为探明2023年3月初引起中国重庆市渝北区某牛蛙养殖场暴发疾病的原因，本实验从患病美国牛蛙蝌蚪肝脏和肠道中分离优势菌，采用形态学观察、生理生化实验、16S rDNA和rpoB基因序列测定、系统发育学分析进行鉴定。为确定该菌株的致病机理，对该菌株进行了人工感染实验、组织病理学观察、毒力基因检测、生长特性研究及药物敏感性实验。结果显示，在患病濒死美国牛蛙蝌蚪的肝脏和肠道中分离得到的其中一株优势菌命名为LT202303，经鉴定为约氏不动杆菌。该菌株携带OmpA、Omp34和OmpTsx等3种毒力基因，具有较强的耐盐性和在广泛的pH范围内生存的能力，对美国牛蛙蝌蚪的半数致死浓度为6.8×10~6CFU/mL，发病临床症状为肝脏红肿并伴有大量白色结节，肠道透明发黄。组织病理学观察发现该菌株可引起美国牛蛙蝌蚪肝脏和肠道的明显炎症反应和病灶性坏死。药敏实验结果显示，分离菌LT202303是一种产β-内酰胺酶的多重耐药细菌。本研究表明，约氏不动杆菌对牛蛙蝌蚪具有高致病力，可引起肝脏和肠道等多器官组织的病理损伤最终引发机体的损伤甚至死亡。本研究首次报道约氏不动杆菌感染引起的美国牛蛙蝌蚪传染病的暴发，为该疾病的诊断和防控提供理论参考。

为探明2022年5月引起广西南宁某养殖基地牛蛙暴发疾病的原因。本研究从患病牛蛙肝脏、脾脏、肾脏和肠道中分离优势菌，采用形态学观察、生理生化实验、16S rRNA基因序列测定、系统发育学分析进行鉴定。为确定该菌株的致病机理，对该菌株进行了人工感染实验、组织病理学观察、毒力基因检测、药物敏感性实验及耐药基因检测。结果显示，在患病濒死牛蛙的肝脏、脾脏、肾脏、肠道均分离到单一的优势菌株，将从肠道分离得到的一株优势菌命名为NFCF-02，经鉴定为弗氏柠檬酸杆菌。该菌株携带viaB、ompX、ureE、ureD、ureG、ureF这6种毒力基因，对牛蛙的半数致死浓度为3.12×10~(6) CFU/mL，发病临床症状为肝脏变黄、花肝、肝脏坏死；肾脏充血发红、胃表面有血丝以及肠道呈红色和血脓充塞肠道的症状。组织病理学观察发现其肝细胞变性坏死，肝索排列紊乱；肾小管上皮细胞肿胀坏死、严重区域肾小管崩解、坏死；脾脏中央静脉扩张淤血，含铁血黄素、色素细胞增多；肠黏膜脱落，肠上皮细胞坏死脱落，杯状细胞坏死。药敏实验结果显示，分离菌株NFCF-02对新霉素、多粘菌素B、头孢拉定、多西环素4种抗菌药物敏感，对林可霉素等14种抗菌药物已产生耐药性，携带gyrA、Sul1等7种耐药基因。研究表明，弗氏柠檬酸杆菌对牛蛙具有高致病力，可引起肝脏和肠道等多器官组织的病理损伤最终引发机体的损伤甚至死亡。本研究首次从组织病理学分析和毒力因子携带情况角度确定弗氏柠檬酸杆菌对牛蛙的致病力，可为养殖牛蛙弗氏柠檬酸杆菌病的诊断和药物防控提供参考依据。

本实验分离大熊猫粪便样品中大肠杆菌,利用形态学和分子生物学方法鉴定菌株,采用药敏纸片扩散法(Kirby-Bauer)进行常用抗生素耐药性试验分析。结果表明,从抗生素大类来比较,耐药率依次为:四环素类(55.6%)>青霉素类(26.7%)>磺胺类(18.9%)>喹诺酮类(10%)>头孢类(7.8%)>氨基糖苷类(1.1%)>单环内酰胺类(0)、碳青霉烯类(0)。大肠杆菌对四环素的耐药率最高,达到55.6%;对头孢曲松、头孢他啶、氨曲南、亚胺配能及美罗配能等敏感,耐药率为0。其它抗菌药物耐药率依次是:阿莫西林(26.7%)>磺胺复合物(18.9%)>氨苄西林/舒巴坦(17.8%)>复方新诺明(11...

为了解浙江省规模化猪场患病猪副猪嗜血杆菌的耐药性,采用K-B琼脂法对73株HPS浙江株进行了18种临床药物的敏感性试验,同时应用PCR技术对11个相关耐药基因进行扩增、测序和比对分析。药敏试验结果显示:对磺胺类耐药的分离株比例高达86.30%,对四环素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、β-内酰胺类和氯霉素类耐药的比例分别为65.75%,60.27%,50.68%,50.68%,46.58%,对大环内酯类耐药仅为28.77%。PCR分析显示:97.26%的菌株中检测到耐药基因,多重耐药的占84.93%。其中喹诺酮类耐药基因Aac(6')-1b的检出率为76.71%,氨基糖苷类耐药基因AadA1的检出率为...

为探明史氏鲟感染性疾病的病原,并为生产中防治该病提供依据,本实验自患病鱼分离到2株细菌SX01和SX02,对2分离株开展了人工感染实验、形态学和理化特性检测及分子生物学鉴定,并用PCR法检测了部分耐药基因。研究结果表明,分离株对异育银鲫具有一定的致病力,96 h的半数致死浓度LD50为1.02×109cells/mL;革兰氏染色阴性,球杆状,氧化酶实验、动力阴性,接触酶阳性,形态学和理化特性符合不动杆菌属的特征;其16S rRNA基因序列与已发表的琼氏不动杆菌完全同源,RNA聚合酶β亚单位编码基因rpoB序列与琼氏不动杆菌相应序列同源性达99%以上,确认2分离株为琼氏不动杆菌;自分离株中检测到...

为了解芽孢杆菌科细菌的耐药性情况，本研究选择克氏原螯虾（Procambarus clarkii）作为样品分离芽孢杆菌科细菌，鉴定种属后通过微量肉汤稀释法确定菌株对药物的最小抑菌浓度值(Minimum Inhibitory Concentration， MIC)，检测耐药相关基因后通过接合转移实验分析耐药基因的转移情况。结果显示，所有样品共分离出59株芽孢杆菌科细菌，经鉴定可分为短芽孢杆菌属（Brevibacillus sp.）、假芽孢杆菌属（Falsibacillus sp.）、类芽孢杆菌属（Paenibacillus sp.）和芽孢杆菌属（Bacillus sp.），芽孢杆菌属(Bacillus sp.)数目最多，为44株。药敏实验确定耐药菌株共33株，12株对甲砜霉素药物不敏感，菌株基因检测中共检出21种耐药基因和2种转移元件基因。接合转移实验结果表明，在含甲砜霉素药物的环境中耐药基因可以在芽孢杆菌或类芽孢杆菌与大肠杆菌（Escherichia coli）之间转移，并且耐药表型可传代传播。实验揭示了细菌间甲砜霉素耐药表型传播的高风险，对养殖药物的使用及细菌监测具有一定的指导意义。

为探讨鸡源大肠杆菌生物被膜的耐药机制,采用改进的平板培养法建立鸡大肠杆菌生物被膜体外模型,用液体二倍稀释法分别测定了鸡源大肠杆菌生物被膜菌、浮游菌和脱膜菌对克拉霉素、环丙沙星、磷霉素等13种抗菌药的敏感性,并检测了细菌生物被膜中超广谱β-内酰胺酶的产生情况。结果表明:浮游菌和脱膜菌对同种药物的敏感性几乎相同,而生物被膜菌对同种药物的耐药性比后两者显著增强,并且2株不产超广谱β-内酰胺酶的浮游菌在形成生物被膜后产生了超广谱β-内酰胺酶。由此说明,生物被膜菌的耐药性主要是由于生物被膜这种特殊结构造成的,同时,由于生物被膜的存在,促使了超广谱β-内酰胺酶的产生。生物被膜的形成和超广谱β-内酰胺酶的产...

从发病马口鱼脑组织中分离出致病菌株ObB210709B1,通过对该菌株形态特征、生理生化特性、16S rDNA基因测序分析，鉴定分离菌株为鮰爱德华氏菌.人工感染试验证实此菌株可引起健康马口鱼发病死亡，并表现出与自然发病相似的症状.药敏试验发现：该菌对3种β-内酰胺类、5种氨基糖苷类、5种喹诺酮类、2种四环素类、1种氯霉素类、1种多粘菌素类等17种药物高度敏感；对青霉素、苯唑西林、红霉素、万古霉素和复方新诺明等5种药物耐药.对健康对照组、自然发病组和病原菌回归感染120 h组进行组织病理切片观察，感染鮰爱德华氏菌的马口鱼病理表现为：鳃丝崩解、肝空泡坏死、脾出血且坏死、肾小球出血与肾小管破裂，多组织器官均有细菌团块的聚集，肠道尤为严重.

对红原县16头牦犊牛分别采集腹泻粪样,用选择性培养基分离,并根据形态特征和16SrRNA基因序列分析鉴定得到了沙门氏菌、大肠杆菌、芽孢杆菌等64株菌株。采用药敏纸片法检测所得菌株对8类、共计9种药敏纸片的耐药性。结果表明:所测菌株对庆大霉素、环丙沙星、复方新诺明、氨曲南较敏感,耐药率为0%～25%;对红霉素和万古霉素耐药率为75%～100%。该实验不仅为抗生素类药物治疗牦牛腹泻问题提供参考,还有助于研究型创新人才培养,也为今后开设综合创新实验教学奠定了基础。

为研究奥斯陆莫拉菌的致病机制及防控措施,对疑似患有奥斯陆莫拉菌的病猪肺组织进行病原分离,得到了1株优势菌命名为ZF2。对分离菌株进行形态学观察、生化试验、分子生物学鉴定,动物回归试验和药敏试验。结果显示,分离菌株为革兰阴性杆菌且对健康仔猪具有较强的致病性,经生化试验和分子生物学分析鉴定为奥斯陆莫拉菌。该分离菌株对阿奇霉素、红霉素呈现较强的耐药性。经大环内酯耐药基因检测结果显示erm B基因为阳性。本研究对奥斯陆莫拉菌病选择合理、正确的抗菌药物提供了一定的科学依据,并为进一步研究其耐药机制奠定了基础。

【目的】针对大肠杆菌耐药性呈现逐年增加的趋势和牦牛疾病防控中抗菌药物使用存在的问题,对2009-2016年度采自川西北高原地区散养牦牛(包括健康和患病)的粪便、屠宰场宰杀牦牛的胃肠道内容物和病死牦牛的脏器1 908株大肠杆菌进行27种抗菌药物敏感性试验和整合酶基因检测,以了解川西北高原地区牦牛源大肠杆菌耐药性变迁规律和整合子携带情况,为牦牛安全用药提供参考。【方法】按照美国临床和实验室标准协会(NCCLS)推荐的微量肉汤稀释法对分离菌株进行最小抑菌浓度(MIC)测定,利用WHONet 5.6软件包对试验数

微生物制剂因其具有无毒害、无污染、低成本的优点在水产领域迅速发展，成为最具潜力的抗生素的替代产品。本研究通过对市场在售水产微生物制剂中的细菌进行分离培养与鉴定，以及抗生素药敏实验、耐药基因和可移动遗传元件的检测，评估水产微生物制剂源细菌的耐药性，为水产养殖中益生菌的筛选和安全应用提供科学依据。结果显示，分离得到的211株细菌可分为9个属，其中以芽孢杆菌属、肠球菌属、乳杆菌属为主。药敏实验结果显示，211株分离菌株中98株(46.7%)细菌表现为耐药。进一步对耐药性较强和多重耐药的79株细菌进行五大类(磺胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类和β-内酰胺类)耐药基因和可移动遗传元件检测。结果显示，79株耐药菌中携带耐药基因的菌株阳性率为74.7%,存在多重耐药基因的菌株高达40.5%,氨基糖苷类和磺胺类耐药基因的检出率最高，分别为53.2%和40.5%。可移动遗传元件(Tn916/1545)检出率为13.9%。综上可知，市售微生物制剂中发现了耐药菌株以及耐药基因，表明水产用微生物制剂存在一定的安全隐患，应加强对微生物制剂的安全性检测和风险评估。

为了更有针对性地防控水产动物细菌性病害的发生和流行,本实验对美洲鳗鲡及其养殖水体耐药细菌的种属特征及耐药情况开展了相关研究。首先采集美洲鳗鲡不同部位(表皮、鳃、肠道)及其养殖水体的样品,经5种抗菌药物平板筛选耐药菌株,然后采用K-B纸片扩散法检测细菌对抗菌药物的耐药性,同时测定耐药菌株的16S r DNA序列,进而分析耐药菌的种属分布和多重耐药性。结果显示,经耐药平板筛选分离纯化得到108株细菌,分别属于气单胞菌属、柠檬酸杆菌属、不动杆菌属等20个属;其中,93.5%的菌株对3种(含)以上的抗菌药物具有耐药性,86.1%的菌株对3类(含)以上的药物具有抗性。对阿莫西林的耐药率高达90.7%,对...

【目的】了解宁夏地区奶牛正常乳汁和患乳腺炎乳汁中肠球菌的分布规律及其耐药特征,为宁夏地区奶牛乳腺炎疾病的抗菌药物合理使用提供参考。【方法】对宁夏地区16个规模化奶牛养殖场近3年来1 154份乳汁样品(正常乳汁383份,患乳腺炎乳汁771份)进行肠球菌分离,采用形态学观察和生化试验对分离所获的496株肠球菌进行鉴定,通过K-B药敏纸片扩散法测定分离肠球菌菌株对青霉素(PG)、头孢唑林(CFZ)、庆大霉素(GEN)、四环素(TET)、红霉素(EM)、林可霉素(LCM)、链霉素(SM)和万古霉素(VCA)等8种药物的敏感性,并使用PCR方法对分离肠球菌菌株进行四环素类药物耐药基因(tet A、tet B、tet C、tet M)、大环内酯类药物耐药基因(mec A、erm A、erm B、erm C)以及林可胺类药物耐药基因(lsa A、lsa E、lnu G、lnu A)检测。【结果】从1 154份乳样中共分离得到496株肠球菌,经鉴定分属6种肠球菌,分别是屎肠球菌、海氏肠球菌、粪肠球菌、蒙氏肠球菌、耐久肠球菌和鹑鸡肠球菌。其中屎肠球菌305株,占分离菌株总数的61.5%;海氏肠球菌124株,占分离菌株总数的25.0%;粪肠球菌27株,占分离菌株总数的5.4%;蒙氏肠球菌21株,占分离菌株总数的4.2%;耐久肠球菌15株,占分离菌株总数的3.0%;鹑鸡肠球菌4株,占分离菌株总数的0.8%。临床分离菌株对林可霉素、四环素、红霉素的耐药率分别达到95.8%,82.7%和80.2%,尤以耐7种药物的菌株为主,达230株(占耐药菌株的46.4%),最常见的耐药谱为PG+CFZ+GEN+TET+EM+LCM+SM。正常乳汁中分离的菌株主要为海氏肠球菌(检出率为73.8%),对林可霉素的耐药率最高(94.5%);患乳腺炎乳汁中分离的菌株主要为屎肠球菌(检出率为89.5%),对四环素的耐药率最高(97.0%)。496株临床肠球菌中有488株检测出携带耐药基因,检出率为98.4%;检测出乳源肠球菌不携带tet A、tet B、tet C、mec A、lnu G和lnu A耐药基因;携带erm A、erm B、erm C、tet M、lsa A和lsa E耐药基因,其携带率分别为51.0%,80.3%,33.2%,88.1%,41.6%和74.4%;最常见耐药基因谱为erm A+erm B+tet M+lsa E+lsa A。【结论】宁夏地区奶牛乳汁中肠球菌耐药性严重,且具有多重耐药性特征,给公共卫生带来潜在危害,应引起高度重视。

【目的】了解引起奶牛乳房炎的最主要病原菌葡萄球菌的耐药性,为奶牛乳房炎的防治提供参考依据。【方法】于2006~2007年在泰安地区5个规模化奶牛场,采集128份临床乳房炎奶牛乳样,用传统的细菌分离、培养和生化鉴定方法,对其中的葡萄球菌进行了分离,用K-B纸片扩散法对葡萄球菌的耐药性进行了检测调查。【结果】本次调查中共分离到29株葡萄球菌,其中金黄色葡萄球菌14株(14/29,47.4%),产色葡萄球菌3株(3/29,10.3%),木糖葡萄球菌、腐生葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、表皮葡萄球菌和人葡萄球菌各2株(2/29,6.9%),头葡萄球菌和模仿葡萄球菌各1株(1/29,3.3%);葡萄球菌对头孢拉...