可能参与调控不同代谢途径。结合光皮桦应拉木特征和共表达分析结果,可初步推测BlMYB2和BlMYB4可能参与光皮桦木材形成过程的调控。

类胰岛素生长因子（insulin-like growth factor, IGF）信号通路在机体的发育、繁殖以及生长等过程中起着重要的调控作用。类胰岛素生长因子酸不稳定亚基（IGF acid-labile subunit, IGFALS）是IGF系统中的重要一员，可通过延长IGF的半衰期参与IGF信号通路的调控。本研究首次在缢蛏转录组数据库中筛选鉴定了两个IGFALS基因，包含完整的开放阅读框，分别命名为IGFALSa和IGFALSb。IGFALSa基因的cDNA序列为4809bp，编码996个氨基酸；IGFALSb基因的cDNA序列为1925bp，编码546个氨基酸。在缢蛏不同发育期的表达分析中发现，IGFALSa和IGFALSb在幼虫的前期发育阶段均只有少量表达，而随着幼虫的发育，其表达量逐渐上升；组织表达分析表明，IGFALSa在外套膜和性腺中高表达，IGFALSb则在水管中高表达。利用不同浓度胰岛素短期刺激缢蛏稚贝，当浓度为10mg/L时，两个IGFALS基因表达量均显著上调，其下游基因IRS、PDK1、MPKP1的表达量也显著上调；进一步利用10mg/L胰岛素长期喂养缢蛏稚贝，结果显示其壳长和壳宽的日生长率均显著提升。

【目的】通过克隆细胞分裂素脱氢酶/氧化酶基因VlCKX4及其启动子，进行表达特性分析和启动子活性分析并进行转录因子预测，为深入解析VlCKX4介导细胞分裂素信号途径调控葡萄坐果的分子机制提供依据。【方法】使用生物信息学方法分析‘巨峰’葡萄(Vitis vinifera×Vitis labrusca)细胞分裂素氧化酶/脱氢酶4(VlCKX4)的序列特征；利用PCR技术克隆该基因以及它的启动子，使用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析VlCKX4的表达特性，GUS活性试验用于分析其启动子活性；利用PlantTFDB、CisBP等转录调控数据库对VlCKX4的转录调控关系进行预测分析，输出结果使用Gephi软件进行可视化。【结果】VlCKX4全长1 582 bp,其中包含1 566 bp的开放阅读框，编码522个氨基酸，具有家族特征的FAD结构域和细胞分裂素结合（ck-binding）结构域。qRT-PCR结果表明VlCKX4在花序中高表达，其次是叶片，在卷须中表达量最低；细胞分裂素CPPU处理后VlCKX4表达量先下降后上升，细胞分裂素抑制剂洛伐他汀(Lov)处理后VlCKX4表达量先上升后下降。顺式元件分析表明VlCKX4启动子中含有吲哚乙酸、茉莉酸甲酯等响应元件；GUS化学组织染色试验表明，VlCKX4响应这些激素的处理。VlCKX4转录调控预测分析结果显示，MYB、DOF和WRKY类转录因子对其进行转录调控，结合转录组数据和共表达关系确定WRKY20、DOF1.5和MYB59为关键候选转录因子。【结论】葡萄VlCKX4受到细胞分裂素CPPU的诱导，VlCKX4启动子受到WRKY20、DOF1.5和MYB59转录因子的调控，参与促进葡萄坐果过程。

蜕皮激素和保幼激素协调调控节肢动物生长发育，E93是昆虫中蜕皮激素的初级响应基因，但在甲壳动物中的功能和调控尚未可知。为研究E93在拟穴青蟹中的功能和调控特征，本研究获得了拟穴青蟹（Scylla paramamosain）的E93基因，命名为Sp-E93，并对其基本生物信息学、系统进化、组织分布以及激素调控的模式进行了分析。结果发现，Sp-E93的mRNA长度为3 756 bp，包含2 982 bp开放阅读框（ORF），编码993个氨基酸，预测蛋白质的相对分子质量为106.34 kDa，含有两个保守的helix-turn-helix（HTH）结构域，而HTH结构域外的其他区域序列在不同物种中一致度较低。系统进化分析发现，该基因的进化与物种进化基本一致。Sp-E93在青蟹成体的Y器官和大颚器中表达量最高，且在雄蟹中的表达显著高于雌蟹（P<0.05）。此外，MF和甲氧普林能显著上调雌蟹肝胰腺中E93基因的表达，但对卵巢中E93的表达没有调控作用；20E可以调控肝胰腺而非卵巢中E93基因的表达。这些研究表明青蟹的E93基因仍在拟穴青蟹的激素信号中发挥作用，但调控模式可能相比昆虫发生了一定进化，本研究为进一步研究甲壳动物E93的功能奠定了基础。

ＴｈＶｈＡｃ１基因能响应干旱、盐、重金属等胁迫诱导，该基因能有效提高转ＴｈＶｈＡｃ１基因酵母的多种抗逆能力。为进一步研究ＴｈＶｈＡｃ１基因的抗逆调控机理，本研究利用酵母单杂交技术钓取ＴｈＶｈＡｃ１可能的上游调控因子，并利用基因枪瞬时共转化技术进行初步验证。酵母单杂交结果显示，ＴｈＭＹＢ３基因能识别ＴｈＶｈＡｃ１基因上游ＭＹＢ顺式作用元件和含有ＭＹＢ元件的启动子片段。ＴｈＤｏｆ２基因能识别ＴｈＶｈＡｃ１基因上游Ｄｏｆ顺式作用元件和含有Ｄｏｆ元件的启动子片段。但ＴｈＭＹＢ３和ＴｈＤｏｆ２均不能识别突变后的元件及含对应突变元件的启动子片段。将ＴｈＭＹＢ３和ＴｈＤｏｆ２分别构建成效应载体，各元件、突变．．．