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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
韩悦 任洪杰 翟笑雨 徐启江
以羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)野生型及其在选育过程中发现的2种花瓣数量变化的突变体品种为试材,通过RACE方法克隆了AGL6基因的同源基因,命名为BoaAGL6,并用半定量RT–PCR和实时荧光定量PCR分析了BoaAGL6在3种不同花型的羽衣甘蓝各类花器官的表达模式。结果表明:克隆的BoaAGL6基因长999 bp(GenBank登录号为KC984301),开放阅读框长759 bp,编码252个氨基酸;系统发育分析表明,BoaAGL6基因属于AGL6–like进化系;半定量RT–PCR和实时定量RT–PCR结果表明,BoaAGL6基因具有较宽泛的表...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
姚悦梅 任杰 山溪 戴忠良 张振超
【目的】探究羽衣甘蓝裂叶表型形成的分子机制，研究BoLMI基因对裂叶形成的作用。【方法】以裂叶羽衣甘蓝DH系为试验材料，利用同源克隆技术，成功获取基因完整的cDNA序列，将其命名为BoLMI。【结果】序列分析发现，BoLMI基因全长531 个碱基对，共编码176个氨基酸，其蛋白分子量为20 789.35 Da，理论等电点为7.24。根据Pfam保守结构域分析，BoLMI蛋白包含homeobox保守结构域。系统发育分析结果显示，羽衣甘蓝的BoLMI基因与甘蓝型油菜以及结球甘蓝的BoLMI基因同属于一个分支，亲缘关系较近。BoLMI蛋白是位于细胞核内的可溶性蛋白，包含1个跨膜结构域，无信号肽序列。qRT-PCR分析表明，BoLMI基因在裂叶羽衣甘蓝的幼苗期表达水平较高，在莲座期表达水平较低；在羽衣甘蓝莲座期，裂叶品种不同部位叶片BoLMI基因的表达水平均高于圆叶品种，其中在第1片叶的表达量最高。裂叶品种和圆叶品种不同叶片BoLMI基因的表达量差异显著。【结论】推测BoLMI基因在羽衣甘蓝裂叶形成中起重要作用，为加速羽衣甘蓝叶形育种提供了理论基础。
关键词：
羽衣甘蓝 BoLMI基因 克隆 表达分析
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李慧峰 贾厚振 董庆龙 冉昆 王宏伟
【目的】克隆‘鲁星’桃（Ｐｒｕｎｕｓ Ｐｅｒｓｉｃａ ｖａｒ．ｎｅｃｔａｒｉｎａ‘Ｌｕｘｉｎｇ’）中参与调控营养和生殖生长的ＭａＤｓ－ｂｏｘ（ＰＰ ＭａＤｓ）基因，研究其在不同组织器官中的表达特性，为解析该基因在花发育和果实发育及成熟过程中的功能奠定基础。【方法】利用同源比对和ｒｔ－Ｐｃｒ技术，克隆获得‘鲁星’桃中１０个ＰＰ ＭａＤｓ全长ｃ Ｄｎａ序列，并进行生物信息学相关分析；采用ｒｔ－Ｐｃｒ技术检测ＰＰＭａＤｓｓ在茎、叶、萼片、子房、雄蕊、花瓣等组织以及花发育７个阶段和果实发育５个阶段的表达特性。【结果】测序结果显示，获得１０个ＰＰＭａＤｓｓ（ＰＰ ＭａＤｓ１１、１２、１９、２０、２１、２．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
贺慧 虢慧 官春云
ACP5基因是参与植物体中脂肪酸代谢的重要基因之一,在甘蓝型油菜中该基因还未被深入研究。为了弄清楚BnACP5基因在甘蓝型油菜中的螺旋结构及功能,以湘油15为试材,采用同源克隆法得到一个与脂肪酸合成相关的基因BnACP5。BnACP5基因CDs序列长417 bp,共编码138个氨基酸。生物信息分析表明,BnACP5蛋白的相对分子质量15.25 ku,理论等电点(p I)为5.94,其不稳定参数为43.03,属于不稳定蛋白;其总疏水平均系数(GRAVY)为-0.148,是一种亲水性蛋白;不含跨膜结构,也不含
[期刊] 华北农学报
[作者]
肖旦望 刘聪 陈社员 官春云 熊兴华
克隆并对溶血磷脂酸酰基转移酶时空表达和逆境表达进行分析,旨在为进一步研究其生物学功能奠定基础。结合同源克隆与半定量RT-PCR的方法,克隆得到甘蓝型油菜湘油15 LPAT5的1条全长1 041 bp的CDs序列,并命名为BnLPAT5。序列分析表明,它具有LPLAT_LCLAT1样结构域,属于LPLAT超基因家族。时空表达分析表明,BnLPAT5在根中的表达量最高,是茎和胚的2倍。逆境分析表明,BnLPAT5在NaCl、PEG4000、水渍、6BA和ABA的胁迫下呈现2种不同的表达模式,他们均对BnLPAT5基因的表达具有抑制作用。在NaCl、PEG4000及水渍处理下,BnLPAT5呈"骤降...
[期刊] 华北农学报
[作者]
葛风伟 江一 赵惠新
水孔蛋白是位于质膜和液泡膜等生物膜上主要负责水分跨膜运输的通道蛋白。为了分析甘蓝型油菜种子萌发过程水分调控的分子机制，采用ＲＴ－ＰＣＲ法从甘蓝型油菜种子中克隆了液泡膜内在蛋白（ＴｏｎｏＰ ｌａｓＴ ｉｎＴＲｉｎｓｉＣ ＰＲｏＴｅｉｎｓ，ＴｉＰｓ）ＴｉＰ４；１基因片段序列，并对甘蓝型油菜种子ＴｉＰ４；１基因在种子萌发过程及干旱、低温和盐胁迫下的表达进行了ｑＲＴ－ＰＣＲ（ｑｕａｎＴｉＴａＴｉｖｅ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ）分析。结果表明，ＴｉＰ４；１基因在干种子中表达水平很低，但是在种子萌发过程中表达量增加。此外，在干旱、低温及盐的胁迫处理下，ＴｉＰ４；１基因的表达上调，结果暗示着该基因可能参与．．．
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张红梅 张蜀宁 于旭红 郑金双
以抱子甘蓝和羽衣甘蓝为材料,采用常规压片法进行核型分析,结果表明:抱子甘蓝的核型公式为2n=2x=18=10+8sm(2SAT),其中第3、4、5、6、8对为中着丝粒染色体,第1、2、7、9对为近中着丝粒染色体,第7对染色体具有随体;相对长度组成为2n=2L+6M2+10M1;核型分类为2A型,属于基本对称型。羽衣甘蓝的核型公式为,2n=2x=18=10m+8sm,其中第3、4、6、7、8对为中着丝粒染色体,第1、2、5、9对为近中着丝粒染色体,未观察到随体染色体;染色体相对长度组成为2n=8M2+10M1;核型分类为2A型,属于基本对称型。
关键词：
抱子甘蓝 羽衣甘蓝 染色体 核型分析
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王玉奎 白晓璟 廉小平 张贺翠 罗绍兰 蒲敏 左同鸿 刘倩莹 朱利泉
【目的】自交不亲和性(self-incompatibility,SI)是显花植物在长期进化过程中形成的限制自交衰退、促进杂交优势的一种复杂而完善的重要遗传机制。通过对SI与钙共响应新基因BoSPx的克隆、时空特异性表达分析和筛选与其互作的蛋白,并对BoSPx在自花授粉后刺激柱头的响应机制进行研究,以期为甘蓝SI的深入研究提供依据。【方法】采用转录组测序、自花和异花授粉后差异筛选以及PCR克隆获得BoSPx。利用DNAMAN软件和Smart软件进行氨基酸序列比对和保守结构域分析,通过Expasy在线软件预测BoSPx蛋白分子量、等电点、二级结构和跨膜结构域;采用MEGA6.0软件中的邻接法构建BoSPx蛋白的系统发育树,并推测BoSPx蛋白在甘蓝自花授粉后的功能。利用RT-PCR技术进行组织特异性表达分析,通过qRT-PCR检测自花和异花授粉后BoSPx的相对表达量。构建GFP表达载体,共聚焦显微镜观察BoSPx的亚细胞定位;酵母双杂交技术寻找其相互作用的蛋白。【结果】克隆获得一个新基因——BoSPx,其含有1个外显子,无内含子,是单外显子结构。BoSPx的开放阅读框为396 bp,编码具有131个氨基酸残基的蛋白质。理论等电点pI为4.54,是一种亲水性蛋白,没有信号肽和跨膜域,含有3个保守的EF-hand模体(第48—60、64—80和81—96位)。BoSPx起始密码子上游启动子序列500 bp左右含有生长素响应应答元件。BoSPx在开花前1—2 d的柱头、萼片、叶片、花药、花瓣中均有表达,在柱头中表达量最高,并且在自花和异花授粉的柱头中表达量都是先升高后降低,在自花授粉15 min时表达量达到最高,而后急剧下降,下降的低值与开花前1—2 d的柱头峰值相当。亚细胞定位分析表明BoSPx蛋白定位于细胞核和细胞质中。酵母双杂交结果表明BoSPx与SRK、ARC1之间无相互作用,但与生长素家族蛋白BoSAUR71和BoPID均能互作。【结论】BoSPx受自花授粉显著诱导表达,可能是受生长素调节的钙结合蛋白,对SI和钙产生共响应;该蛋白具有多组织表达和核质同在的特性,表明BoSPx可能参与SRK-ARC1-ExO70A1途径以外的未知信号通路。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
杨方慧 夏丽飞 陈林波 田易萍 宋维希 梁名志
【目的】进一步了解AGL9转录因子基因的功能,以及该基因对茶树花器官形成与发育的作用。【方法】前期研究茶树正常花与不育花转录组差异时,筛选出一条与AGL9基因高度同源的基因序列,设计特征引物进行PCR扩增验证AGL9基因并对其生物信息学特征进行分析,同时运用qRT-PCR分析AGL9基因的特性表达。【结果】经验证AGL9基因含有1个726 bp的开放阅读框,编码242个氨基酸,预测分子量为27.67 kD,理论等电点为8.96,命名为CsAGL9。Blastn分析序列发现CsAGL9与多种植物AGL9蛋白具有高度同源性。保守基元分析表明,茶树CsAGL9具有MADS-box和K-box,属于E类功能基因。qRT-PCR分析CsAGL9在不育花的花瓣、雄蕊中的表达量高于正常花而雌蕊中的低于正常花。【结论】茶树CsAGL9基因对花瓣、雄蕊、雌蕊等花器官的形成和发育扮演重要的作用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李洪有 王婵 李丽林 王永勤 赵瑞
【目的】克隆洋葱花器官B类PI/GLO家族MADS-box基因,分析其序列特征及时空表达模式,为探讨其在洋葱花发育过程中的分子遗传机制奠定基础。【方法】以洋葱花蕾总RNA为模板,根据同源克隆策略设计简并引物,利用RT-PCR结合RACE技术,获得AcPI的全长cDNA序列。用生物信息学方法对其基因序列特征进行分析;利用RT-PCR和Real-time PCR分析AcPI在花蕾整个生长过程中的时空表达模式。【结果】克隆获得洋葱AcPI基因(GenBank登录号:JX679083)的cDNA全长931 bp,包含615 bp的完整开放阅读框,编码205个氨基酸。蛋白分析表明,AcPI蛋白具有植物M...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘薇 赵云 安金玲 王茂林
【目的】克隆甘蓝型油菜(Brassica napus L.)矮化突变体"NDF-1"和野生型近等基因系亲本"3529"中ADP-核糖基化因子(ADP-ribosylation factor,ARF)基因全长cDNA,分析矮化突变体中该基因在不同组织中的表达水平,探讨矮化突变体中该基因在甘蓝型油菜茎杆发育过程中的作用。【方法】采用SSH(suppression subtractive hybridization)、RACE(rapid-amplification of cDNA ends)和RT-PCR技术,克隆甘蓝型油菜矮化突变体"NDF-1"和野生型"3529"中的ARF基因的全长cDNA序...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
连蔚然 王晋芳 李殿波 石锦 徐凤凤 曹芸运 赵冰 郭仰东
为探索甘蓝（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ ｌ．）在各种非生物逆境条件下Ｎａｃ转录因子的表达，以＂中甘１１号＂为材料，克隆获得甘蓝Ｎａｃ转录因子ＢｏＮａｃ２基因的ｃＤＮａ全长序列。序列分析表明，该ｃＤＮａ片段全长为１ ００２Ｂｐ，编码３３３个氨基酸，具有典型的Ｎａｃ类蛋白的结构特征。进化树分析表明，该蛋白属于ｓｅＮＵ５亚族，并与甘蓝型油菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ＮａｐＵｓ ｌ．）ＢＮＮａｃ亲缘关系最近。亚细胞定位显示，ＢｏＮａｃ２蛋白分布于细胞核中。ｑｒＴ－ｐｃｒ分析表明，ＢｏＮａｃ２基因受ｐｅＧ和Ｎａｃｌ诱导表达。
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
赵传慧 周厚君 童再康 林二培 黄华宏 牛明月
ＭＡＤＳ－ｂｏｘ家族基因广泛分布于植物中，在花发育过程中起着重要调控作用。采用同源克隆结合ｃ ＤＮＡ末端快速扩增技术（ＲＡｃＥ）在光皮桦ｂＥｔｕｌＡ ｌｕＭｉＮｉｆＥＲＡ中克隆到１个ＭＡＤＳ－ｂｏｘ基因，命名为ｂｌ ＭＡＤＳ１。该基因可能存在２个不同的转录本ｂｌ ＭＡＤＳ１Ｓ和ｂｌ ＭＡＤＳ１ｌ：前者为１ １５０ ｂｐ，编码２５４个氨基酸，具有ＭＡＤＳ－ｂｏｘ基因的典型结构，与欧洲白桦ｂＥｔｕｌＡ ｐＥＮＤｕｌＡ的同源基因相似性最高（９７％）；后者长１ ３１２ ｂｐ，但仅含有６９０ ｂｐ的开放阅读框（ｏＲｆ），编码２２９个氨基酸，缺失ＭＡＤＳ－ｂｏｘ蛋白的ｃ端。这种缺失可能由内含子可变剪切造成．．．
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
赵传慧 周厚君 童再康 林二培 黄华宏 牛明月
MADS-box家族基因广泛分布于植物中,在花发育过程中起着重要调控作用。采用同源克隆结合c DNA末端快速扩增技术(RACE)在光皮桦Betula luminifera中克隆到1个MADS-box基因,命名为Bl MADS1。该基因可能存在2个不同的转录本Bl MADS1S和Bl MADS1L:前者为1 150 bp,编码254个氨基酸,具有MADS-box基因的典型结构,与欧洲白桦Betula pendula的同源基因相似性最高(97%);后者长1 312 bp,但仅含有690 bp的开放阅读框(ORF),编码229个氨基酸,缺失MADS-box蛋白的C端。这种缺失可能由内含子可变剪切造成...
[期刊] 华北农学报
[作者]
蒋素华 黄萍 王默霏 梁芳 许申平 崔波
为了研究"ABC"模型的B类PI基因,探究决定花瓣和雄蕊形成的基因特征。采用CTAB法提取萼脊兰花瓣总RNA,并通过RT-PCR法克隆萼脊兰PI基因的编码序列,该序列长度为633 bp,编码210个氨基酸,与小兰屿蝴蝶兰的氨基酸相似性最高。对PI所表达蛋白质的结构、亲水性和二级结构进行了分析,结果显示,该基因包含MADS-box和K-box保守结构域,属于MADS-box基因家族;该蛋白分子属于亲水性蛋白,包含56.19%α螺旋、13.81%的延伸链以及30%的不规则折叠,实时荧光定量PCR结果显示,PI
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