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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
吕英军 倪嘉宁 鲍恩东
为探讨多聚核苷酸(聚肌胞)对新城疫病毒(NDV)的抑制作用,本研究通过聚肌胞对感染NDV的鸡胚成纤维细胞、SPF鸡胚和肉鸡进行了病毒抑制试验。结果显示:125和250μg.mL-1的聚肌胞溶液能明显抑制100倍TC ID50的NDV在鸡胚成纤维细胞上的繁殖;5 mg.mL-1的聚肌胞溶液(每个胚0.1 mL)能明显抑制NDV在SPF鸡胚中的繁殖,减轻NDV对鸡胚生长的抑制作用,降低病毒血凝效价和鸡胚死亡数。聚肌胞对肉鸡抵抗NDV感染试验结果显示,肌肉注射0.01 mg.kg-1的聚肌胞注射液能明显提高治愈率和显效率。但反映细胞活性状态的中性红染色(D570值)随着聚肌胞浓度的增大而变小的结果说...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王君敏 胡元亮 张帆 王德云 赵晓娜 张靖 刘静 赵彪 郝丽华
用氯磺酸-吡啶法修饰当归多糖(CAPS)和枸杞多糖(LBPS),得到4种硫酸化当归多糖sCAPS0.6、sCAPS1.1、sCAPS1.9、sCAPS2.2和4种硫酸化枸杞多糖sLBPS0.7、sLBPS1.1、sLBPS1.5和sLBPS1.9。分别以CAPS和LBPS为对照,采用MTT法比较了这8种硫酸化多糖对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响。结果表明:硫酸化修饰能显著提高当归多糖和枸杞多糖的抗病毒活性,且与硫酸基取代度有一定的相关性。sCAPS2.2、sLBPS1.5、sCAPS1.9和sLBPS1.9的活性较好,可以作为进一步研究的材料。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
丛向明 牛丽 白喜云 武彩红 孙耀贵 贺俊平 白元生 李宏全
【目的】探讨甘草酸二钾体外抗MDV的活性及作用机制。【方法】在体外以鸡胚成纤维细胞为MDV增殖模型,利用MTT比色法、噬斑减少法通过抗病毒试验、病毒复制抑制试验、直接灭活试验来评价甘草酸二钾的抗病毒效果;并通过细胞凋亡试验解释其抗病毒机制。【结果】抗病毒试验结果表明,在安全浓度范围内,甘草酸二钾在体外具有较强的抗MDV的活性,其EC50为(893.5±36.99)μg·mL-1,SI>3.36,最大抑制率达94.4%;在病毒复制抑制试验中,甘草酸二钾可以抑制病毒复制的整个过程;病毒直接灭活试验表明甘草酸二钾可直接杀灭病毒粒子且不呈时间依赖性;细胞凋亡试验结果显示甘草酸二钾能够诱导感染MDV的鸡...
关键词：
甘草酸二钾 MDV 抗病毒 细胞凋亡
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
尚月丽 乔丽平 韩涛 夏继飞 杨德吉
应用微卫星技术对感染马立克氏病毒5 d后的32个鸡胚成纤维细胞(CEF)4号染色体上的20个微卫星标记进行PCR扩增,扩增产物采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染检测。试验结果显示:20个微卫星标记有18个表现出不同程度的微卫星不稳定性,其中ABR0622发生率最高,为37.50%;MCW 0174、ADL0266和ABR0382的发生率较高,均为31.25%。在32组样品中有30个检测到微卫星不稳定性,其中11号样品发生率最高,为45.00%,其次是3号样品为35.00%。结论:CEF感染马立克氏病毒后出现微卫星不稳定性现象。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
周广生 周新民 王涛 羊建平 张步彩 陈琳 王永娟 郭方超
为了研究中药与西药奥司他韦(达菲)抗鸡新城疫病毒效果的差异,用珍珠草、华荠苧2味中药制成注射液,采用鸡胚培养法和红血球凝集(HA)试验,检测中药与西药注射液对鸡新城疫病毒的抑制作用。结果表明,中药注射液对鸡胚无毒性作用,并且从鸡胚死亡数、活胚数和HA滴度等方面比较,中药与西药抗病毒效果无差异。表明二者抗病毒效果相似,均能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中增殖。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杨玉成 田勇 乔健 赵立红 胡永峰 金继昌 董长贵
为评价中药“病毒克”颗粒剂体外抗新城疫病毒(NDV)的活性,采用细胞培养技术,通过细胞病变抑制法和MTT比色法检测“病毒克”颗粒剂在鸡胚成纤维细胞(CEF)中对新城疫病毒增殖的影响。结果表明“病毒克”颗粒剂对CEF的半数中毒质量浓度(TC50)为61.35 mg/mL,抗NDV的半数有效质量浓度(EC50)为3.2 mg/mL,治疗指数(TI)为19.2,“病毒克”颗粒剂对新城疫病毒具有直接灭活作用和阻断其感染CEF的作用,并存在明显的量效关系(P
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈明勇 高齐瑜 郭建华 王彩虹
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孔祥峰 胡元亮 刘家国 张宝康 陈玉库 王德云
将安全浓度范围内的黄芪多糖、当归多糖、蜂胶多糖、淫羊藿多糖、板蓝根多糖、黄芪黄酮、蜂胶黄酮、淫羊藿黄酮、黄芪皂苷和人参皂苷等 10种中药成分分别加入已培养 2 4h、刚形成单层的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中 ,在加药后12 ,2 4 ,36 ,4 8和 6 0h用MTT法测定它们对CEF增殖的影响。结果表明 ,黄芪皂苷、黄芪多糖、板蓝根多糖和蜂胶黄酮主要表现为促进增殖 ;淫羊藿多糖主要具抑制效应 ;其他 5种中药成分在某些浓度和时间点能促进增殖 ,而在某些浓度和时间点则抑制增殖 ,并有一定的量效和时效关系。
关键词：
中药成分 鸡胚成纤维细胞 细胞增殖
[期刊] 华北农学报
[作者]
李红丽 詹丽娥 张伟业 唐娟 陆冰洋 王彩先
以山西省农业科学院畜牧兽医研究所预防兽医研究室克隆的pG-F和pG-HN质粒为模板,PCR扩增麻鸡新城疫病毒SX-1株F基因和HN基因,并以由15个柔性氨基酸构成的柔性短肽作为Linker将F及HN基因片段体外连接,插入pCI-neo真核表达载体,构建麻鸡新城疫病毒SX-1株F基因和HN基因共表达载体pCI-F-HN,并在Vero细胞中转染表达,进行间接免疫荧光检测。结果显示,麻鸡新城疫病毒SX-1株F-HN组合基因在Vero细胞中得到较高水平的表达,在荧光显微镜下能够观察到较强的荧光,说明F-HN组合蛋白具有良好的反应原性。为下一步研究高效亚单位基因工程苗奠定基础。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
任宇皓 胡元亮 刘家国 张宝康 宋大鲁
将黄芪多糖 (APS)、淫羊藿多糖 (EPS)、淫羊藿总黄酮 (EF)分别与新城疫病毒 (NDV)Ⅰ、Ⅳ系以 3种顺序加入到培养 2 4h的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中 ,即先加中药后接种病毒、先接种病毒后加中药、病毒和中药混合感作后同时加入。于病毒接种后 72h测定NDVⅠ系的半数组织培养感染剂量 (TCID50 )和NDVⅣ系的血凝效价 ,以评价 3种中药成分对NDV感染细胞的影响。结果表明 ,APS和EPS仅在先于病毒加入时对NDV有抑制作用 ,而EF无论以何种方式给药均呈抑制作用。提示它们有一定的抗病毒作用 ,且与其浓度有相关性
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王华夏 顾峰 廖瑛 茅翔 丁铲 范红结
[目的]本文旨在探究新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染过程中细胞因子显著上调的机制。[方法]NDV感染He La细胞,用RT-PCR法检测IFN-β、IL-6、IL-8 mRNA水平。Western blot分析和免疫荧光分析检测NDV对双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)与NF-κB信号通路的影响。[结果]与未感染组相比,IFN-β、IL-6、IL-8 mRNA水平显著上调。NF-κB信号通路在感染后1224 h被激活,转录因子p65入核,而使用NF-κB信号通路抑制
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王宏艳 胡兰 张婷婷 袁亚琦 郝文博 杨晓宇
采用RT-PCR法对海兰鸡MyoD全长cDNA序列进行扩增,克隆、测序后,构建真核表达载体pEGFP-N1-MyoD,脂质体瞬时转染鸡胚成纤维细胞,用荧光显微镜、RT-PCR和SDS-PAGE电泳法检测MyoD蛋白表达情况。结果表明,构建的真核表达载体pEGFP-N1-MyoD能成功转染鸡胚成纤维细胞;荧光显微镜观察可见绿色荧光;RT-PCR可见目的条带;SDS-PAGE电泳证明表达的蛋白相对分子质量为33KD,该结果为研究MyoD蛋白的功能奠定了试验基础。
关键词：
MyoD 转染 真核表达
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
宋秀红 赵化阳 高晓磊 刘思当
将正常免疫的AA肉仔鸡于10、20及30日龄时,按抗体水平的高低分成2组(H组、L组),接种新城疫病毒建立人工致病模型,对攻毒鸡群的症状、病理变化及抗体水平进行动态观察。结果发现,日龄及抗体水平不同的肉仔鸡均表现非典型新城疫,淋巴组织广泛性坏死是其主要病变,L组比H组病情严重。发病率及病理变化的程度10日龄时攻毒低于20与30日龄攻毒,各感染组鸡的抗体水平均呈先迅速下降后逐渐回升的消长规律,但L组抗体水平始终低于H组。试验结果表明,日龄及抗体水平与抵御新城疫病毒的攻击能力密切相关。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李彦美 马静 张志伟 李希阳 文渚媛 徐江昊 陶宁
【目的】研究丁香酚诱导癌相关成纤维细胞(CAF)的凋亡表现及其相关机制,为丁香酚的开发利用提供参考。【方法】用0(CK),30,60,90,120μmol/L丁香酚处理正常成纤维细胞(NF)24 h后,用MTT法检测细胞活力。用0(CK),30,60,90,120,150,180μmol/L丁香酚处理CAF细胞24 h后,用MTT法检测细胞活力。用0(CK),30,60μmol/L丁香酚处理CAF细胞24 h,用Annexin V-FITC和PI双染色法对细胞染色后进行流式细胞分析。用60μmol/L丁香酚处理CAF细胞0(CK),15,30,60,120 min,用Western blotting法检测凋亡相关蛋白表达水平的变化。【结果】30～120μmol/L丁香酚处理对NF细胞活力无显著影响;30～180μmol/L丁香酚处理对CAF细胞活力有显著或极显著的抑制作用,丁香酚对CAF细胞的半数抑制浓度为84.47μmol/L。60μmol/L丁香酚能够显著诱导CAF细胞凋亡。凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、P-P53、Caspase 9、Cleaved Caspase 3、Cytochrome C参与了丁香酚诱导的CAF细胞凋亡调控过程。【结论】丁香酚对CAF细胞有抑制作用,其作用可能是通过P53蛋白途径和内源性凋亡途径实现的。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李双洁 卢宇 张金秋 苗晋锋 侯继波
［目的］鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）感染会引起鸡的免疫抑制，给养禽业带来巨大危害。本文旨在探讨鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）蛋白ＶＰ４和ＶＰ５在病毒感染引起的免疫抑制中的作用。［方法］构建ＶＰ４和ＶＰ５蛋白的真核表达质粒并转染Ｖｅｒｏ细胞，再用ＩＢＤＶ ＣＶ０３病毒株感染转染后的细胞，Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ方法检测细胞中模式识别受体及下游转录因子的表达；ｒｔ－ｑ ＰＣｒ检测细胞因子及抗病毒基因的表达。［结果］ＩＢＤＶ ＣＶ０３病毒感染Ｖｅｒｏ细胞后，ＶＰ４蛋白在一定程度上能够提高ｔｌｒ３、ｒＩＧ－Ⅰ蛋白含量，但差异不显著；ＶＰ５对ｔｌｒ３、ｒＩＧ－Ⅰ等介导的天然免疫通路有一定的抑制作用；过．．．
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