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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘根桃 陈伟华 郑元林 陈杰 韩正康
胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）分别与两种载体蛋白——牛血清白蛋白（ＢＳＡ）和卵清蛋白（ＯＡ）用戊二醛连接，经紫外分光光度仪扫描确定偶联成功。以ＩＧＦ－１－ＢＳＡ作为免疫原，皮内多点注射免疫青紫兰兔，制备ＩＧＦ－１抗体，经ＥＬＩＳＡ法测定，血清效价为１∶２０００，放免工作浓度为１∶１５０００。采用氯胺－Ｔ标记ＩＧＦ－１，用酸醇抽提法处理样品，去除ＩＧＦ－１结合蛋白。所建立的ＩＧＦ－１放免标准曲线，其最小检测量为０．０６ｎｇ／ｍＬ，批内误差为４．８％，批间误差为８．２％（ｎ＝１０）。
关键词：
胰岛素样生长因子-1 放射免疫测定法
[期刊] 水产学报
[作者]
胡红霞 刘晓春 朱华 张勇
用蛋白质快速液相层析(FPLC)分离俄罗斯鲟鱼脑垂体促性腺激素(GtH),共获得GtH纯化蛋白4.6mg。用SDS-PAGE变性胶电泳图谱初步分析纯化蛋白,用反相高效液相色谱(rpHPLC)分离出两个亚基,质谱测定α亚基分子量:15 603ku,两个β亚基分子量分别为14 338ku和14 694ku。制备了鲟鱼GtH的兔抗血清多克隆抗体,采用氯胺T法用125I标记抗原,用羊抗兔γ球蛋白做二抗,建立鲟鱼GtH的放射免疫测定方法。测定了催产前后不同时间史氏鲟血清中GtH含量的变化,统计分析表明成功排卵的雌鱼比未排卵和阴性对照组在催产后12h和16h GtH分泌量升高显著,最高达到234ng.mL...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
周孜 王锋 胁田正彰
以12 5Ⅰ标记的、人工合成的人胰岛素样生长因子Ⅰ (IGF Ⅰ )为底物 ,以鸡肾脏的提取液为粗酶液 ,研究在不同时间、粗酶液浓度、温度及pH值等条件下的酶促分解反应情况。结果显示 :①IGF Ⅰ分解酶反应时间以 30min为宜 ;②粗酶液的含量宜在 1 0 8μg·μL-1以下 ;③酶活性在 4 5℃时最高 ;④此酶在 5 0℃以下稳定 ,当温度升至 5 5℃时其活性急剧下降 ,升至 6 0℃时将降至最大活性的 2 0 %左右 ;⑤此酶最适pH值为 6 5～ 7 0。
关键词：
胰岛素样生长因子Ι 分解酶 酶特性
[期刊] 水产学报
[作者]
翟万营 张俊玲 施志仪 李巍
利用RACE-PCR技术,从牙鲆肝脏组织总RNA中克隆得到胰岛素样生长因子结合蛋白-1(insulin-like growth factor binding protein 1,IGFBP-1)基因的全长cDNA序列,该cDNA全长为1 070 bp,开放阅读框为729 bp,编码242个氨基酸。通过系统进化树分析,牙鲆IGFBP-1与鱼类IGFBP-1基因紧密聚为一支;通过同源性比对,牙鲆IGFBP-1基因的核苷酸序列与大菱鲆同源性最高,为95%,而其推导的氨基酸序列与其它鱼类如大菱鲆、五条、黄金鲈、红点鲑、鲤和斑马鱼的同源性分别为89%、89%、84%、79%、67%和67%。半定量RT-...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
陶洋 邹曙明
克隆了草鱼(Ctenopharyngodon idellus)胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)基因的全长cDNA,并对草鱼不同时期的胚胎和成鱼不同组织进行了RT-PCR分析,以探索草鱼IGFBP-1基因的生物学功能。结果显示:(1)草鱼IGFBP-1基因cDNA全长为1 135bp,包含一个789 bp阅读框,编码262个氨基酸残基;草鱼与鲤、斑马鱼、沟鲶、大鳞大麻哈鱼、虹鳟、五条、小鼠和人的IGFBP-1氨基酸序列相似度分别为94%、93%、69%、60%、58%、56%、40%和38%;草鱼IGFBP-1蛋白的N端和C端序列负责与胰岛素样生长因子(IGF)结合,其保守性较高。...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
郑元林 韩正康 陈杰 陈伟华 艾晓杰 刘根桃
利用大鼠离体肝脏灌流技术以及大鼠原代培养的肝细胞研究了大豆黄酮 (Da)对SD大鼠肝脏氮代谢和IGF 1生成的影响。结果表明 ,Da可使大鼠离体肝脏灌流液中尿素氮浓度下降 ,并有一定的剂量效应和时间效应。在给药后灌流的1,2 ,3和 4h内 ,与对照组相比 ,1× 10 -4mol·L-1的Da使大鼠离体灌流的肝脏产生的尿素氮分别下降了 13 6 4 % ,2 3 18% ,34 0 2 % (P
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
梁宏伟 李忠 罗相忠 邹桂伟
为研究黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)胰岛素样生长因子结合蛋白1基因(IGFBP1)的特征,阐明IGFBP1基因在不同性别黄颡鱼组织中的表达特征和IGFBP1蛋白在雌、雄黄颡鱼肌肉中的表达差异,克隆IGFBP1基因的c DNA全长,并进行实时荧光定量PCR检测和Western Blot分析。结果表明:黄颡鱼IGFBP1基因c DNA全长为1 259 bp,其开放阅读框长度为714 bp,编码237个氨基酸,3'端和5'端非翻译区分别为407 bp和138 bp;黄颡鱼IGFBP1基
[期刊] 中国水产科学
[作者]
周春雪 蒋霞云 陈杰 邹曙明
本研究采用cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆了草鱼(Ctenopharyngodon idellus)IGF-IR基因全长cDNA序列,并对该基因在草鱼不同时期胚胎和成鱼不同组织中的表达进行了分析。序列分析表明,草鱼IGF-IR基因cDNA序列全长5 741 bp,包括5′端非翻译区822 bp,3′端非翻译区581 bp,开放阅读框4 338 bp,共编码1 445个氨基酸。序列比对结果显示,草鱼IGF-IR可能属于a型,该基因编码的氨基酸序列与鲤(Cyprinus carpio)IGF-IRa、斑马鱼(Danio rerio)IGF-IRa和人类(Homo sapiens)IGF-IR...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘军 陈爱敬 黄峰 赵胜军 胡兵 侯永清
利用One-Step RT-PCR技术,从鲫(Carassius auratus)肝胰脏组织中克隆了胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ),并进行了序列分析。结果表明,鲫IGF-ⅠcDNA由486个核苷酸组成,编码包括信号肽、成熟肽(B、C、A、D四个域)和E域的161个氨基酸。核苷酸同源性分析揭示,鲫IGF-ⅠcDNA序列与金鱼的同源性最高,为99.18%;与鲮、三角鲂、团头鲂的同源性次之,分别为94.44%、94.65%、94.44%;与鲤、草鱼的同源性相对较低,为86.03%和85.29%。E区域的分析结果表明,鲫IGF-Ⅰ序列为Ea-2亚型。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
吴秀梅 徐黎明 赵景壮 刘淼 曹永生 卢彤岩 尹家胜
在鱼类胚胎发育过程中,胰岛素样生长因子-II(insulin-like growth factors-II,IGF-II)起着关键的作用。本研究根据Gen Bank收录的鲑鳟鱼IGF-II基因序列设计引物,以哲罗鱼(Hucho taimen)肝RNA提取物为模板,利用RT-PCR方法扩增出哲罗鱼IGF-II基因开放阅读框。将目的基因IGF-II与原核表达载体p SUMO连接构建出重组表达载体p SUMO-IGF。将该重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中进行目的蛋白的诱导表达。SDS-PAGE电泳分析显示,约在40 k D处含有清晰的条带,与预期结果相符;目的蛋白以包涵体形式存在。对包涵体进行...
[期刊] 水产学报
[作者]
王晓玉 徐黎明 刘淼 赵景壮 卢彤岩 曹永生 尹家胜
为进一步了解哲罗鲑ＩＧＦ－Ｉ，实验采用逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，从哲罗鲑肝脏的总ＲＮＡ中扩增出胰岛素样生长因子－Ｉ（ＩＧＦ－Ｉ）的Ｃ ＤＮＡ开放阅读框（ｏＰｅＮ ＲｅＡＤＩＮＧ ＦＲＡｍｅ，ｏＲＦ）序列。利用原核表达载体Ｐ Ｓ构建重组表达质粒（ＩＧＦ－Ｉ／Ｐ Ｓ），并将其转化到宿主大肠杆菌ＲｏＳｅＴＴＡ后经ＩＰＴＧ诱导获得重组哲罗鲑ＩＧＦ－Ｉ蛋白。经ＳＤＳ－ＰＡＧｅ电泳检测，在３５～５０ ｋｕ有条带与预期相符，且重组蛋白以包涵体的形式存在。包涵体经变性／复性实验后，获得纯化的ＩＧＦ－Ｉ融合蛋白。ｅＬＩＳＡ鉴定结果显示，目的蛋白能特异性识别抗鱼类ＩＧＦ－Ｉ抗体，表明获得了具有免疫．．．
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王锐 赵跃 张永云 李卫真 王淑燕 霍海龙 刘丽仙 苗永旺 霍金龙
为了克隆猪胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-I)以及检测该因子在各组织中的转录水平,分别提取猪13种组织RNA并反转录为cDNA,利用RT-PCR方法扩增IGF-I编码区全长序列,将纯化的片段与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH 5α,筛选阳性克隆并测定其序列,利用生物信息学方法分析其序列特征,并与牛等5个物种构建系统进化树。同时采用半定量RT-PCR方法分析IGF-I在猪13种组织中的表达情况。结果显示,猪IGF-I编码区全长462 bp(GenBank登录号:JX827417),编码153个氨基酸。氨基酸二级结构预测表明无规卷曲占的比例最大,为57.52%。氨基酸序列同源性分析表明,与牛...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵瑞霞 李邦佑 周木清 夏瑜 梁佐钊 杨中祥 吴新诚 龚炎长 彭秀丽 李文明 熊家军 余勇 张淑君
以广东温氏集团培育的黄羽肉鸡种蛋胚胎为研究对象,并以与人和小鼠胚胎发育相关的胰岛素样生长因子2受体(insulin-like growth factor type II receptor,IGF2R)基因为候选基因,进行了SNP位点的筛选和多态性的检测,探讨了IGF2R的变异对胚胎死亡的影响。在IGF2R第34外显子中发现2个SNP位点,对具有AlwNⅠ酶切位点的SNP位点进行了PCR-RFLP检测,分析了胚胎IGF2R的SNP位点PCR-RFLPs基因型在死亡和正常发育胚胎中分布特征。经2χ检验,鸡基因IGF2R第34外显子AlwNⅠ-RFLP基因型在死亡和正常发育胚胎中存在显著差异,在死亡...
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