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[期刊] 华北农学报
[作者]
朱蕊蕊 高亦珂 张启翔
通过对AFLP反应体系的主要的四个影响因素:Mg2+、dNTPs、Taq酶、引物进行四水平筛选试验,利用三种耧斗菜Aquilegia parviflora、A.viridiflora、A.vulgaris优化了耧斗菜属的AFLP反应体系,采用64对引物组合对三种耧斗菜进行了PCR扩增和聚丙烯酰胺电泳检测。其中9对引物组合表现出较高的稳定性、清晰度和多态性。初步建立了耧斗菜的AFLP反应体系,得到质量比较好的AFLP胶图。从而为AFLP分子标记技术应用于耧斗菜属的研究奠定坚实基础。
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
潘晓芳 孙雪阳 黄寿先 周传明 陈翠湖 闭冬玲
以八角属部分树种和八角品种共56个样品为试验材料,利用AFLP分子标记技术进行遗传多样性分析。采用改良的CTAB法提取总DNA,通过对酶切-连接反应、预扩增和选择性扩增反应过程中的关键因素进行优化,建立了适合八角属植物的AFLP分子标记体系。该体系应用于八角AFLP研究,能够得到高质量的总DNA和清晰的遗传标记图谱,研究结果为八角种质资源分子生物学研究提供技术支撑。
关键词：
八角属 分子标记 AFLP 反应体系
[期刊] 西南农业学报
[作者]
东金华 樊新忠 董辉 乔西波 孙宗国 吴红超 徐凯勇
以法国伊普吕肉兔的6个品系、新西兰、加利福尼亚兔共8个种群为试材,建立了肉兔扩增片段长度多态性(AFLP)分析体系,对其分析过程中DNA提取、双酶切、连接、预扩增、选择性扩增、银染效果进行了确立。由72种引物组合中筛选出了15种引物组合,建立了肉兔的AFLP指纹图谱。条带清晰可辨,扩增信号强,无背景干扰。
关键词：
肉兔 AFLP 分析体系 建立与优化
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
明军 张启翔 晏小兰 邱丽娟
采用改进的SDS DNA提取方法从梅花的嫩叶和老叶中提取获得总DNA .所得DNA样品的OD2 6 0 OD2 80 值在1 7～ 1 9之间 ,琼脂糖凝胶上主带清晰、较少降解、样品纯度高、蛋白去除干净且得率高 .该体系对原提取程序作了多处简化 ,使操作简便、快捷、高效 ,适合于梅花DNA提取 ,所提取的DNA样品不含PCR反应抑制剂及其他酶反应抑制剂 ,可被限制性内切酶MseⅠ和EcoRⅠ完全酶切 ,适合AFLP PCR反应应用 ,得到清晰的指纹式样 .
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王大玮 李煜 周玮 李周岐
【目的】建立并优化适合杜仲的AFLP技术体系,为进一步构建其遗传图谱及开展分子标记辅助育种奠定基础。【方法】对杜仲基因组DNA提取方法、酶切与连接体系、预扩增和选择性扩增程序的影响因素进行分析,并对适合杜仲AFLP分析的引物组合进行筛选。【结果】模板DNA的提取采用改进的CTAB法,酶切模板DNA用量500 ng,酶切时间6 h,连接反应时间6 h,预扩增产物最适稀释倍数30倍。同时筛选出E-AAG+M-CAA,E-AAG+M-CAT,E-AAG+M-CTA,E-AAG+M-CTG,E-ACA+M-CAA,E-ACA+M-CTA,E-ACC+M-CTG共7对适合杜仲AFLP分析的引物组合。【结...
关键词：
杜仲 AFLP 体系优化 引物筛选
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
顾翠花 王守先 张启翔
以采自广西、云南和河南等地的紫薇属Lagerstroemia植物紫薇L.indica,南紫薇L.subcostata,福建紫薇L.limii和桂林紫薇L.guilinensis叶片为材料,利用改良CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法提取叶片基因组DNA,获得了高质量的紫薇叶片DNA,并以其基因组DNA为模板进行了酶切连接,利用酶切连接的产物稀释一定倍数作为预扩增的模板,最后以稀释一定倍数的预扩增产物进行选择性扩增,进行紫薇和南紫薇的AFLP(扩增片段长度多态性)银染反应体系的优化。AFLP体系中每一步反应都设置了不同的反应体系,采用了160对引物作为初选引物,筛选出了10对适合紫薇基因组扩增的引...
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
周生财 黄华宏 童再康 吴小林
采用核酸电泳缓冲液(TNE)结合十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)提取的高质量楠木Phoebe基因组脱氧核糖核苷酸(DNA)可满足扩增片段长度多态性(AFLP)分析的要求。利用浙江楠Phoebe chekiangensis基因组DNA优化建立楠木AFLP反应体系如下:酶切反应300 ng基因组DNA,0.3μL缓冲液4,0.3μL牛血清白蛋白(100×BSA),50nkat EcoRΙ,25 nkat MseΙ,双蒸水加至30.0μL放置37℃恒温箱酶切4 h,聚合酶链式反应(PCR)仪上65℃15min;连接反应20.0μL酶切产物,2.5μL T4缓冲液,666.8 nkat T4连接酶,5...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
周明芹 杨琴军 陈龙清
为了建立蜡梅AFLP-银染的优化体系,采用EcoRI和MseI 2种限制性内切酶酶切组合,对该2种酶的用量、酶切时间、预扩增与选择扩增中的Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶的用量、引物的浓度以及预扩增产物的稀释倍数等因素进行了多水平的筛选,同时探讨了温度及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的电流强度等因素对胶图的影响。结果表明:用5 U限制性内切酶酶切4 h便能在40μL的反应体系中完全切割500 ng的总DNA,酶切连接产物稀释10倍后在含有1.5 mmol/L Mg2+1、U Taq、预扩增引物E+A和M+C分别为40 ng的20μL反应体系中进行预扩增,将预扩增产物稀释30倍后在含有1.5 ...
[期刊] 华北农学报
[作者]
焦浈 孙营 李娜 秦广雍
以禾本科作物小麦为出发材料,通过优化AFLP选择性扩增步骤的4个限制性因素:Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度和预扩产物稀释倍数,确立AFLP最佳反应体系为:预扩增产物稀释20倍吸取2μL做为选择性扩增模板,混合1.5 mmol/L MgCl2,0.2 mmol/L dNTPs,0.4μmol/L选扩引物1、U Ex Taq进行选择性扩增。应用该体系分析水稻和玉米两大类禾本科作物基因组DNA样品,同样取得理想结果,扩增出清晰可辨且适量的电泳条带。该技术体系为AFLP分子标记技术在禾本科作物遗传分析中的广泛应用奠定了基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
梅燚 侯雷平 崔艳玲 陈海丽 孟淑春
提取菠菜嫩叶DNA,运用改良CTAB法提取6份菠菜品种的DNA,对AFLP反应体系的DNA用量、酶切连接、预扩、选扩等试验条件进行了优化分析,初步建立适合于菠菜作物的AFLP反应体系。结果表明:①在PCR仪中酶切的效果比水浴的要好,酶切反应对酶切时间和DNA的浓度要求不敏感。②菠菜AFLP预扩选扩体系的反应体积为20μL,Mg2+(25mmol/L)1.2μL,dNTPs(2.5mmol/L)1.6μL,Taq-polymerase(5U/μL)0.2μL最佳。为菠菜AFLP分子标记的品种亲缘关系鉴定和遗传育种等提供一定的理论基础。
关键词：
菠菜 AFLP 影响因子
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
祝军 王涛 李光晨 赵玉军 张文 周爱琴
以 12个苹果砧木基因型为试材 ,建立了扩增酶切片段长度多态性 (AFL P)分析体系。对其分析过程中 DNA提取、双酶切、连接、预扩增、标记和选择性扩增的效果进行了检测。用 P32 M6 4引物构建了供试苹果砧木基因型的 AFL P指纹图谱。该指纹图谱拥有扩增条带 10 5条 ,多态性带 6 7条 (占 6 3.8% ) ,条带清晰可辨 ,扩增信号强 ,无背景干扰。讨论了 AFL P分析的影响因素
关键词：
AFLP分析 DNA指纹图谱 苹果
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
季士治 王伟继 雷霁霖 孔杰
本研究构建了大菱鲆扩增片段长度多态性(AFLP)分析体系,对DNA提取、双酶切反应、连接反应、预扩增反应、选择性扩增反应和银染等步骤进行了分析。结果表明,用EcoRI/MseI双酶切、核心序列加3个选择性碱基的选择性扩增引物、1∶6(w∶w)的EcoRI端与MseI端选择性扩增引物比和20μl选择性扩增体积,可得到十分稳定的结果。所得产物经电泳和银染后可获得条带清晰、背景干扰小的图像。该体系的构建为AFLP技术在大菱鲆相关研究中的应用奠定了基础。
关键词：
AFLP 大菱鲆 反应体系
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李升康 熊远著 邓昌彦
以大白等 6个猪品种为试验材料 ,建立了家猪扩增酶切片段长度多态性 (AFLP)分析体系 ,对其分析过程中DNA提取、双酶切、连接、预扩增、选择性扩增、银染效果进行了检测。用E39M 4 8引物组合构建了供试猪的AFLP指纹图谱。条带清晰可辨 ,扩增信号强 ,无背景干扰。
关键词：
AFLP DNA指纹 猪
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
蒋燕锋 斯金平 黄华宏 程龙军
以厚朴Magnolia officinalis为材料,通过对扩增片段长度多态性(AFLP)反应体系中的酶切模板用量、扩增条件等几个方面进行优化,建立了较为理想的厚朴AFLP反应体系。结果表明:①采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)硅珠法提取的DNA质量较好,适用于AFLP分析。②酶切的基因组DNA以400ng为宜;预扩增产物的稀释倍数以30倍为宜;20.00μL选扩反应体系中Mg2+最佳浓度为2.00mmol·L-1,三磷酸脱氧核苷酸(dNTPs)最佳浓度为0.225mmol·L-1,Taq DNA聚合酶最佳用量为16.67nkat时,扩增带清晰且稳定,扩增效果较好。旨在为研究厚朴天然种群的遗...
关键词：
中草药 厚朴 扩增片段长度多态性 中药材
[期刊] 华北农学报
[作者]
武峻新 畅志坚
以南瓜矮生和蔓生的自交系为材料,通过对影响南瓜AFLP反应体系中的关键因素(如DNA的提取方法、酶切和连接反应时间、预扩增产物稀释倍数和银染检测方法等)进行研究,结果表明,采用加入PVP和β-巯基乙醇后的改良CTAB提取法获得的南瓜嫩叶基因组DNA质量较好;5.5 h可以满足酶切和连接反应;酶切连接产物稀释5倍,预扩增产物稀释30倍,可以满足试验要求。应用该体系,对96对引物进行筛选,在南瓜矮生和蔓生自交系间获得的引物扩增出了重复性好、清晰的南瓜矮生和蔓生的自交系多态性条带。为进一步进行南瓜矮生基因定位奠定了良好的基础。
关键词：
南瓜 矮生 AFLP体系
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