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[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
梁浩 周志刚
缺刻缘绿藻（Myrmecia incisa Reisigl）是一种富含多不饱和脂肪酸的球形单细胞淡水绿藻。在脂肪酸合成途径中，脂肪酸去饱和酶与脂肪酸酰基结合载体结合进行脂肪酸去饱和反应。为探究与缺刻缘绿藻中Δ15脂肪酸去饱和酶（fatty acid desaturase，FAD）结合的脂肪酸酰基结合载体，选用酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）INVSc1和聚球藻（Synechococcus sp.）PCC7942分别验证Δ15 FAD与酰基辅酶A（酰基-CoA）或酰基载体蛋白（酰基-ACP）结合的脂肪酸去饱和过程。根据缺刻缘绿藻的Δ15 FAD基因构建双源表达载体pYES2-Δ15 FAD和pCAMBIA1300-Δ15 FAD，通过电穿孔法将重组表达质粒分别转入酿酒酵母INVSc1和聚球藻PCC7942中，筛选得到转基因菌株。取相同细胞数的转基因酵母和转基因聚球藻，培养时分别添加等量的底物亚油酸（linoleic acid，18:2~(Δ9，12)，LA），以LA作为酰基受体，使其进入转基因酵母和转基因聚球藻的生物合成途径中，培养36～72 h。利用气相色谱-质谱联用系统对总脂肪酸的各组分进行分析，结果显示，在转基因实验组中检测到LA和α-亚麻酸（α-linolenic acid，18:3~(Δ9，12，15)，ALA）的存在，空白实验则未检测出相应的产物。通过计算，转基因酵母催化LA生成ALA的效率29.31%，转基因聚球藻催化底物LA生成ALA的效率为30.86%。根据结果证明无论是酰基-ACP还是酰基-CoA，与缺刻缘绿藻中的Δ15 FAD结合进行反应的效率相近，不存在偏好性，由于Δ15 FAD是特异性蛋白，因此证明缺刻缘绿藻中的Δ15 FAD属于脂酰基结合蛋白。
[期刊] 水产学报
[作者]
李春阳 杜道海 于水燕 李慧 刘凡 周志刚
根据莱茵衣藻和普通小球藻ω3脂肪酸去饱和酶氨基酸序列(GenBank登录号分别为ABL09485和BAB78717)的保守区(TMFWALF和HHDIGTH)设计简并引物,以缺刻缘绿藻H4301总RNA为模板,通过反转录PCR和cDNA末端快速克隆技术(RACE),克隆了缺刻缘绿藻ω3脂肪酸去饱和酶基因的cDNA全长序列(GenBank登录号:EU658930),它与莱茵衣藻的这个基因具有69%相似性。该基因cDNA序列长2330bp,其中5'-非翻译区长107bp;3'-非翻译区912bp,且具有明显的poly(A)尾巴;开放阅读框1311bp,编码一个436个氨基酸的蛋白质,分子量为49....
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张跃群 阎生荣 吕峰 金洁蓉 王勇军
研究了温度、光照和酸碱度对三角褐指藻、小球藻和球等鞭金藻-ω3脂肪酸去饱和酶基因表达的影响。实时定量PCR结果表明,10和15℃的低温处理,降低了3种微藻ω-3脂肪酸去饱和酶基因的表达丰度,提高处理温度至25和30℃(三角褐指藻除外),则促进该基因的转录;在5 000 lx的光照强度下处理48和72 h,可以提高3种藻类的ω-3脂肪酸去饱和酶基因的表达;酸碱度对3种微藻-ω3脂肪酸去饱和酶基因的表达影响与不同的物种有关,pH 5~9的培养结果显示,酸碱度对三角褐指藻影响较大,球等鞭金藻次之,而对小球藻影响较小。
关键词：
微藻 ω-3脂肪酸 去饱和酶 基因表达
[期刊] 海洋渔业
[作者]
欧阳珑玲 李晓蕾 周志刚
对缺刻缘绿藻（ＭｙｒＭｅｃｉａ ｉｎｃｉｓａ）进行氮饥饿（４ ｄ）／氮恢复（４ ｄ和８ ｄ）培养，研究其细胞中三酰甘油（ＴａＧ）和光合膜脂，主要是单半乳糖二酰甘油（ＭＧｄＧ）和二半乳糖二酰甘油（ｄＧｄＧ）的含量和脂肪酸组成的变化。结果表明ＴａＧ含量在氮饥饿胁迫下显著上升，而在氮恢复培养下逐渐下降；ｄＧｄＧ含量的变化趋势与ＴａＧ相反；ＭＧｄＧ的含量则始终呈现上升趋势。对脂肪酸组成进行分析发现花生四烯酸（ａｒａ）主要存在于ＴａＧ中，且ＴａＧ中ａｒａ的含量在氮饥饿胁迫下显著上升，并在氮恢复培养下逐渐下降。ｄＧｄＧ中ａｒａ含量在氮饥饿／氮恢复过程中的变化与ＴａＧ中的相反；ＭＧｄＧ中ａｒａ的含量在不同培．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
楼乔明 王玉明 刘小芳 李国云 薛长湖 李红艳
以10%浓硫酸-甲醇溶液为甲酯化试剂,采用气相色谱/质谱(GC/MS)联用技术分析南极磷虾(Euphausua su-perba)的脂肪酸组成。根据GC/MS标准质谱数据库检索,结合有机质谱学规律,对多不饱和脂肪酸甲酯的裂解规律和质谱特征进行分析归纳,建立了特征离子确定其碳数和双键数,α离子和ω离子分别确定脂肪链羰基端和甲基端双键位置的方法。通过气相色谱/质谱分析,从南极磷虾中鉴定出27种脂肪酸,其中多不饱和脂肪酸13种,二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)占总脂肪酸含量的40.64%,高于一般海洋鱼虾类,表明南极磷虾具有较高的营养价值和脂质开发潜力。本研究旨在为南极磷虾营养评价和...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
许友卿 郑一民 丁兆坤
为了研究海水鱼合成高度不饱和脂肪酸(Highly unsaturated fatty acids,HUFAs)的关键酶,本研究克隆了军曹鱼(Rachycentron canadum)的△6脂肪酸去饱和酶的部分cDNA序列。根据GenBank已公布的其他鱼类的△6脂肪酸去饱和酶cDNA序列进行分析,设计了一对用于PCR扩增军曹鱼的△6脂肪酸去饱和酶基因保守序列的引物;然后以军曹鱼肝总RNA为模板,通过RT-PCR的方法扩增出一段长度为743bp的片段,该片段经纯化后,连接至pMD18-T载体上进行测序。结果显示,该片段与欧洲狼鲈(Dicentrarchus labrax)△6脂肪酸去饱和酶基因的...
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈占宽 张新友 苗利娟 黄冰艳 汤丰收 张忠信
利用RNAi原理构建花生Δ12-脂肪酸去饱和酶基因的hpRNA表达载体,以抑制该基因的表达,获得高油酸/亚油酸比值的花生种质。根据花生Δ12-脂肪酸去饱和酶基因序列(GenBank:AF248739)设计引物,以豫花4号花生品种DNA为模板,克隆了该基因的启动子及长度约500 bp的外显子片段,在此基础上构建完成由自身启动子引导的花生Δ12-脂肪酸去饱和酶基因的反向重复片段RNAi载体pCAMBIA1301-Afad12Ri。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
魏广莲 徐钢春 顾若波 杜富宽 徐跑
利用RT-PCR和RACE技术获得刀鲚(Coilia nasus)Δ6脂肪酸去饱和酶(Δ6 fatty acyl desaturase,FAD6)的全长cDNA序列2 032 bp,开放阅读框(ORF)为1 338 bp,编码445个氨基酸。其具有3个保守的组氨酸簇(HDXGH、HXXHH和QXXHH)、2个跨膜区和含亚铁血红素结合基序(HPGG)的细胞色素b5结构域等典型的Δ6脂肪酸去饱和酶结构特点。氨基酸同源性分析显示,刀鲚FAD6与海鳗(Muraenesox cinereus)和军曹鱼(Rachycentron canadum)等海水鱼类的相似性达75%~79%,而与淡水鱼类的相似性较低...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
姚琴琴 杨志刚 郭子好 成永旭 王瑶 施秋燕 刘启彬 何杰 杨筱珍
根据中华绒螯蟹FAD9基因cDNA序列(Accession Number:JQ693685)设计引物,扩增得到中华绒螯蟹FAD9基因的开放阅读框(ORF),用原核表达载体p Cold-TF DNA成功构建重组表达载体p Cold-fad9,将p Cold-fad9转入大肠杆菌BL21(DE3)p Lys S,在异丙-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下进行表达。SDS-PAGE分析表明,诱导后出现的特异性蛋白条带,大小与预期理论值(95.10 k D)相符。当IPTG浓度为0.3 mmol/L时,在15℃条件下诱导20 h,重组蛋白的表达量最高。目的蛋白主要存在于上清溶液中,为可溶性表达。利用...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
刘晓璐 孙诤 周志刚
等鞭金藻（Isochrysis sp.）与缺刻缘绿藻（Myrmecia incisa）是具有极高营养价值的微藻，分别富含二十二碳六烯酸（DHA）和花生四烯酸（ArA），本研究对这2种微藻的异养/兼养培养方式展开了探索。在使用葡萄糖作为外源有机碳源时，等鞭金藻和缺刻缘绿藻均可以实现异养生长，在黑暗条件下快速积累生物量。适宜等鞭金藻和缺刻缘绿藻异养的葡萄糖浓度分别为5 g/L和1 g/L。在此基础上，继续探究了氮浓度的影响：对于等鞭金藻，300 mg/L的硝酸钠对于生物量的生产最佳，同时对于胞内DHA积累的促进作用最强；对于缺刻缘绿藻，氮浓度对于微藻的生长影响不明显，但对其ArA的含量影响显著，缺氮培养时ArA的含量最高。在证实了两种微藻的异养特性与最适碳、氮营养供给后，进一步开展了兼养的研究，从而获得了显著提升的微藻生物量以及目标多不饱和脂肪酸的含量。最后，将兼养获得的两种微藻用于投喂卤虫，结果表明DHA与ArA都可以被有效传递给卤虫，从而有望开发成为营养强化型的水产饵料。本研究为等鞭金藻和缺刻缘绿藻的资源化利用提供了有价值的技术参考。
[期刊] 水产学报
[作者]
黄旭雄 曾蓓蓓 穆亮亮 蔡敬 危立坤
为获知盐度—光照强度—温度对半咸水硅藻——角毛藻ＳＨＯＵ－Ｂ９８生长及高不饱和脂肪酸含量的影响，实验采用Ｌ＿９（３～４）正交设计探讨其在不同盐度（６、１２和１８）、光照强度［１０、３０和５０μｍＯＬ／（ｍ～２·Ｓ）］及温度（１０、２０和３０℃）组合条件下的生长及藻细胞ＡＲＡ、ＥＰＡ和ＤＨＡ含量的变化。结果显示，盐度、光照强度、温度三因素对角毛藻ＳＨＯＵＢ９８的生长及高不饱和脂肪酸含量均有显著影响，且存在因素间的交互作用。角毛藻ＳＨＯＵ－Ｂ９８在盐度１２、光照强度３０μｍＯＬ／（ｍ～２·Ｓ）和温度３０℃及盐度１８、光照强度５０μｍＯＬ／（ｍ～２·Ｓ）和温度２０℃的组合条件下生长最快，第４天后这２．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李林强 李建科
采用脲素包合法对华山松籽油中的不饱和脂肪酸进行了分离,并对其主要成分及降血脂作用进行了研究。结果表明,华山松籽油中的不饱和脂肪酸组成为亚油酸915.3g/kg,油酸60.7g/kg,亚麻酸4.0g/kg。华山松籽油不饱和脂肪酸中剂量组和高剂量组小鼠血清中甘油三酯(TG)水平显著或极显著低于高脂模型组(中剂量组P<0.05,高剂量组P<0.01);低剂量组、中剂量组、高剂量组小鼠血清中总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL-C)水平及动脉硬化指数(AI)显著或极显著低于高脂模型组(低剂量组P<0.05,中、高剂量组P<0.01);中剂量组、高剂量组小鼠血清中高密度脂蛋白(HDL-C)水平显著或极...
关键词：
华山松籽油 不饱和脂肪酸 降血脂作用
[期刊] 华北农学报
[作者]
周延清 田苗苗 王芳 陈艳梅 张永华 苑保军
根据NCBI中大豆fad2-1序列设计引物,用PCR方法从大豆的基因组DNA中扩增大豆脂肪酸脱饱和酶基因,克隆到pMD18-Tvector中,转化大肠杆菌JM109菌株,进行测序与比对。然后,将其反向克隆到表达载体pBt,转化农杆菌菌株LBA4404,经双酶切鉴定和PCR扩增检测,获得具有该基因的农杆菌工程菌。结果表明,克隆的fad2-1基因为1 196 bp,基因序列与NCBI中已发表的fad2-1序列只有4%的差异,相似性大于95%,说明克隆的基因是大豆fad2-1基因;构建了该基因的反向表达载体,转入农杆菌内。这为利用农杆菌介导法把该反义基因转入大豆,改良脂肪酸成分奠定了基础。
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
刘书成 章超桦 洪鹏志
鱼油中n-3多不饱和脂肪酸(n-3PUFA)是以甘油酯形式存在的。本文对鱼油保健品中n-3PUFA存在形式的选择,利用生物酶技术富集n-3PUFA的方法如脂肪酶选择性水解、脂肪酶选择性酯交换和脂肪酶选择性酯化进行了详细的综述,并对n-3PUFA甘油酯的前景进行了展望,为进一步开发n-3PUFA甘油酯产品提供参考。
关键词：
鱼油 脂肪酶 n-3 PUFA 甘油酯
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