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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
万永杰 肖慎华 邓明田 张国敏 贾若欣 张艳丽 王锋 黄明睿
［目的］研究不同的胚龄、移植季节以及胚胎数量对转人乳铁蛋白基因（ｈ ＬＦ）体细胞克隆山羊生产效率的影响。［方法］用奶山羊的转ｈ ＬＦ基因成纤维细胞为供体细胞生产克隆胚胎，并以不同的胚龄、胚胎数量，在不同的季节移植给同期的受体山羊。［结果］移植１细胞期和２～８细胞期胚胎受体羊的妊娠率（分别是１７．９５％和２８．５７％）、产羔率（分别是１２．８２％和１４．２９％）显著高于移植桑椹胚、囊胚的受体羊（３．７０％和０，Ｐ
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王二先 徐旭俊 苗晋锋 陈建泉 成国祥 杨倩
选用30只100 g左右清洁级SD大鼠,雌雄各半,随机均分为3组,转基因乳组每天2次灌胃转人乳铁蛋白基因(hLF)波尔山羊乳1 mL(蛋白含量0.93 g.mL-1),普通乳组灌胃未经任何处理的普通波尔山羊乳1 mL(蛋白浓度0.93 g.mL-1),生理盐水组灌胃等量灭菌生理盐水;自由采食、饮水,连续15 d;颈部静脉采血致死,收集血清。结果显示:灌胃转hLF基因山羊乳显著提高了雌、雄大鼠的日增重,与生理盐水组相比差异极显著(P<0.01),与普通乳组相比差异显著(P0.05)。试...
关键词：
人乳铁蛋白 转基因山羊乳 大鼠 代谢
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张志伟 李忠 梁宏伟 罗相忠 李林 邹桂伟
克隆鲢转铁蛋白(transferrin,Tf)基因的全长cDNA序列,并对鲢转铁蛋白的组织表达模式、胚胎发育过程中的时序表达模式进行分析。结果显示,该cDNA全长2 365 bp,包含2 025 bp开放阅读框(ORF),编码674个氨基酸。鲢转铁蛋白与草鱼转铁蛋白的同源性高达74%,与人乳铁蛋白同源性最低,为39%,与其他鲤科鱼类转铁蛋白的同源性约65%~73%,与非鲤科鱼类的同源性约43%~50%。系统进化树分析显示,鲢转铁蛋白基因与斑马鱼、草鱼、鲤、鲫等几种鲤科鱼类亲缘关系最近,单独聚为一支。鲢转铁蛋白基因仅在肝脏和脾脏中表达(肝脏中表达量高于脾脏)。在胚胎发育过程中,转铁蛋白基因对原肠...
关键词：
转铁蛋白 鲢 RACE 实时荧光定量
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
舒建洪 潘智芳 郑月茂 石玉强 张涌
通过RT-PCR技术从人乳腺癌组织中扩增出长度为2259 bp的人乳铁蛋白cDNA,PCR产物经凝胶回收纯化后,克隆在pMD 18-T载体的T位点。测序结果和序列分析显示,与GenBank中收录的人、小鼠、奶牛和山羊的乳铁蛋白cDNA序列的同源性分别为99．73％,82．19％,81．79％和87．28％。其中与人乳铁蛋白cDNA 序列相比,发现有5个碱基因等位基因间的突变而发生变异,1个碱基发生了未知的突变,表明已成功的扩增、克隆了人乳铁蛋白基因cDNA序列,此基因序列的GenBank登录号为AY165046。
[期刊] 水产学报
[作者]
郭慧芝 付建平 昌鸣先 郭政 朱邦科 聂品
铁蛋白普遍存在于生物体内,具有铁离子解毒和储存等功能。在构建脂多糖刺激的中华绒螯蟹cDNA文库的基础上,获得了中华绒螯蟹铁蛋白基因EsFer的cDNA序列,其全长为1118bp,包含480bp的开放阅读框,推测编码的蛋白质为159氨基酸,其5′和3′端的非编码区分别为178bp和461bp,预测的分子量为18.3ku,理论等电点为5.81,在15～37aa处有一个跨膜螺旋。在5′非编码区核甘酸序列的135～162的位置有个特殊的结构,即铁反应元件(iron response element,IRE)。通过荧光定量PCR的方法研究了铁蛋白基因在中华绒螯蟹的组织表达分布,以及经脂多糖刺激后在血淋巴...
关键词：
中华绒螯蟹 铁蛋白 表达 脂多糖
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
荆强 苗晋锋 顾蓓蓓 邓月娥 邹思湘
选择同处于泌乳初期的睢宁白山羊6头,产后第5、8天分别向左、右乳区灌注等体积的灭菌PBS和10μg.kg-1CpG-ODN(cytosine-phosphate-guanosine dinucleotides),第9天于左、右乳区经乳导管灌注大肠杆菌(2×109CFU.mL-1)和金黄色葡萄球菌(2×109CFU.mL-1)混合菌液3 mL。分别于灌注细菌前0 h,灌注后8、16、24、48和72 h采集乳样,动态监测乳中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)和髓过氧化物酶(MPO)的活力及乳铁蛋白含量变化。灌注72 h后处死动物,取乳腺组织进行组织学观察。结果显示:灌注细菌后72 ...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
郑回勇 郑金贵 黄碧芳
乳铁蛋白具有抗菌、抗病毒感染和促进 Fe吸收等多种功能 .把人乳铁蛋白基因转入胡萝卜 ,为其添加新的营养保健因子 ,同时增强植株抗性 ,具有重要意义 .本试验把人乳铁蛋白基因插入 p BIN1 2 1质粒 Xba 、Sac 位点之间 ,经农杆菌介导 ,转入胡萝卜受体 ,在抗性筛选培养基上诱导形成抗性愈伤组织 ,进而经胚状体途径得到抗性苗 .经 PCR检测 ,初步确定抗性植株为转人乳铁蛋白基因植株
关键词：
胡萝卜 人乳铁蛋白 遗传转化
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张立春 金海国 李赵志 任春宇 曹阳 周国利 金鑫
【目的】克隆延边黄牛转铁蛋白受体2(transferrin receptor 2,TFR2)基因,并分析该基因在不同组织器官中的表达分布。【方法】通过提取肝脏组织总RNA,采用RT-PCR及RACE方法克隆延边黄牛TfR2基因,采用生物信息学软件进行序列分析,用半定量PCR(SqRT-PCR)方法分析TfR2基因在不同组织器官中的表达分布规律。【结果】①成功克隆出了延边黄牛TfR2基因完整ORF区及3′UTR区(GenBank登录号:GU553087),该基因全长2 901 bp,ORF区2 412 bp,编码803个氨基酸;②延边黄牛TfR2基因核苷酸序列与其它物种的同源性在80%以上,不同...
关键词：
延边黄牛 转铁蛋白受体2基因 RACE
[期刊] 中国水产科学
[作者]
龙华 李谷 魏令波
取体重约300g鲜活鲫(Carassiusauratus)的肝组织进行总RNA提取。从GenBank数据库查询已发表的8种鱼转铁蛋白cDNA或基因序列,根据铁离子结合转运功能位点,设计并合成了2对引物P1、P4以及P2、P3,克隆出鲫血清转铁蛋白cDNA中的从大约550bp至1450bp的核心片段,长度为0.9kb。同时,比较了几种鱼血清转铁蛋白cDNA序列的同源性,并推导出鲫血清转铁蛋白cDNA核心片段的氨基酸序列,并分析了该氨基酸序列的结构和特性。
关键词：
鲫 转铁蛋白cDNA 克隆 序列分析
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马跃 王建珏 黄江涛 张天颖 史怀平
【目的】原核表达奶山羊表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)蛋白胞外区25-644位共620个氨基酸序列(ECD序列),纯化蛋白并免疫家兔,制备针对山羊EGFR蛋白的特异性多克隆抗体,为山羊EGFR蛋白功能研究奠定基础。【方法】以pMD19-T-EGFR为模板,采用PCR方法扩增得到EGFR胞外区(ECD)基因序列。将ECD序列连接pET-32a(+)质粒构建pET-32a(+)-ECD原核表达载体,将该重组载体导入大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导
[期刊] 华北农学报
[作者]
耿荣庆 陈玉林 王兰萍 杨朝霞 姜维 刘敏 曹春娜
对绒山羊和绵羊KAP1.4基因的编码区进行克隆与分析,在此基础上预测了KAP1.4蛋白的分子结构,为研究毛(绒)用性状的分子基础提供资料。结果表明,克隆测序获得绒山羊、绵羊KAP1.4基因编码区序列长度为579bp和549 bp,分别编码192个氨基酸和182个氨基酸。生物信息学分析表明,绒山羊和绵羊KAP1.4蛋白的基本理化特性方面无明显差异,属于非跨膜蛋白,信号肽的长度和裂解点相同,都具有1个蛋白激酶C磷酸化位点、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和6个N端酰基化位点;蛋白的二级结构由β折叠、β转角和无规则卷曲构成。三级结构预测显示,绒山羊与绵羊KAP1.4蛋白在空间三维结构上存在显著差异,将会进...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
邹思湘 W Hurley
利用酶标板固定乳铁蛋白,用生物素标记肝素,研究 pH 和某些阳离子对乳铁蛋白与肝素结合的影响.结果表明,在100 mmol/L NaCl 时,两者结合的最适 pH 为6.0;无 NaCl 时,为6.5.Na~+和 Ca~+对于乳铁蛋白与肝素的结合有协同的效应,两者的最大结合发生在125mmol/L NaCl 和无 Ca~(2+)或低 Ca~(2+)浓度下;而在低 NaCl 浓度时,Ca~(2+)则促进两者的结合.Zn~(2+)和 Cu~(2+)对乳铁蛋白与肝素的结合有抑制,在100 mmol/L NaCl 时,800μmol/L 的 Cu~2+和900μmol/L 的 Zn~(2+)分别使结合...
关键词：
乳铁蛋白 肝素 糖胺多糖 抗菌作用
[期刊] 华北农学报
[作者]
程金波 王加启 李珊珊 甄云鹏 刘光磊 卜登攀 刘开朗
功能乳制品的加工失活是目前乳制品工业中的重要难题。本试验旨在研究不同热处理方式对于乳中活性物质免疫球蛋白(IgG)和乳铁蛋白(Lf)的影响。本研究参照目前乳品工业中常用的热处理方式,共选用12种温度和时间组合。结果表明,乳品加工过程中的均质化处理提高了乳中IgG以及Lf的活性;不同的温度与时间的热处理方式组合可以显著的影响乳中IgG和Lf的活性;综合考虑乳中IgG和Lf活性变化,本研究表明70～75℃,15s的加工工艺适合于这两种功能性蛋白的大规模工业化生产。
关键词：
热处理 牛奶 IgG 乳铁蛋白
[期刊] 华北农学报
[作者]
李琪 杨昌恒 王永 林亚秋 向华 朱江江
旨在获得CIDEB、CIDEC基因的CDS,检测该家族基因在山羊不同组织中的表达量，预测其互作蛋白，为进一步揭示CIDE家族基因在脂代谢中的调控网络提供参考。主要利用RT-PCR克隆获得山羊CIDEB、CIDEC基因序列并利用在线工具分析CIDE家族蛋白的生物学特性，并预测其互作蛋白。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测了CIDE家族基因在山羊不同组织中的表达水平，并检测各互作蛋白在其表达水平最高的组织中的表达量，利用SPSS分析其表达量之间的相关性。克隆获得了CIDEB基因CDS区660 bp,共编码219个氨基酸，CIDEC基因CDS区714 bp,编码237个氨基酸。进化树分析显示，山羊CIDEA、CIDEB、CIDEC均与绵羊亲缘关系最近。RT-qPCR检测发现CIDEA、CIDEB、CIDEC基因分别在山羊瘤胃、肝脏、小肠中表达量最高。CIDEA与DFFB和ELOVL3在瘤胃中的表达量具有极显著相关性(P<0.01),与DIO2、TMEM26、PRDM16、PLIN1具有显著相关性(P<0.05)。CIDEB与DFFA和SDR39U1在肝脏中的表达量具有显著相关性(P<0.05)。CIDEC与PLIN2、GPLD1、ADIPOQ在小肠中的表达量具有显著相关性(P<0.05)。通过分析发现了与CIDE家族表达量具有相关性的基因，可为进一步揭示CIDE基因在脂质代谢中的作用及其调控网络提供理论基础，且CIDE家族蛋白均为脂滴相关蛋白，也可为进一步研究精确的脂滴形成机制提供参考。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张晶晶 刘凤军 彭淑英 宋红卫 张涌
构建了携带人乳铁蛋白(LTF)基因、绿色荧光蛋白(GFP)基因的乳腺特异性表达载体(pEBL),用脂质体法转染泌乳期莎能奶山羊乳腺上皮细胞,转染后于荧光显微镜下观察GFP表达情况。用G 418对转染细胞进行筛选,获得抗性细胞克隆,并对转染细胞进行PCR检测。结果显示,pEBL构建成功,转染6 h后可观察到细胞有GFP表达,PCR检测阳性克隆细胞转有LTF基因。表明pEBL载体已转染山羊乳腺上皮细胞,为进一步建立转基因动物乳腺生物反应器奠定了基础。
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