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[期刊] 水产学报
[作者]
李嘉波 秦真东 赵丽娟 刘志刚 可小丽 吴灶和 刘小玲 卢迈新 林蠡
为研究罗非鱼湖病毒在吉富罗非鱼体内和敏感细胞E-11中的感染特性,实验首先从人工感染罗非鱼湖病毒的吉富罗非鱼脾脏中获得罗非鱼湖病毒第4片段基因组,其cDNA全长1 250 bp,开放读码框长度为1 065 bp,编码354个氨基酸。通过进化树分析,该蛋白是罗非鱼湖病毒血凝素—酯酶融合蛋白(HEF)。随后通过在大肠杆菌大量表达和提纯GST融合HEF蛋白,免疫新西兰大白兔,制备了兔抗TiLV-HEF多克隆抗体。ELISA结果显示获得的抗血清效价高于1∶51 200,并且获得的抗体可以特异性识别病毒的TiLV-HEF蛋白。人工感染实验结果显示,TiLV的感染造成鱼体表面溃疡、全身性出血以及眼晶状体混浊等症状。H.E染色结果显示,肝脏形成合胞体,脾脏中含铁血黄素增加和部分细胞空泡变性。头肾出现淋巴细胞坏死,体肾蛋白质沉淀和肾小球坏死等病理症状。Western blot和免疫组织化学结果显示该病毒在所有组织中均有分布,其中脾脏、头肾和鳃中的病毒丰度高于肝脏、体肾和脑组织。通过细胞间接免疫荧光实验,发现TiLV感染E-11细胞后,HEF蛋白在细胞质中。TiLV可以通过感染吉富罗非鱼幼鱼的肝脏、脾脏、头肾、体肾、鳃和脑等组织而引起疾病。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈明勇 陈德威 高齐瑜 张冰
研究了传染性法氏囊病病毒 (IBDV)变异 E株人工感染体外培养法氏囊细胞的凋亡。电镜观察和DNA电泳分析表明 ,IBDV感染后 4～ 2 4 h,法氏囊培养细胞呈现典型细胞凋亡的形态学特征和生化特征。经流式细胞计检测、荧光染色观察和统计学分析表明 ,IBDV感染后 4～ 2 4 h,法氏囊培养细胞凋亡数量显著增加 (P
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
许秀芹 王宜艳 孙虎山
用从胶州湾大规模死亡栉孔扇贝体内分离出来的球状病毒注射感染栉孔扇贝(Chlamys farreri),分别于病毒感染后8 h、24 h、48 h、72 h和128 h取血,采用流式细胞仪技术研究了病毒对栉孔扇贝血细胞类型及死亡率的影响,采用荧光显微技术研究了病毒感染的栉孔扇贝血细胞的体外吞噬和包囊化作用的变化。结果表明,病毒感染的扇贝血细胞各类型的比例同对照组相比有显著的差异,在24 h、48 h和72 h,实验组透明细胞比例显著高于对照组,并呈逐渐升高趋势,在8 h、24 h、48 h、72 h,实验组大颗粒细胞比例显著低于对照组。在24 h、48 h、72 h和128 h,实验组血细胞的死...
关键词：
栉孔扇贝 球状病毒 血细胞 流式细胞术
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李双洁 卢宇 张金秋 苗晋锋 侯继波
［目的］鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）感染会引起鸡的免疫抑制，给养禽业带来巨大危害。本文旨在探讨鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）蛋白ＶＰ４和ＶＰ５在病毒感染引起的免疫抑制中的作用。［方法］构建ＶＰ４和ＶＰ５蛋白的真核表达质粒并转染Ｖｅｒｏ细胞，再用ＩＢＤＶ ＣＶ０３病毒株感染转染后的细胞，Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ方法检测细胞中模式识别受体及下游转录因子的表达；ｒｔ－ｑ ＰＣｒ检测细胞因子及抗病毒基因的表达。［结果］ＩＢＤＶ ＣＶ０３病毒感染Ｖｅｒｏ细胞后，ＶＰ４蛋白在一定程度上能够提高ｔｌｒ３、ｒＩＧ－Ⅰ蛋白含量，但差异不显著；ＶＰ５对ｔｌｒ３、ｒＩＧ－Ⅰ等介导的天然免疫通路有一定的抑制作用；过．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
郑尧 赵志祥 史磊磊 宋超 徐跑 陈家长
在快速生长期日粮中添加较高浓度芦丁(0、0.1和0.3 g/kg),通过免疫、生殖器官组织切片和Tunel细胞凋亡分析,探究芦丁作为饲料免疫增强剂对吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)幼鱼组织切片及细胞凋亡的影响。结果表明低浓度芦丁会使肠道血小板增多,杯状细胞不规则;肝脏kupffer细胞少;并会造成肠道和肝脏细胞凋亡阳性率增高。高浓度芦丁组肝、脾脏出现细胞凋亡和含铁血黄素沉着;且造成肝脏和脾脏细胞凋亡阳性率增高;脾脏黑色素巨噬细胞中心少。此外,高浓度芦丁会对精巢、卵巢的发育起到抑制作
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
任宇皓 胡元亮 刘家国 张宝康 宋大鲁
将黄芪多糖 (APS)、淫羊藿多糖 (EPS)、淫羊藿总黄酮 (EF)分别与新城疫病毒 (NDV)Ⅰ、Ⅳ系以 3种顺序加入到培养 2 4h的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中 ,即先加中药后接种病毒、先接种病毒后加中药、病毒和中药混合感作后同时加入。于病毒接种后 72h测定NDVⅠ系的半数组织培养感染剂量 (TCID50 )和NDVⅣ系的血凝效价 ,以评价 3种中药成分对NDV感染细胞的影响。结果表明 ,APS和EPS仅在先于病毒加入时对NDV有抑制作用 ,而EF无论以何种方式给药均呈抑制作用。提示它们有一定的抗病毒作用 ,且与其浓度有相关性
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
张琴 陈康勇 田佳音 邹钧
白细胞介素34（Interleukin-34，IL-34）是一种多功能细胞因子，在先天免疫和炎症过程中发挥重要作用。利用荧光定量PCR技术分析IL-34在细菌和病毒感染后的表达情况。结果显示，IL-34在健康斑马鱼组织和胚胎发育过程中呈常量表达。腹腔注射脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和聚肌苷酸-聚胞苷酸(Polyinosinic acid-polycytidylic acid，Poly (I:C))后，斑马鱼脾中IL-34表达在48 和72 h均上调，肠中IL-34表达均显著升高（除LPS刺激24 h时IL-34表达下降外）。斑马鱼感染迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda，E.tarda）后，肠中IL-34表达明显增加（3、9和24 h），而脾中IL-34的表达则受到抑制（6、9和72 h）。腹腔注射感染鲤春病毒血症病毒（spring viremia of carp virus，SVCV）后，脾（1、3、5和7 d）和肠（1和3 d）中IL-34表达也显著上调。体外分析结果显示，SVCV感染和LPS刺激增强ZF4细胞中IL-34的表达；LPS、IL-1β和IFNφ1诱导脾原代细胞表达IL-34。实验结果表明，鱼类IL-34基因在抵御细菌和病毒感染过程中发挥重要作用。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
池雪林 曾显成 黄小红 罗树红 汪世华
通过透射电子显微技术对羊口疮病毒(ORFV)YX强毒株感染羊胚胎鼻甲细胞(OFTu)的细胞超微结构和病毒形态发生学进行研究.结果显示,成熟的病毒粒子呈椭圆形,有囊膜,大小约为150 nm×250 nm,可见两面凹陷呈哑铃形的核酸芯髓和2个侧小体结构.病毒在胞浆中复制,在高尔基体形成囊膜,最后病毒粒子通过细胞膜出芽和细胞裂解方式释放病毒粒子.感染细胞超微结构主要表现为:内质网扩张呈囊、池内分离;线粒体增生、嵴肿胀、变暗、模糊不清,最后空泡化;高尔基体出芽、扩张;细胞核溶解呈早期凋亡现象,胞浆出芽,最后整个细胞裂解、破碎.
[期刊] 淡水渔业
[作者]
朱佳杰 沈夏霜 罗伟 敖秋桅 谭芸 罗永巨 蒋和生 甘西
为探讨无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染罗非鱼(Oreochromis spp)的致病途径。采用腹腔注射、灌胃和浸泡三种方式对吉富罗非鱼进行无乳链球菌(HN016菌株)胁迫感染,利用平板活菌计数法统计三种方式感染后病原菌在体内组织的分布。注射和灌胃两种方式感染后均出现典型的链球菌感染发病症状,其中注射组在感染24 h后出现死亡高峰,死亡率为92.5%;灌胃组感染48 h后出现死亡高峰,死亡率为90%;而浸泡组,感染后均没有出现明显的发病症状,也没有出现死鱼。注射组和灌胃组在感染后2 h,其脾脏、肝脏、前肾、胃、腮、皮肤和肌肉组织中均可分离出病原菌,5 h后在脑组织中均可分离出病原菌,8 h后各组织分离出的病原菌数达到峰值;而浸泡组在感染8 h后才从各组织中分离出病原菌,且它们的数量均低于同时期的注射组和灌胃组。注射和灌胃两种方式可使吉富罗非鱼快速感染无乳链球菌而发病,而浸泡方式感染后病原菌虽可以侵入机体,但不表现出症状。由此,我们推测在自然条件下养殖的罗非鱼是通过口腔采食携带无乳,链球菌的食物而被感染。
[期刊] 华北农学报
[作者]
朱佳杰 付强 敖秋桅 陈明 谭芸 李莉萍 蒋和生 甘西
为研究吉富罗非鱼感染无乳链球菌后肝脏组织多肽表达变化，采用串联飞行时间质谱仪（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ）扫描了吉富罗非鱼感染无乳链球菌２４ ｈ后与未感染的罗非鱼肝脏组织的多肽质谱峰值差异，并对表达差异的多肽峰值进行蛋白质质谱鉴定和功能分类。结果显示：对照组检测到信噪比（ｓ／ｎ）大于５０的质谱峰为４４个，试验组为５２个，发现６个质谱峰（Ｍ／ｚ １ ０８２，１ １６１，１ １９６，１ ４５９，１ ７４０，１ ８７７）在感染２４ ｈ后与未感染鱼之间的表达差异明显，其中质荷比（Ｍ／ｚ）１ １９６在试验组表达下降，而质荷比（Ｍ／ｚ）１ １６１和１ ４５９则是上升。共鉴定得到１９种多肽，其中１４个表达上．．．
关键词：
吉富罗非鱼 无乳链球菌 多肽 差异表达
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
耿静微 李厚伟 尹海燕 陈红英 李金磊 韩志涛 崔保安 魏战勇
【目的】了解猪细小病毒(PPV)感染对抗病毒相关细胞因子mRNA转录时相的影响,探讨宿主-病毒之间的作用关系。【方法】对PPV感染PK-15细胞的病变进行了显微观察,运用荧光定量PCR技术,测定和分析PPV感染PK-15细胞后,细胞病毒DNA含量及巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)、转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸甘油酸激酶1(PGK1)和MURR1等细胞因子mRNA相对表达量的变化。【结果】PPV可以快速诱导PK-15细胞产生细胞病变。感染后1 h即可检测到PPV DNA,随着时间的延长,PPV DNA含量逐渐增加,并于48 h时达到峰值,相对含量为1 800左右。MIP-1α和PG...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李连歌 曹哲明 陶易凡 张丽 马俊蕾 李鸣霄 包景文 朱昊俊 徐跑 强俊
钙敏感受体(calcium-sensing recceptor, CaSR)在Ca~(2+)刺激下可参与调控细胞凋亡等生理过程,在机体适应逆境胁迫中发挥重要作用。为研究吉富罗非鱼(Genetically Improved Farmed Tilapia, GIFT)CaSR基因的特点及其在缺氧胁迫下参与细胞凋亡的调控机制。本研究利用RT-PCR技术克隆了吉富罗非鱼CaSRcDNA全长序列,利用qRT-PCR技术分析了该基因在不同组织中的表达模式,并进一步检测了缺氧胁迫下(0.55mg/L)肝脏中该基因和细胞凋亡相关基因mRNA的表达变化,同时利用ELISA法检测了肝脏中抗氧化酶活性的变化,以及通过HE和TUNEL染色法分别观察了肝细胞的形态变化和凋亡情况。结果显示,吉富罗非鱼CaSR cDNA序列全长3265 bp,包括21 bp 5′非编码区、2823 bp开放阅读框和421 bp 3′非编码区,编码940个氨基酸。CaSR基因mRNA在不同组织中均有表达,其中肌肉中表达量最高,肾脏次之;组织切片观察发现缺氧可导致肝脏组织结构损伤,促进肝细胞凋亡;与对照组(5.0mg/L)相比,缺氧可增强SOD、CAT和GSH-Px抗氧化酶活性,上调CaSRmRNA的表达,并引起Bcl-2、Caspase-3和P53凋亡基因mRNA的表达变化。研究结果表明, CaSR可能通过介导Ca2+调控细胞凋亡,从而参与吉富罗非鱼的缺氧应对机制。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
吕英军 倪嘉宁 鲍恩东
为探讨多聚核苷酸(聚肌胞)对新城疫病毒(NDV)的抑制作用,本研究通过聚肌胞对感染NDV的鸡胚成纤维细胞、SPF鸡胚和肉鸡进行了病毒抑制试验。结果显示:125和250μg.mL-1的聚肌胞溶液能明显抑制100倍TC ID50的NDV在鸡胚成纤维细胞上的繁殖;5 mg.mL-1的聚肌胞溶液(每个胚0.1 mL)能明显抑制NDV在SPF鸡胚中的繁殖,减轻NDV对鸡胚生长的抑制作用,降低病毒血凝效价和鸡胚死亡数。聚肌胞对肉鸡抵抗NDV感染试验结果显示,肌肉注射0.01 mg.kg-1的聚肌胞注射液能明显提高治愈率和显效率。但反映细胞活性状态的中性红染色(D570值)随着聚肌胞浓度的增大而变小的结果说...
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
陈林 李思发 简伟业 何学军 李先仁 蔡完其
以新研制的吉奥罗非鱼(新吉富罗非鱼♀×奥利亚罗非鱼♂)为试验对象,新近推广的新吉富罗非鱼、以及养殖生产上普遍使用的奥尼罗非鱼(尼罗罗非鱼♀×奥利亚罗非鱼♂)、尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼为对照,对吉奥罗非鱼的生长性能进行评估试验。主要结果:(1)绝对增重率(g/d):新吉富>吉奥>尼罗>奥尼>奥利亚,吉奥比新吉富低19.4%,但比奥尼、尼罗、奥利亚分别高60.3%、10.8%、112%,除吉奥与尼罗间差异不显著外(P>0.05),同其它3种罗非鱼之间差异都极显著(P尼罗>吉奥>新吉富>奥利亚,其中,吉奥比奥尼、尼罗降低了31.1%、17.4%,除吉奥和...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
王兵 李思发 蔡完其
在上海地区室外自然降温条件下,连续3年观察测定了"新吉富"罗非鱼、"吉丽"罗非鱼("新吉富"罗非鱼♀×萨罗罗非鱼♂)及萨罗罗非鱼对低温的耐受力,计算和分析了平均半致死水温。2008年,"新吉富"罗非鱼死亡水温范围是7.5～5.8℃,平均半致死水温是6.8℃,对水温降低过程中罗非鱼行为活动的变化进行了观察;2009年,"新吉富"罗非鱼和"吉丽"罗非鱼的死亡水温范围分别是10.8～7.6℃、12.4～9.2℃,平均半致死水温分别是9.2℃和11.4℃;2010年3种实验鱼的死亡水温范围分别是11.0～7.0℃、12.8～11.4℃、13.8～12.4℃,平均半致死水温分别是8.3℃、12.5℃、1...
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