[目的]课题组前期研究发现，PM_(2.5)暴露引起肉鸡肺部炎症损伤和肺部菌群紊乱，肺部盲肠肠球菌相对丰度显著升高，这提示肺部菌群在PM_(2.5)诱导肉鸡肺部炎症损伤中发挥重要作用。因此，本试验旨在研究肺部菌群对PM_(2.5)诱导肉鸡肺部炎症损伤的影响，并利用盲肠肠球菌处理肺泡上皮细胞，探究肺部盲肠肠球菌在PM_(2.5)诱发肺部炎症损伤中的作用。[方法]选取45只19日龄雄性AA肉鸡随机分为3组：对照组、PM_(2.5)组（PM）和肺部菌群干预组（ABX-PM）。从21日龄开始，ABX-PM组肉鸡气管滴注抗生素消减肺部菌群，每天滴注一次，连续滴注三天，其他两组肉鸡气管滴注无菌生理盐水。在24和26日龄时，分别向PM组和ABX-PM组肉鸡气管滴注PM_(2.5)悬浮液诱导肺部炎症损伤，对照组肉鸡气管滴注无菌生理盐水。在最后一次气管滴注PM_(2.5 )24 h后对肉鸡进行称重并采集肺组织、支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）和血清样品。检测BALF和血清内炎症因子水平、肺组织内紧密连接（tight junctions，TJs）基因表达水平以及肠球菌属和盲肠肠球菌相对含量，并进行盲肠肠球菌相对含量与炎症因子水平的相关性分析。另外，体外培养A549细胞并分为对照组和处理组，对照组加入不含盲肠肠球菌的DMEM/F12培养基，处理组加入含有1×10~(4) CFU·mL~(-1)盲肠肠球菌的DMEM/F12培养基。处理6 h后，检测两组细胞炎症因子、TJs及细胞凋亡相关基因表达水平。[结果]与对照组相比，PM组肉鸡BALF和血清IL-8水平显著升高，而ABX-PM组差异不显著；与对照组相比，PM组肉鸡肺组织occludin及claudin-1 mRNA表达水平显著降低，claudin-5 mRNA表达水平显著升高，而ABX-PM组差异不显著；PM组肉鸡肺部肠球菌属和盲肠肠球菌的相对含量显著高于对照组和ABX-PM组；肺部盲肠肠球菌相对含量与BALF内IL-1β、IL-6、IL-8水平和血清内IL-1β水平呈显著正相关关系。体外细胞试验结果显示，与对照组相比，处理组A549细胞tnf-α、il-1β、il-6及il-8 mRNA表达水平显著升高，il-10 mRNA表达水平显著降低；处理组A549细胞zo-1及claudin-1 mRNA表达水平显著降低；处理组A549细胞bax/bcl-2 mRNA表达水平的比值及caspase-3 mRNA表达水平显著升高，bcl-2 mRNA表达水平显著降低。[结论]肺部菌群干预降低了PM_(2.5)诱导的盲肠肠球菌增殖，减轻了肉鸡肺部炎症损伤程度，表明肺部菌群参与PM_(2.5)诱导肉鸡肺部炎症损伤的过程；另外，盲肠肠球菌能够诱导体外肺泡上皮细胞炎症反应，提示肺部菌群失衡加剧肺部炎症损伤。

【目的】探讨特丁基对苯二酚（tert-Butylhydroquinone,TBHQ）对鸡舍细颗粒物（fine particulate matter,PM_(2.5)）诱导鸡胚肺损伤的缓解作用及机制，为预防和缓解鸡舍PM_(2.5)污染引起的鸡呼吸道健康问题提供理论依据。【方法】选用14日龄鸡胚作为研究对象，首先建立鸡舍PM_(2.5)诱导鸡胚肺组织损伤模型，再利用鸡胚肺损伤模型研究TBHQ的缓解作用。在建立鸡舍PM_(2.5)诱导鸡胚肺组织损伤模型试验中，选取不同浓度的PM_(2.5)(0、0.25、0.5、1 mg·mL~(-1)）在14日龄鸡胚卵白处注射，5 d后，观察鸡胚存活率以及鸡胚肺组织形态，选取合适的PM_(2.5)处理浓度（0.25 mg·mL~(-1)），建立鸡胚肺损伤模型。在TBHQ对PM_(2.5)诱导鸡胚肺损伤的影响试验中，将14日龄鸡胚分为对照组（生理盐水）、PM_(2.5)组（0.25 mg·mL~(-1) PM_(2.5)）、TBHQ组（0.1μg·mL~(-1) TBHQ）、PM_(2.5)+TBHQ组（0.25 mg·mL~(-1) PM_(2.5)+0.1μg·mL~(-1) TBHQ），分别注入鸡胚卵白处，试验持续5 d，采集肺组织，记录种蛋重量、胚胎重量以及肺组织重量；对鸡胚肺脏进行组织学观察；检测肺组织丙二醛（malondialdehyde,MDA）、总超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase,T-SOD）、总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）和细胞焦亡（NLRP3、Caspase-1、IL-18、IL-1β）以及细胞程序性坏死（RIPK1、RIPK3、MLKL）相关基因的表达。【结果】在建立鸡舍PM_(2.5)诱导鸡胚肺组织损伤模型试验中，不同浓度的PM_(2.5)(0、0.25、0.5、1 mg·mL~(-1)）对鸡胚存活率无显著影响，但0.25mg·mL~(-1) PM_(2.5)组鸡胚肺组织出现炎性细胞浸润现象，0.5 mg·mL~(-1)和1 mg·mL~(-1) PM_(2.5)组鸡胚肺组织出现肺水肿现象，表明随着PM_(2.5)浓度增加，鸡胚肺部炎症损伤加重。在TBHQ对PM_(2.5)诱导鸡胚肺损伤的缓解试验中，各组对鸡胚胚胎重量、肺脏重量、胚蛋比和肺胚比均无影响；与PM_(2.5)组相比，TBHQ和PM_(2.5)共处理组的鸡胚肺组织中炎性细胞浸润现象明显减少，MDA水平下降；RT-PCR结果显示：与对照组相比，TBHQ组Caspase-1的表达显著上升（P<0.01),PM_(2.5)组IL-1β(P<0.01）、RIPK1(P<0.01）的表达显著上升；与PM_(2.5)组相比，TBHQ和PM_(2.5)共处理组IL-18(P<0.01）、IL-1β(P<0.01）、RIPK1(P<0.01）、MLKL(P<0.01）的表达显著下调，Caspase-1(P<0.01）、RIPK3(P<0.05）的表达显著上升。【结论】TBHQ能够通过抑制氧化应激，降低细胞焦亡和细胞程序性坏死相关基因的表达，缓解鸡舍PM_(2.5)引起的鸡胚肺组织炎症损伤。

旨在研究发酵乳杆菌能否通过抑制NF-kB信号通路的激活,调控下游炎性细胞因子,进而对脂磷壁酸(LTA)所诱导的牛子宫内膜细胞(BEND)炎性损伤发挥保护作用,并通过体外试验对其作用机制进一步研究,为解决牛子宫内膜炎的治疗难题提供方向。以牛子宫内膜细胞为研究对象,LTA和发酵乳杆菌分别作为毒药与解药来建立体外细胞试验模型,测定细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的分泌量和炎性相关基因TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、TLR2、MyD88、NF-kB p65 mRNA的表达量。结果表明:LTA组、LTA+Lf组、Lf组炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的蛋白表达水平均高于对照组。LTA组与对照组比较差异极显著(p0.05),IL-1β、IL-8细胞因子差异显著(p<0.05);LTA+Lf组与LTA组比较,TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8的蛋白表达量显著降低(p0.05),IL-8基因mRNA的表达量增加显著(p<0.01);LTA+Lf组与LTA组相比,7种基因mRNA的表达量均极显著降低(p<0.01)。发酵乳杆菌能够抑制NF-kB信号传导通路,调控炎性细胞因子的表达与释放,抑制炎性反应的发生,缓解LTA的细胞毒性,对LTA诱导的牛子宫内膜细胞炎性损伤起干预作用。

[目的]本文旨在探究2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)对LPS诱导的仔猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)炎症和屏障功能的影响。[方法]以IPEC-J2为细胞模型，首先通过预试验对LPS和2’-FL的处理浓度分别进行筛选，最终选择100 μg·mL~(-1) LPS诱导细胞促炎反应，接着通过不同浓度2’-FL干预（20 μg·mL~(-1)、100 μg·mL~(-1)）来探究其对LPS诱导IPEC-J2的促炎反应和屏障功能受损的调节作用。因而，此试验分为六组：对照组（CON）、LPS组（100 μg·mL~(-1) LPS）、FL20组（20 μg·mL~(-1) 2’-FL）、FL100组（100 μg·mL~(-1 )2’-FL）、SF20组(100 μg·mL~(-1 )LPS+20 μg·mL~(-1 )2’-FL)和SF100组（100 μg·mL~(-1 )LPS+100 μg·mL~(-1)2’-FL）。试验处理24 h后，测定各组细胞活力、紧密连接蛋白、炎症因子和炎症相关通路的基因表达水平以及通过Western blot检测NF-κB、Myd88、Claudin-1和Occludin蛋白的相对表达量。[结果]与CON组相比，LPS组显著降低了IPEC-J2细胞活性（P＜0.05）；显著上调了促炎因子IL-6、IL-8 及炎症通路NF-κB、Myd88和CD14的基因表达（P＜0.05）;下调了抗炎因子IL-4的基因表达（P＜0.05）; 同时显著下调了紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-3、Claudin-4、ZO-1、ZO-2和Occludin的基因表达（P＜0.05）。与CON组相比，FL20组还显著提高了Claudin-1、Claudin-3、Claudin-4和ZO-2紧密连接蛋白的表达（P＜0.05）。与LPS组相比， SF20组和SF100组显著提高了IPEC-J2细胞活性（P＜0.05）；显著下调了促炎因子IL-8和上调了抗炎因子IL-4和IL-10基因表达（P＜0.05）；显著下调了炎症通路基因NF-κB、Myd88和CD14（P＜0.05）；显著上调了紧密连接基因Claudin-1、Claudin-3、Claudin-4、ZO-1、ZO-2、Occludin（P＜0.05）。Western blot结果发现，与CON组相比， 只有LPS组的NF-κB显著上调（P＜0.05）。与LPS组相比，SF20组的NF-κB、Myd88蛋白表达量有降低，Claudin-1和Occludin蛋白表达量有升高，但差异都不显著。[结论] LPS处理促进了IPEC-J2细胞的促炎反应并造成了屏障功能受损，2’-FL干预减弱了LPS刺激的促炎信号通路，进而改善了LPS引起的屏障功能受损。本研究揭示了2’-FL参与调节肠道炎症和屏障功能的可能机制，为利用2’-FL促进肠道健康提供了新的见解和参考依据。

将供试的200只1日龄白羽肉鸡随机分为5组(空白对照组、模型组、试验Ⅰ～Ⅲ组),每组5个重复,每个重复8只鸡.空白对照组、模型组饲喂基础日粮;试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在饲喂的基础日粮中分别添加500、1 000、2 000 mg·kg~(-1)筋骨草超微粉.试验为期42 d,研究筋骨草超微粉对脂多糖(LPS)引起的急性肺损伤肉鸡肺组织的保护作用.结果表明:注射LPS 0 h,试验Ⅰ～Ⅲ组肉鸡肺组织的IL-1β、IL-6、TNF-α含量较空白对照组显著提高(P

采用组织贴块法培养肉鸡肺动脉内皮细胞(PAEC),并依据细胞形态学特点和凝血因子Ⅷ相关抗原免疫组化染色结果对所培养的细胞进行鉴定。以黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶(X/XO)系统作为氧自由基发生系统建立PAEC氧化损伤模型。结果表明:肉鸡PAEC在体外能够存活并传5-6代。形态学观察和Ⅷ因子抗原免疫组化染色检查证明培养的细胞符合肺动脉内皮细胞的特点。氧自由基能够明显损伤PAEC,X/XO系统作用下细胞生长被抑制,甚至导致细胞死亡,并且这种抑制作用对XO有剂量依赖性。与正常对照组相比,损伤组PAEC培养液中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量升高,提示氧自由基促进了PAEC的脂质过氧化。这说明氧自由基对肉鸡...

240羽肉鸡于14日龄时随机分为常温对照组(A)、低温对照组(B)和低温呋喃苯胺酸添加组(C)。分别于14、23、30、37、44日龄从各组随机抽取10羽肉鸡采血和扑杀,测定肺血管管壁面积与管总面积之比(WA/TA)、平均中膜厚度(mMTPA)等各项指标。观察在低温环境下呋喃苯胺酸对肉鸡肺动脉高压综合征(PHS)的防治效果及其对肉鸡肺血管重构的影响。试验结果显示,与A组相比,B组PHS发病率升高,右心全心比(RV/TV)、红细胞压积(PCV)和反映血管重构指标的WA/TA和mMTPA值显著升高(P

【目的】研究高温诱导蛋鸡氧化损伤及对卵泡发育的影响,探讨环境高温抑制蛋鸡卵泡发育、降低产蛋量的机制。【方法】试验分两部分进行:试验一,将180只27周龄的海兰褐蛋鸡随机分为3个处理组,分别饲养于人工环境控制舱内,3个处理组分别为常温组(23℃,饲喂基础日粮)、日循环高温组(28—35—28℃,饲喂基础日粮)和高温补充VE组(28—35—28℃,饲喂基础日粮+250 IU·kg-1 VE),试验期14 d;试验二,分离蛋鸡F1和F2卵泡颗粒层并制备颗粒细胞悬浮液,将颗粒细胞分别在39或44℃下培养。【结果】试验一结果显示,日循环高温显著抑制蛋鸡卵泡发育,表现为产蛋数量下降(P<0.05)、卵巢重...

为研究荞麦蜜对酒精引起的肝损伤和肠道菌群紊乱的改善效果,对酒精诱导形成的肝损伤小鼠饲喂荞麦蜜予以干预后,测定肝脏指数、血清转氨酶活力以及分析对肝脏脂代谢、氧化应激、肝脏组织的影响,并结合高通量测序分析小鼠的肠道菌群变化。结果显示,与酒精模型组相比,荞麦蜜能显著降低酒精性肝损伤小鼠的谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)水平(P

采用脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264. 7建立炎症模型,评价紫檀茋的抗炎作用。在LPS刺激的RAW264. 7细胞中,添加紫檀茋进行干预,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)方法检测细胞中炎症因子单核细胞趋化蛋白1 (MCP-1),白细胞介素6 (IL-6),白细胞介素1β(IL-1β),肿瘤坏死因子α(TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的mRNA表达量,Griess法检测培养基中一氧化氮(NO)的释放量,采用Western blotting方法进一步检测细胞中细胞外调节蛋白激酶(ERK),c-Jun氨基末端激酶(JNK),p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)和核转录因子κB-p65 (NF-κB p65)的蛋白磷酸化水平。结果发现:紫檀茋能够显著抑制炎症因子基因的表达和炎症介质NO的释放;紫檀茋+LPS组中ERK,p38和p65的蛋白磷酸化水平显著下降。紫檀茋能显著抑制炎症因子MCP-1,IL-6,IL-1β,TNF-α和iNOS的mRNA表达和NO的释放,其机制可能与阻断丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和NF-κB信号通路相关。

为进一步明晰黄芩苷（BCN）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠炎症损伤的缓解作用机制，采用体内体外试验结合，体外试验采用LPS建立RAW264.7细胞炎症模型，测定细胞吞噬能力、一氧化氮释放、炎症细胞因子及TGF-β/SMAD2通路相关mRNA表达；体内试验采用不同浓度的黄芩苷对BALB/c小鼠连续7 d灌胃后腹腔注射LPS建立炎症模型，测定小鼠脾脏指数、T细胞亚群及免疫平衡，RT-qPCR法测定脾脏炎症细胞因子和TGF-β/SMAD2通路相关基因的mRNA表达。结果显示：黄芩苷在25μg/mL范围内对RAW264.7无增殖抑制作用，LPS质量浓度为1μg/mL时，细胞存活率为54.55%。不同质量浓度黄芩苷均可增强RAW264.7细胞的吞噬能力（P<0.05），降低NO释放（P<0.05）;LPS刺激后炎症细胞因子mRNA表达上升（P<0.05）,TGF-β和SMAD2表达下降，黄芩苷干预后上述mRNA表达得到逆转。此外，LPS处理后小鼠脾脏指数显著上升（P<0.01），不同剂量的黄芩苷组均改善这一情况（P<0.05）；流式细胞术结果显示：黄芩苷能够改善LPS刺激的CD4+细胞与CD8+细胞的分化，降低CD4+/CD8+的比值，同时，黄芩苷可恢复LPS刺激的Th17/Treg平衡轴失衡。结果表明，黄芩苷对LPS诱导的小鼠炎症具有缓解作用，其作用机制可能与TGF-β/SMAD2信号通路激活、抑制炎症因子的表达及恢复Th17/Treg平衡轴有关。

【目的】利用虾青素较强的抗氧化特性,通过探讨黏膜屏障重塑对脂多糖(LPS)诱导的牛子宫内膜细胞炎症的影响,为牛子宫内膜细胞炎的预防和治疗提供理论基础。【方法】培养液中添加1μg·mL~(-1) LPS,培养子宫内膜细胞6 h,检测培养液中炎症因子TNF-α和IL-6含量,建立细胞的体外炎症模型。在此基础上去掉培养液,重新加入含1×10~(-6) mol·L~(-1)虾青素的新鲜培养液,继续培养细胞24 h。对照组为不添加LPS或AST,LPS组为仅添加LPS,AST组为添加LPS和AST。采用ELISA法检测培养液中TNF-α和IL-6炎症因子分泌量以及细胞SOD和CAT酶活性,利用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,利用免疫荧光染色检测细胞紧密连接蛋白Claudin、CDH1、TJP1的分布情况,利用荧光定量RT-PCR法和Western Blot法分别检测Claudin、CDH1、TJP1基因的m RNA表达水平和蛋白表达水平。【结果】利用1μg·mL~(-1) LPS培养子宫内膜细胞6 h,检测发现培养液中炎症因子IL-6和TNF-α分泌水平显著高于对照组(P<0.05),说明LPS诱导子宫内膜细胞产生炎症反应。与对照组相比,细胞内ROS水平显著增加(P<0.05),SOD和CAT酶活性都显著降低(P<0.05),同时ROS阳性细胞比率显著下降(P<0.05),SOD和CAT酶活性都显著升高(P<0.05)。【结论】虾青素通过降低子宫内膜细胞因炎症反应产生的氧化损伤,减轻炎症导致的子宫内膜细胞紧密连接结构损伤,对子宫内膜的物理免疫屏障起保护作用,为牛子宫内膜炎的预防和治疗提供理论借鉴意义。

采用Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)人工感染白羽肉鸡，于感染3、6、12、24 h时检测并分析FAdV-4对肉鸡外周血细胞、血液生化指标和炎症因子的影响.结果表明，3～24 h时，被FAdV-4感染的时间越长，肉鸡外周血细胞病毒载量越高.对于外周血细胞，肉鸡红细胞数与病毒载量呈负相关，感染6 h时较未攻毒组显著减少(P<0.05),甘油三酯浓度较未攻毒组显著下降(P0.05),感染3、12、24 h时较未攻毒组显著增加(P<0.05).可见，感染FAdV-4后，白羽肉鸡的红细胞数、血脂浓度和总蛋白含量下降，白细胞数和血糖浓度升高，极大地促进外周血炎症因子的释放，产生了严重的炎症反应.

[目的]本试验旨在研究自噬对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)诱导仔猪海马神经细胞损伤的影响。[方法]以不同质量浓度DON(0,125,250,500,1 000和2 000 ng·mL~(-1))处理对数生长期仔猪海马神经细胞24 h后,采用倒置显微镜、透射电镜观察DON对仔猪海马神经细胞形态和超微结构的影响;采用p EGFP-LC3质粒瞬时转染细胞,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白的分布情况;采用Western blot检测DON对仔猪海马神经细胞自噬标志性蛋白LC3的表达;通过添加自噬激活剂雷帕霉素(RAP)和自噬抑制剂氯喹(CQ)来升高和降低细胞的自噬水平,CCK-8法检测细胞的存活率。[结果]不同质量浓度的DON均可诱导细胞自噬,自噬水平随着DON浓度的增加先上升后下降,在1 000 ng·mL~(-1)时达到峰值。与对照组相比,DON可显著抑制细胞存活率并诱导细胞发生明显的形态学变化,并呈剂量依赖性;随着DON浓度的升高,细胞LC3-Ⅱ含量先上升后下降,1 000 ng·mL~(-1)时,LC3-Ⅱ含量最高,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01)。与DON处理组相比,自噬水平的上升显著提高细胞活性(P<0.05),而自噬水平的下降显著降低细胞活性(P<0.05)。[结论]DON可以引起仔猪海马神经细胞自噬水平的上升,激活的自噬对DON导致的细胞损伤具有一定的保护作用。

为分析贝莱斯芽孢杆菌与戊糖片球菌联合使用对饲喂霉变饲料肉鸡的生产性能与肠道损伤的影响，本研究选取96只1日龄白羽肉鸡公雏，随机平均分为空白组、攻毒组、益生菌组和解毒组。每组3个重复，每个重复8只鸡，试验周期为21 d。统计并比较分析不同组肉鸡体重、采食量、料重比；利用ELISA检测血清生化指标的变化；应用荧光定量PCR法检测空肠组织紧密连接蛋白和炎症因子mRNA表达水平的变化；应用病理组织学观察各组肉鸡肠道结构的变化。结果表明：1）与攻毒组相比，解毒组21日龄肉鸡的体重、平均采食量和平均日增重均显著高于攻毒组（P<0.05）。2）与攻毒组相比，解毒组肉鸡的血清SOD活性、GSH-px活性和MDA含量显著降低（P<0.05）,T-AOC含量极显著升高（P<0.01），各项血清生化指标均显著回调（P<0.05）。3）与攻毒组相比，解毒组肉鸡空肠绒毛形态显著改善，空肠组织中CIT含量极显著升高（P<0.01）,DAO、D-乳酸和IFABP含量均发生极显著降低（P<0.01）。4）与攻毒组相比，解毒组肉鸡空肠紧密连接蛋白相关基因闭锁蛋白1(ZO-1)，闭合蛋白（Occludin）和紧密连接蛋白1(Claudin-1)的mRNA表达水平极显著上升（P<0.01）。5）与攻毒组相比，解毒组肉鸡空肠炎症因子白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达水平均发生极显著回调（P<0.01），白介素1(IL-1)的mRNA表达水平均发生显著回调（P<0.05）。综上，贝莱斯芽孢杆菌和戊糖片球菌联合使用可改善霉变饲料造成的肉鸡生产性能下降，减轻霉变饲料导致的肉鸡肠道形态学改变、屏障损伤与炎症反应。本研究为生产实践中联合使用这2株益生菌作为饲料添加剂防控畜禽霉菌毒素中毒提供理论和实践基础。