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[期刊] 渔业科学进展
[作者]
韩璐璐 杨成年 李芳 阳龙江 唐征县 彭小倩 朱成科 吕光俊
为确定患病翘嘴鲌的病原，本实验从患病鱼肝脏中分离到1株优势菌株CQ200825，对该菌进行形态学观察、生理生化鉴定、16S rRNA和gyrB基因序列分析、人工感染实验、毒力基因检测、组织病理观察以及药敏试验。结果显示，菌株CQ200825为短杆状的革兰氏阴性菌，通过16S rRNA和gyrB基因序列比对、系统进化树的构建、生理生化特性确认为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。人工感染实验组与自然发病鱼都表现为鳍条基部出血、肝脾肿大、有腹水等症状，同时从人工感染濒死鱼体内分离到与菌株CQ200825理化及分子特性一致的优势菌株，表明CQ200825为患病翘嘴鲌的病原菌，并计算出菌株CQ200825对翘嘴鲌的半数致死量为2.7×10~(6) CFU/mL。毒力基因检测结果显示，菌株CQ200825携带外膜蛋白(ompA)、溶血素(hlyA)、热稳定性肠毒素(ast)和细胞毒性肠毒素(act) 4种毒力基因。组织病理观察发现，患病翘嘴鲌的肝、脾、肾和肠均有不同程度的病变，即肝细胞肿胀、坏死、血管中血细胞凝集，脾脏红白髓界限不清、胞核有轻微肿胀，肾小管上皮细胞发生颗粒变性，肠绒毛大部分坏死脱落。药敏试验结果表明，菌株CQ200825对多西环素等17种抗菌药物高度敏感，对复方新诺明等4种抗菌药物中度敏感，对阿莫西林等12种抗菌药物表现为耐药。本研究可为翘嘴鲌维氏气单胞菌病的诊断与防治提供参考依据。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
夏飞 梁利国 谢骏
从患病的异育银鲫(Carassius auratus gibelio)肝脏中分离得1株优势菌DF-1。将菌DF-1进行人工回感试验,其患病症状同自然发病症状,证明其对鲫有致病性。该菌的形态特征、主要理化特性、16S rRNA序列测定结果及系统发育树的构建均表明其为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。药敏试验结果表明,该菌对甲哌利福霉素、链霉素、卡那霉素、庆大霉素、四环素、阿洛西林、氟苯尼考等12种药物敏感,对青霉素、苯唑西林、氨苄西林、罗红霉素、克林霉素等15种药物表现出耐药性。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
杨昆明 党瑞 谢志胜 马江霞 段成任 郭爱民 岳城
新疆乌鲁木齐本地某养殖场锦鲤(Cyprinus carpio)突然大批死亡,在排除寄生虫感染后,怀疑是由细菌引起。为明确引起锦鲤大批死亡的致病菌,本实验对病鱼肝脏、肠道、肾脏等组织进行细菌分离纯化。通过革兰氏染色、微量生理生化反应及分子生物学鉴定,成功分离出两株菌,命名为CK5和CK9。两株菌都为革兰氏阴性短杆菌,在30℃正常生长,能利用葡萄糖、乳糖、纤维二糖,并且V-P、明胶、水杨苷实验阳性;PCR扩增其gyr B基因并测序,BLAST比对后,两株菌与维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)的
[期刊] 水产学报
[作者]
滕建 陈红菊 薛良义 李岩 路广金 周敏 张冲 季相山
为研究乌鳢诺卡氏菌病的致病机理，本实验通过病原分离鉴定、组织病理学和基因表达水平分析对病原菌的致病性、药物敏感性及乌鳢的免疫抗病性进行了研究。结果显示，患病乌鳢主要感染了命名为SDAT 0011病原菌，通过菌落形态观察、革兰氏染色鉴定、16S rRNA鉴定、诺卡氏菌特异序列扩增鉴定、生理生化鉴定结果均显示，该病原菌为鰤诺卡氏菌。将分离的SDAT 0011感染健康乌鳢后，1 × 10~(5 )～1 × 10~(8 )CFU/mL注射组的死亡率均为100%，感染乌鳢出现明显的诺卡氏菌病症状，如内脏出血，肝脏、脾脏和肾脏中有大量大小不等的结节，组织病理切片进一步检测发现，结节分界清晰，结节中有大量的淋巴细胞、受损或死亡的组织细胞。药物敏感性实验发现，鰤诺卡氏菌对利福平等抗生素较为敏感，对青霉素等具有较强的抗性。基因表达分析显示，在感染初期（48 h）及中后期，Toll样受体2（TLR2）和Toll样受体13（TLR13）在脾脏和头肾的表达水平显著上调，而趋化因子受体9（CCR9）在脾脏和头肾中显著下调，这表明乌鳢Toll样受体和趋化因子受体信号通路可能在其抵抗鰤诺卡氏菌感染中起重要作用。本文为乌鳢诺卡氏菌病的治疗及其致病机理研究提供了重要的基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
葛阳杨 朱军莉 刘丽 任奕婧
为鉴别大黄鱼腐败菌气单胞菌的致腐能力,采用生理生化和分子方法(16S r RNA)鉴定冷藏大黄鱼货架期终点不产H2S的菌株。分析菌株在体外培养条件下的生长、胞外酶活性、三甲胺(TMA)和生物胺形成的腐败表型,将菌株接种在灭菌鱼汁中测定其致腐能力。结果显示,分离株AE03和AE04在037°C及060的盐度下生长良好,在4和25°C条件下AE03菌株的生长速率显著高于AE04菌株。2株细菌不产H2S,能还原氧化三甲胺(TMAO),分解尿素和液化明胶,氧化酶、赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸水解酶等都呈阳性,能利
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘晓丹 肖自东 孙威 李席席 周一凡 张晓君
根据NCBI已发表的维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)促旋酶B亚单位基因gyrB和编码细菌RNA聚合酶σ70因子基因rpoD的保守序列设计引物,建立了一种快速检测青虾源维氏气单胞菌的双重PCR检测方法。结果显示:青虾源维氏气单胞菌gyrB和rpoD基因PCR扩增产物大小分别为815 bp、554 bp,而对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、哈维弧菌(Vibrio harveyi)、副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)、需钠弧菌(Vibrio natriegens)、非O1霍乱弧菌(non-O1 Vibrio cholerae)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)扩增结果皆为阴性;灵敏性试验结果显示该方法检测到的最低菌体DNA量为1.8×10~(-2) ng/μL,且10份送检样本检测结果与传统细菌分离鉴定结果相一致。结果表明,双重PCR检测方法特异性好、灵敏性高,适用于青虾源维氏气单胞菌的快速检测。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
晋怀远 刘耀宽 高晔 夏苏东 陈四清 莫照兰 边力 李杰
2018年和2019年，山东省烟台市蓬莱市一养殖场工厂化养殖的绿鳍马面鲀(Thamnaconus septentrionalis)和许氏平鲉(Sebastes schlegeli)发病死亡，主要症状为嘴部溃疡、红肿和出血。从发病鱼内脏中均可分离到大量形态一致的优势菌，分别命名为2018TS-1和2019SS-1，分离菌株经16S rRNA测序、生理生化鉴定和vapA基因分析确定为杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种(Aeromonas salmonicida subsp. masoucida)。人工感染实验证明，2018TS-1和2019SS-1分别能引起绿鳍马面鲀和许氏平鲉的死亡，被感染鱼呈嘴部红肿症状，与自然发病症状一致，其半数致死量分别为1.78×10~(5)和0.89×10~(5) CFU/尾。本研究首次报道了国内工厂化养殖绿鳍马面鲀和许氏平鲉感染杀鲑气单胞菌的病例，是目前人工养殖绿鳍马面鲀的首个疾病报道，也是继大西洋鲑(Salmo salar)、大菱鲆(Scophthalmus maximus)和裸盖鱼(Anoplopoma fimbria)等品种后，在山东省海水养殖鱼类中再次发现杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种的感染，本研究结果丰富了杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种的感染宿主范围，也为绿鳍马面鲀和许氏平鲉养殖过程中病害防控提供了依据。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
程心怡 孙正祥 苏应兵 周燚
为筛选对维氏气单胞菌(Aeromonas Veronii)有潜在抑菌作用的菌株，本研究从湖北公安县泥鳅养殖池塘底泥中分离一株细菌J2-2，对其特性进行了研究，并对抑菌活性物质进行了初步分析。结果显示菌株J2-2为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，具有抑菌广谱性，对米尔伊丽莎白菌(Elizabethkingia miricola) 、嗜水气单胞(A. hydrophila)等6种水产病原菌的抑菌直径在9.6～29.5 mm。菌株J2-2的抑菌物质具有较好的酸碱稳定性、热稳定性和蛋白酶K处理的稳定性。电镜结果显示菌株J2-2的发酵产物对维氏气单胞菌的细胞膜结构具有破坏作用。通过LC-MC分析该拮抗细菌可产生至少15种不同的脂肽类化合物如杆菌霉素等。药敏试验结果显示，菌株J2-2除了对氨苄西林、青霉素具有耐药性，对克林霉素中度敏感，对大多数抗生素高度敏感。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
余文杰 陈观水
【目的】对具有典型溶血性病征的染病鲤鱼进行病原菌分离纯化鉴定,并研究其对寄主感染的解剖病理学特征。【方法】采用营养琼脂平板划线方法从染病鲤鱼肝脏样本中分离得到病原菌菌株FAH5,使用VITEK-32全自动细菌分析仪进行其生理生化特性探讨,初步鉴定为嗜水气单胞菌。然后,采用嗜水气单胞菌FAH5人工感染健康鲤鱼,并通过解剖分析其器官病变情况。【结果】感染嗜水气单胞菌FAH5后,鲤鱼体表粘液增加,分泌物增多,鳍部和腹部泛红,鳃部出现腐烂现象,并充血发黑。解剖后腹腔和内脏有出血点,肝脏,肾脏,脾脏等器官病理变化以
关键词：
鲤鱼 嗜水气单胞菌 分离鉴定 解剖病理
[期刊] 淡水渔业
[作者]
汤环宇 钱且奇 陈圳 徐静雯 朱玉洁 许文静 姬进宝 高策 张晓君
为了探究江苏省泗洪县多家养殖场克氏原螯虾(Procambarus clarkii)出现暴发性死亡的病因，本研究以濒死的克氏原螯虾进行病原检测分析，从濒死虾肝胰腺中分离到优势生长菌(菌株编号CPA2020),经对分离菌进行致病性、形态与生理生化特征及gyrB基因同源性与系统发育分析，结果表明引起克氏原螯虾暴发性死亡的病原为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii),人工感染实验结果表明分离菌CPA2020对克氏原螯虾具有较强的致病性，LD_(50)为6.31×10~5 CFU/mL。组织病理学观察发现克氏原螯虾的肝胰腺与肠道组织出现严重的病理损伤，肝细胞裂解，空泡化严重，部分肝细胞坏死，肠壁结缔组织萎缩，皱嵴减少，肠上皮细胞坏死，与自然患病虾的病理变化相同。毒力基因检测表明分离菌CPA2020携带lip、hly、flgN、ompA、flgM、flaH、aha和flgA 8种毒力基因。此外分离菌CPA2020可分泌卵磷脂酶、明胶酶和溶血素。耐药谱测定结果显示，该菌对链霉素、万古霉素、环丙沙星等12种药物耐药，对头孢唑林、克拉霉素等9种药物中介，对头孢呋辛、左氟沙星、氨曲南等13种药物敏感。
[期刊] 水产学报
[作者]
肖双燕 韦冬冬 刘明珠 黄静 余庆 蒙兰丽 李鹏飞
为探明2022年5月引起广西南宁某养殖基地牛蛙暴发疾病的原因。本研究从患病牛蛙肝脏、脾脏、肾脏和肠道中分离优势菌，采用形态学观察、生理生化实验、16S rRNA基因序列测定、系统发育学分析进行鉴定。为确定该菌株的致病机理，对该菌株进行了人工感染实验、组织病理学观察、毒力基因检测、药物敏感性实验及耐药基因检测。结果显示，在患病濒死牛蛙的肝脏、脾脏、肾脏、肠道均分离到单一的优势菌株，将从肠道分离得到的一株优势菌命名为NFCF-02，经鉴定为弗氏柠檬酸杆菌。该菌株携带viaB、ompX、ureE、ureD、ureG、ureF这6种毒力基因，对牛蛙的半数致死浓度为3.12×10~(6) CFU/mL，发病临床症状为肝脏变黄、花肝、肝脏坏死；肾脏充血发红、胃表面有血丝以及肠道呈红色和血脓充塞肠道的症状。组织病理学观察发现其肝细胞变性坏死，肝索排列紊乱；肾小管上皮细胞肿胀坏死、严重区域肾小管崩解、坏死；脾脏中央静脉扩张淤血，含铁血黄素、色素细胞增多；肠黏膜脱落，肠上皮细胞坏死脱落，杯状细胞坏死。药敏实验结果显示，分离菌株NFCF-02对新霉素、多粘菌素B、头孢拉定、多西环素4种抗菌药物敏感，对林可霉素等14种抗菌药物已产生耐药性，携带gyrA、Sul1等7种耐药基因。研究表明，弗氏柠檬酸杆菌对牛蛙具有高致病力，可引起肝脏和肠道等多器官组织的病理损伤最终引发机体的损伤甚至死亡。本研究首次从组织病理学分析和毒力因子携带情况角度确定弗氏柠檬酸杆菌对牛蛙的致病力，可为养殖牛蛙弗氏柠檬酸杆菌病的诊断和药物防控提供参考依据。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
郭松林 冯建军 熊静 关瑞章
采用从鳗鲡分离的嗜水气单胞菌进行人工感染试验,以探讨感染后不同时期嗜水气单胞菌在欧洲鳗鲡肝脏、肾脏和肠道内的定位和由此引起的组织病理学变化。将细菌分2次对鳗鲡进行肌肉注射。第1次采用每克体质量103~107cfu的不同剂量注射以确定该菌的半数致死量,结果表明其半数致死量为5×104cfu/g。第2次以每尾鱼1×107cfu的剂量注射欧洲鳗鲡,此后分别在注射后6、24、48 h采集鳗鲡的肝脏、肾脏、肠道进行组织病理学和免疫组织化学定位研究。结果表明:3个时期的临床症状和病理变化存在一定的差别,鳗鲡早期无明显病理变化,而后期主要表现为败血症症状;鳗鲡肾脏组织的病理变化较其他脏器明显,主要表现为肾小...
[期刊] 水产学报
[作者]
姜虎成 李润波 赵彦华 徐晓雁 孙梦玲 夏爱军 薛晖
为确定越冬期内江苏多地异育银鲫暴发性死亡的原因，本研究利用高通量测序比较了健康样品和患病样品的微生物群落多样性和结构组成的差异，分析了异育银鲫病害暴发过程中的细菌类型及特性。结果显示，在属水平上，患病样品中黄杆菌属丰度最高。在种水平上，患病样品中嗜冷黄杆菌的丰度最高，分别达到63.01%和61.31%，显著高于健康组的1.55%。根据微生物群落特征分析结果，从患病样品体表的病灶处分离出优势病原菌NJ01，通过细菌形态学、生理生化分析、16S rDNA序列比对确定NJ01菌株为嗜冷黄杆菌。人工感染NJ01菌株14 d后，1.7×10~6和1.7×10~7 CFU/mL两组的死亡率达到100%，感染症状和自然发病症状一致。组织病理学观察发现，病鱼的肌细胞坏死，间质中充满了淋巴细胞；肝脏中细胞溶解坏死，细胞核消融；在脾脏中发现脾细胞散在坏死，伴随着充血的症状；肾小管上皮脱落，肾间质存在大量淋巴细胞。药物敏感实验结果显示，NJ01菌株对头孢西叮、头孢哌酮、庆大霉素和克拉霉素等敏感。研究表明，优势菌NJ01是致病菌，可通过扰乱机体正常的免疫和代谢功能导致疾病的发生。本研究首次报道了嗜冷黄杆菌在异育银鲫中的致病性，这将为大宗淡水鱼“越冬综合征”的药物防治及其致病机理研究提供参考依据。
[期刊] 水产学报
[作者]
徐晓津 徐斌 王军 苏永全 张之文 陈心
从患病大黄鱼病灶中分离出病原哈维氏弧菌,并人工回接感染大黄鱼,病鱼出现典型的皮肤溃疡症。测定大黄鱼血液各项指标发现,病鱼单核细胞、嗜中性粒细胞、血栓细胞百分率明显下降,而淋巴细胞百分率增加,均呈极显著差异(P<0.01)。研究结果说明,病鱼肝脏...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
曹成易 汪开毓 王玲 黄小丽
从皮肤溃烂的大西洋鲑(Salmon salar)肌肉、肝、肾分离到一致病性的菌株(AB080226),经人工感染实验证实其为该病的病原菌,研究了该菌的形态、生理生化特征并对其16SrDNA序列进行了在线Classifer和Blast分析。结果显示:该菌为革兰氏阴性杆菌,葡萄糖氧化发酵阳性,氧化酶检测阳性,0%NaCl生长;能利用甘露醇,不具运动性,能发酵麦芽糖,葡萄糖产酸阳性,精氨酸双水解酶阳性,苯丙氨酸脱氨酶阴性;该菌属于气单胞菌属的细菌,在系统发育树上与杀鲑气单胞菌形成一个簇群,同源性高达99.9%以上。综合形态学、生理生化特征及16SrDNA序列鉴定其为杀鲑气单胞菌(Aeromonas ...
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