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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
雷莹 苏胜彦 丁敬波 刘浩亮 袁新华
【目的】研究IGF2b基因对建鲤生长及体型的影响。【方法】用含有IGF2b基因的慢病毒载体注射建鲤背部肌肉组织,注射量分别为10,20和40μL/尾,阴性对照组不进行任何处理,阳性对照组注射20μL/尾去离子水。在相同饲养条件下饲养满9个月后,分别测量建鲤的各项生长指标。【结果】注射IGF2b基因的建鲤体质量、体长、体高、体厚、尾长均显著大于阴性对照组和阳性对照组,说明IGF2b基因在建鲤背部肌肉组织中过表达对鲤第2阶段生长同样具有促进作用,IGF2b基因在鲤背部肌肉组织中过表达对鲤的体型也有一定的作用。鲤的体长、体高、体厚的3D图也说明,随着IGF2b基因注射,鲤鱼倾向于具有更大的体长、体高...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
苏胜彦 陈为先 马佳璐 张勇 胡鹏晨 闻剑旻 张成锋 董在杰 袁新华 徐跑
以水母绿色荧光蛋白基因为模板进行PCR扩增得到目的基因(Green fluorescence protein,GFP),然后加上酶切位点BamHI和NheI,构建pLenti6.3-IRES-EGFP载体,转染DH5α感受态细胞进行菌落PCR,取阳性进行酶切鉴定,再取呈阳性的质粒进行测序,使用浓度为1μg/μL的质粒与慢病毒表达载体进行连接,通过荧光显微镜观察到绿色荧光,表明本实验获得的GFP和慢病毒载体整合成功;用此转染293T细胞,通过荧光显微镜同样检测到了绿色荧光。使用建鲤的组织提取RNA,然后按照Fermentas公司的M-MLV操作说明书进行反转录,得到IGF2b基因后加酶切位点进行...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
安静 张雪梅 刘晨曦 刘明军
【目的】克隆绵羊IGF-1基因CDS区,构建绵羊IGF-1基因慢病毒表达载体,分析IGF-1基因在绵羊成肌细胞增殖过程中的作用。【方法】提取绵羊肝组织总RNA,通过RT-PCR方法获得IGF-1全长CDS序列,经测序鉴定后与慢病毒载体pLEX-mcs连接,构建pLEX-IGF-1慢病毒重组表达质粒,并在293T细胞中进行病毒包装和生产。分离培养绵羊原代成肌细胞,并用重组慢病毒使其感染,建立稳定转染pLEX-IGF-1的绵羊成肌细胞系。通过绘制细胞生长曲线,分析过表达IGF-1对绵羊成肌细胞生长的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期变化。【结果】克隆获得长518bp的IGF-1CDS区序列。成功构建...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
庄许诺 陆芍华 严梦涵 何晴 包松英 江兴华 王全溪
选取10头经检测确定为猪瘟抗原抗体双阴性的断奶外三元仔猪，随机分为A、B组，每组5头.A组(对照组)仔猪肌肉注射灭菌生理盐水(1 mL·头~(-1)),B组(兔脾淋组织注射组)仔猪肌肉注射兔脾淋组织(1 mL·头~(-1)).注射后的第3天，采集仔猪外周血，基于Illumina测序平台进行转录组测序分析，筛选差异表达基因，进行基因本体(GO)及京都基因和基因组数据库(KEGG)富集分析，并采用RT-qPCR验证差异表达基因的表达水平.结果显示：A、B两组样品的测序长度均约为6×10~9 bp,测序质量符合要求；两组外周血细胞共筛选到差异表达基因1 246个.GO富集结果表明，差异表达基因富集到的生物过程有56个GO条目，细胞组成有19个GO条目，分子功能有10个GO条目.KEGG富集结果表明，共有17条显著性富集KEGG通路.本研究重点分析了A、B两组样品T细胞受体和Toll样受体的KEGG通路，验证差异表达基因的表达水平，结果显示，与A组相比，B组CD4/8、TCRα、AP-1、NAFT基因的表达水平显著上调，与转录组数据一致.以上结果表明，兔脾淋组织肌肉注射第3天可显著影响猪外周血转录组谱，特别是可调节T细胞受体和Toll样受体的KEGG通路，提高猪的免疫功能.
[期刊] 中国水产科学
[作者]
柴静茹 王荻 陈福广 曹永生 卢彤岩 李绍戊
嗜冷黄杆菌(Flavobacterium psychrophilum)是鲑鳟类细菌性冷水病(bacterial cold water disease,BCWD)的病原菌,该病的发生和流行严重制约了鲑鳟产业的健康发展。本研究分析嗜冷黄杆菌肌肉注射感染虹鳟(Oncorhynchus mykiss)后病原菌的动态组织分布情况,以期为BCWD的防控提供理论支撑。以1.0×10~8 CFU/mL浓度的嗜冷黄杆菌CH06株菌液肌肉注射感染实验虹鳟,感染后12 h、24 h、96 h观察虹鳟临床症状及组织病变,并利用qPCR Taqman探针法检测各组织病原载量。患病鱼的临床病征表现为体色发黑、游动缓慢或不动、食欲不振,尾柄部注射处肌肉溃烂,鳃苍白,脾脏肿大,伴有腹水。组织病理观察显示,嗜冷黄杆菌感染后实验鱼注射处肌纤维断裂、溶解;脾窦扩张,其内充满红细胞;肾脏组织含铁血黄素增加,出现大量空泡变性,肾小管上皮细胞变性、坏死,肾间质炎性细胞浸润。qPCR检测结果表明,肌肉注射感染12 h后即可在脾脏、肝脏、肾脏、肠道、鳃、注射处肌肉、脑和尾鳍中检出嗜冷黄杆菌,注射处肌肉病原载量最高为(5.85±2.11)×10~5 copy/μL。感染后24 h,脾脏、脑中病原载量较12 h时上升最多,其他组织病原载量与感染12 h时水平一致,注射处肌肉病原载量为(6.48±2.07)×10~5 copy/μL,显著高于其他组织(P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙国锋 张智英 白义春 魏泽辉
【目的】采用睾丸注射慢病毒的方法生产转基因鸡以提高转基因效率，使转基因鸡的批量生产变得简单可行。【方法】用磷酸钙沉淀法包装慢病毒，对慢病毒包装体系中的质粒总量和HN Buffer的pH值进行优化，以包装出滴度较高的慢病毒；然后将慢病毒注射到受精鸡蛋的胚胎中验证其活性；最后，将慢病毒注射到8日龄公鸡的睾丸内，待其性成熟以后，将精液DNA呈阳性的公鸡与非转基因母鸡进行交配生产出转基因鸡。【结果】当90 mm培养皿中质粒总量为50 μg、HN Buffer的pH值为7.05时慢病毒的包装效率最高，在该条件下包装出的慢病毒滴度高达7.5×107 TU/mL；采用慢病毒胚胎注射途径成功地生产出增强绿色荧...
关键词：
转基因鸡 慢病毒 胚胎注射 睾丸注射
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
陈友明 李家乐 白志毅
在室内水族箱养殖条件下,研究了肌肉注射不同剂量维生素C(Vc)对三角帆蚌血淋巴中3种主要抗氧化酶活力随时间的变化。结果表明:Vc对三角帆蚌血淋巴过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)3种酶的活性均有显著影响(P
关键词：
维生素C 三角帆蚌 血淋巴 抗氧化酶
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵丽华 梁浩 云亭 李荣凤
【目的】构建两套用于牛肌肉生长抑制素(myostation,MSTN)基因敲除的置换型打靶载体。【方法】设计并合成含有限制性内切酶酶切位点的引物,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)以牛耳皮肤组织基因组DNA为模板分别扩增出两套打靶载体的同源短臂和长臂,再分别插入到两套打靶专用基础载体pMCS-PLP和PⅢ中,构建两套用于牛MSTN基因敲除的置换型打靶载体pPLP-MSTN和PⅢ-MSTN。【结果】经过PCR、T载体连接和DNA测序,证实载体pPLP-MSTN包含2.8 kb同源短臂和4.0 kb同源长臂,载体PⅢ-MSTN包含1.3 kb同源短臂和...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吴莉芳 秦贵信 张东鸣 王洪鹤 孙泽威 孙玲
【目的】探讨大豆蛋白在鲤鱼饲料中的适宜替代量。【方法】以初始质量为(50.13±0.41)g的健康鲤鱼(Cyprinus carpio)为试验对象,在室内单循环控温养殖系统中进行8周生长试验,以鱼粉为动物蛋白源、去皮豆粕为植物蛋白源,去皮豆粕分别替代0%(CK),15%,30%,45%和60%的鱼粉蛋白,配制成5种等蛋白(360 g/kg)等能(15.2 MJ/kg)的半精制饲料,研究大豆蛋白对鲤鱼生长、饲料转化率及肌肉营养成分的影响。【结果】当大豆蛋白替代15%鱼粉蛋白时,PPV(蛋白质沉积率)显著高于对照组(P<0.05),SGR(特定生长率)、FER(饲料效率)、PER(蛋白质效率)与对...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘晨曦 唐森 李文蓉 刘明军
【目的】构建新疆细毛羊MSTN基因慢病毒表达载体,研究其在细毛羊成肌细胞分化中的作用,并探讨其作用机制。【方法】采用RT-PCR技术,扩增MSTN编码区序列,克隆入plex-mcs慢病毒表达载体,构建plex-MSTN慢病毒表达载体,并进行酶切及测序鉴定。将plex-MSTN包装成plex-MSTN慢病毒。用酶消化法分离培养新疆细毛羊成肌细胞,慢病毒感染制备MSTN过表达成肌细胞系,通过马血清诱导分化,Western blotting检测分化细胞MSTN基因的表达,免疫荧光分析分化肌管的融合率及肌管直径,Realtime RT-PCR检测分化相关基因的表达。【结果】克隆的新疆细毛羊MSTN基因...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李丰银 陶勇 李运生 曹鸿国 刘亚
将12日龄小鼠卵巢移植到8～10周龄去势雄性小鼠的背部肌肉中,分别于移植后7、26和40d观察移植体周围血管再生状况,分离并观察移植体上的卵泡和卵母细胞发育情况,并观察移植体的组织学结构及变化。结果发现:卵巢移植后7d,卵巢內大量卵泡发生退行性变化,卵泡数量骤减;移植后26d,移植体周围有明显的血管发生,移植体直径增加到1908μm,极显著大于12日龄小鼠卵巢(P<0.01),移植体边缘可见到各阶段的卵泡,卵巢的皮质和髓质界限模糊;移植后40d,移植体直径增加到2739μm,极显著大于12日龄小鼠卵巢(P<0.01),有明显的卵泡,从移植体中分离得到卵丘卵母细胞复合体(COCs)和卵母细胞,形...
关键词：
卵巢移植 小鼠 卵泡 卵母细胞
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
朱贵明 陈宏 高强 陈红星 邓继先
为了建立有效地用于转基因动物生产的慢病毒表达系统,以线虫C.briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-1)为目的基因构建了慢病毒表达载体,通过与慢病毒包装载体PLP1、PLP2和PLP/VSVG一起共转染293FT细胞系生产了慢病毒颗粒,并对其感染哺乳动物细胞NIH3T3细胞系的能力进行了检测。结果表明,该系统所生产的病毒滴度约为5.0×106TU/mL,这种病毒能够感染哺乳动物细胞,说明构建的慢病毒表达系统是有效的,应用其可以生产感染力良好的慢病毒颗粒,并高效地进行sFat-1基因转移。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
钟小群 李向飞 蔡万存 徐超 李其松 黄健 刘文斌
[目的]本试验旨在探究发酵饲料对鲤鱼幼鱼生长性能、体组成、肠道消化酶活性、肌肉品质和免疫机能的影响。[方法]制备了5组饲料:基础饲料(G1)、基础饲料中添加2.5%(G2)或5%(G3)发酵饲料、基础饲料中菜粕用5%(G4)或10%(G5)的发酵饲料等蛋白替代。300尾鲤鱼随机分5组,每组4个重复,每重复15尾,每组饲喂1种饲料。每日将鱼饱食投喂3次,投喂10周。养殖结束后采集血液、肝脏、肠道、肌肉样品测定免疫机能、消化酶活性和肌肉品质指标。[结果]G3、G4、G5组的饲料系数显著低于G1组(P0.05)
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
邢秀苹 杨欢欢 韦庆勇 吴莉芳 闫磊 全亚男
【目的】研究豆粕和膨化大豆粉对鲤鱼生长、饲料利用及肌肉营养成分的影响，为优化鲤鱼人工配合饲料提供依据。【方法】分别利用豆粕和膨化大豆粉替代约60%（质量分数）的鱼粉，以全鱼粉为对照，配制成3种等氮（粗蛋白含量为360 g/kg）、等能（总能为15.2 MJ/kg）的半精制饲料，在室内单循环控温养殖系统中对初始体质量为（27.25±0.09） g的鲤鱼进行8周饲养试验。饲养试验结束后测算鲤鱼生长和饲料利用相关指标及肌肉营养成分含量。【结果】豆粕组和膨化大豆粉组鲤鱼的增重率和特定生长率与对照组相比显著降低（P＜0.05），而饲料效率、蛋白质效率、肥满度、肝体比和脏体比与对照组无显著差异（P＞0.0...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
褚文辉 赵海平 杨福合 邢秀梅 刘国庆 李春义
研究十型胶原蛋白(Collagen type Ⅹ,Col Ⅹ),在软骨内成骨过程中所起的作用。本研究针对梅花鹿Col Ⅹ基因设计筛选2条高分RNAi靶序列,在T4 DNA连接酶的作用下分别与慢病毒载体质粒plvthm连接,形成重组质粒S2-plvthm/S3-plvthm;PCR筛选阳性克隆并测序鉴定。用Lipofectamine 2000介导S2-plvthm/S3-plvthm,pCMVdr8.91,pMD2G三质粒共转染293T细胞。结果显示:转染24 h后,观察到表达荧光蛋白的293T细胞。收集培养液后进行1000g离心5 min,所得上清液含有重组慢病毒的组分。S2-plvthm/S...
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