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[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 顾有方  倪兆朝  沈永林  盛维银  
研究了来源水牛、黄牛体内的肝片吸虫虫体抗原的氨基酸组分,并对黄牛体内虫体进行先超声裂解后冷浸或先冷漫后超声裂解处理以比较其抗原氨基酸组份的变化。结果表明先超声裂解后冷浸的脱脂和未脱脂的水牛、黄牛虫体抗原氨基酸含量分别为374.053mg·dL~(-1),396.318mg·dL~(-1)和119.958mg·dL~(-1),243.341mg·dL~(-1),水牛虫体氨基酸明显高于黄牛虫体。而先冷浸后超声裂解处理的脱脂和未脱脂的黄牛
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 江善祥  包鸿俊  戎耀方  沈丽琳  
用 HPLC 及~3H-GA 和~3H-GABA 示踪技术,确认了肝片吸虫体内 GABA 及其前体 GA 和降解产物SA.其生物合成与降解的途径与哺乳动物相类似,酶的特性也与哺乳动物相应的酶相似.虫体内的 GABA来源除自身合成外,还能从周围环境中摄取。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 吴佳  包鸿俊  
用高压液相色谱技术(HPLC)和同位素示踪技术确认日本血吸虫体内含有谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)和琥珀酸(SA)。GABA的含量为12.70±3.27μg/g(以虫湿重计)。虫体具有摄取外源性GABA的能力。虫体不能将3H-GIA转化为3H-GABA,也不能将3H-GABA转化为3H-SA。初步表明:虫体内GABA的合成和降解与哺乳动物体内由Glu→GABA→SA的代谢过程不同。
[期刊] 西南农业学报  [作者] 张国武  孟庆玲  乔军  王熙凤  张凯  宁程程  季春辉  才学鹏  
【目的】分析肝片吸虫Legumain蛋白的分子特征、遗传进化及抗原性,评估其作为诊断抗原的潜力。【方法】根据GenBank中已发表的肝片吸虫(Fh)Legumain基因序列设计特异性引物,以Fh总RNA为模板,进行RT-PCR扩增,并将扩增产物克隆到pMD19-T载体中测序,分析其分子特征。将Legumain基因克隆入表达载体pET-32a(+)中,将其转化至Escherichia coli感受态细胞Transetta(DE3)中,IPTG诱导表达并获得纯化的重组蛋白Legumain,进行抗原性分析。【结果】Fh Legumain基因cDNA全长1278 bp,编码425个氨基酸,编码蛋白分子的优势抗原表位主要集中在第73~103、115~137、254~308、319~337、360~375位;1~21位有信号肽,无跨膜区,为亲水性蛋白。【结论】经SDS-PAGE检测,重组Legumain蛋白分子量约为65 kDa,与预期大小相符;Western blot分析表明,重组Legumain可被感染肝片吸虫的绵羊阳性血清特异性识别,证明具有良好的反应原性。小鼠免疫试验证实该蛋白具有良好的免疫原性。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 沈丽琳  陈伟华  史晓丽  包鸿俊  
采用放射受体分析方法测定日本血吸虫体内γ─氨基丁酸(GABA)受体.试验证实:日本血吸虫体内存在GABA受体,其最大结合容量(Bmax)为30.58±10.19fmol/mg蛋白,Kd值为10.72±6.26pmol;Scatchard图曲线下凹,说明GABA受体与配体GABA之间有较大结合容量和较高的亲和力,但其结合又可能存在不均一性和复杂性.
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 黄世乐  
应用间接免疫荧光技术,发现肝片形吸虫头部咽的两侧各有一强的5-羟色胺(5-HT)荧光集落(脑神经节),由其发出的神经干分布于虫体的背腹及两侧,神经干继续发出细小分支直至皮肌层和吸盘等.生殖系统(睾丸、卵巢、子宫、卵模和卵黄腺纵隔等)和消化系统(咽和肠管壁等)亦有5-HT 免疫反应分布.揭示肝片形吸虫体内不仅存在5-HT,而且存在色胺能神经系统,证明了5-HT 为肝片形吸虫的神经递质.
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 顾有方  沈永林  I.Ferre  T.Schnieder  毛鑫智  刘跃兴  彭立斌  
采用粪便检查、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和斑点杂交试验(Dot-hybridization),检测苏皖两个省10县市302农户的307头水牛的粪便、血清及中间宿主小土蜗(Galba pervia),进行水牛肝片吸虫(Fasciola hepatica)感染的调查分析。粪便虫卵呈阳性43头,阳性率为14.01%,安徽为13.61%(18/155),江苏为16.48%(25/152);感染水牛最小年龄为1.5岁,最大为16岁,阳性率随年龄增加而提高;母水牛阳
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 毛鑫智  王丙云  陈龙  杨倩  毛卫华  J.Gonzalez-Gallego  
20头健康、2~3岁、体重300~400kg 雄性去势水牛,经粪便检查和 Dot-ELISA 检测确认为无肝片形吸虫感染。分二系列进行实验。第1系列8头水牛随机分成感染组(5头)和对照组(3头),感染组每天每头口服60个囊蚴,连续20天,共感染1200个囊蚴,从开始感染至实验结束历时26周,研究慢性感染的效果;第2系列12头水牛,分成感染组(9头)和对照组(3头),感染组1次每头经口感染1600个囊蚴,历时
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 沈涛  沈永林  何国声  徐梅倩  顾越星  
用大片吸虫分泌排泄 (ES)抗原免疫BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,经筛选和 3次克隆化培养后获得 2株分泌抗大片吸虫ES抗原单抗的杂交瘤细胞 (F5,F9)。经传代、冻存、复苏培养检测和染色体检查 ,证实其分泌单抗的性质稳定。通过间接ELISA试验证明 ,F5和F9单抗能与大片吸虫、肝片吸虫的ES抗原发生特异性反应 ,而不与它们的虫体抗原反应。SDS PAGE电泳和Western blot显示 ,F5McAb能与ES抗原的相对分子质量为 2 6 0 0 0~ 2 80 0 0的蛋白条带反应 ,而不与其可溶性虫体抗原反应。表明F5McAb有ES抗原特异性 ,是一...
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 马静  邹安革  王新星  常青  滕玉清  王文斌  
以卤虫无节幼体作为试验材料,研究不同强化物质对卤虫体内游离氨基酸(FAA)含量的影响。试验分为4组,分别强化赖氨酸(Lys)、裂壶藻Schizochytrium、赖氨酸加裂壶藻以及空白对照组,试验进行16h,每4h取样1次。结果显示,试验结束时,赖氨酸组的卤虫体内游离Lys含量显著高于其他3个组,且较强化前相比增加了4倍多,裂壶藻组的含量最低。除苏氨酸(Thr)外,赖氨酸组其他游离必需氨基酸以及天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)、甘氨酸(Gly)、酪氨酸(Tyr)含量都显著高于其他3个组。赖氨酸加裂壶藻组,Thr、Ser、Gly、丙氨酸(Ala)、组氨酸(His)和脯氨酸(Pro)含量均有不...
[期刊] 林业科学  [作者] 黄麟  徐旭凌  李超  叶建仁  吴小芹  
松材线虫取食和致病相关基因的鉴定是揭示松材线虫病致病机制的重要研究内容。以松材线虫混合虫体为测试方,线虫卵为驱动方,构建二者差减cDNA文库。文库测序结果经序列拼接、功能注释,共获得松材线虫虫体特异表达的有效EST序列354个,拼接后获得34个重叠群,其中15个重叠群获得明确的功能注释,其中MixC12、MixC25、MixC33分别与过氧化物酶、β-1,4内切葡聚糖酶、锌指家族蛋白有较高的同源性,这些基因被认为与植物线虫的取食和致病性密切相关。RT-PCR分析验证了所获得的差减cDNA的代表性。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 顾有方  毛鑫智  沈永林  J.Gonzalez-Gallego  
经粪便和Dot ELISA检查确认无肝片吸虫感染的 2 0头雄性去势水牛 ,分两系列试验。系列Ⅰ实验中 8头水牛随机分成感染组 (5头 )和对照组 (3头 ) ,感染组每头每天口服 6 0个肝片吸虫囊蚴 ,连续 2 0d ;系列Ⅱ实验中 12头水牛分成感染组 (9头 )和对照组 (3头 ) ,感染组每头一次口服 16 0 0个肝片吸虫囊蚴。在感染前及感染后每周颈静脉采血 ,分离血清 ,测定丙二醛 (MDA)、过氧化物酶 (CAT)、超氧化物歧化酶 (SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)的活力。在系列Ⅱ实验中 ,MDA在感染后 15周内显著高于对照组 ,以后下降 ,至 19~ 2 2周...
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 王丙云  陈龙  毛鑫智  陈继明  Javier Gonzaloz  
为研究水牛抗肝片吸虫的免疫反应机制,选择8头雄性去势水牛经粪便检查和 Dot-ELISA 检测确认无肝片吸虫感染.经2周适应性饲养后,随机分成感染(n=5)和对照组(n=3)。感染组水牛每天每头经口感染60个囊坳,连续20天,共接种1200个囊蚴。每周颈静脉采血,测定外周血的 T、B 淋巴细胞的比例、血清总蛋白含量和组分比例以及抗体(IgG)水平。结果表明:感染组水牛在感染肝片吸虫后第2周开始,T 淋
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 孙理云  包鸿俊  
用灌注法自家兔获取运动正常的日本血吸虫,在含10%灭活胎牛血清的Earle氏缓冲盐溶液(含或不含药物)中37℃培养1h。显微镜下观察其运动性并测量虫长。用放免法测定37℃培养3h的日本血吸虫环腺苷酸(cAMP)的含量。结果表明:5-羟色胺(10-4mol/L)、色胺(10-4mol/L)、阿托品(10-4mol/L)、吡喹酮(10-7mol/L、10-6mol/L)和硝硫氰醚(10-4mol/L)兴奋日本血吸虫;赛庚啶(10-4mol/L)、乙酰胆碱(10-5mol/L、10-4mol/L)和槟榔碱(10-4mol/L)抑制日本血吸虫的运动性;色氨酸(10-4mol/L)对运动性影响不明显。上...
[期刊] 西南农业学报  [作者] 胡小九  李石友  李文学  施忠芬  申时先  李秀枝  
为了解弥渡县牛肝片吸虫感染情况,采用粪便虫卵检查法进行牛肝片吸虫病的流行调查。结果表明,在检查的960头牛中,阳性牛220头,阳性率为22.92%。其中坝区阳性率为14.06%,半山区为28.75%,山区为25.94%;黄牛阳性率为24.58%,水牛为21.25%;阳性牛最小年龄为1.5岁,最大为13岁,阳性率随年龄增长而提高;阳性牛的每克粪便虫卵数(EPG)最高216枚,最低3枚。该调查研究揭示了肝片吸虫病在弥渡县的牛中感染较广泛,尤其是半山区、山区较高。
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