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[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
蓝天一 牛东红 刘晓军 彭茂潇 李家乐
为研究缢蛏C型凝集素基因ScCTL-2的结构和功能特点,克隆了该基因的全长序列,并对其mRNA的表达模式以及重组蛋白的凝菌活性进行研究。结果显示,ScCTL-2的cDNA全长2 194 bp,共编码630个氨基酸,其氨基酸序列拥有4个C型凝集素糖识别结构域和1个N端跨膜区,这一特殊的序列结构不同于任何一种已知的C型凝集素。基因mRNA在健康缢蛏肝胰腺中的表达量显著高于其他组织,在鳃中的表达量次之,而在其余组织中的表达量没有显著性差异;金黄色葡萄球菌与鳗弧菌感染能够显著上调ScCTL-2在缢蛏血细胞中的表达。ScCTL-2的重组蛋白凝菌实验显示:在Ca~(2+)存在的情况下,rScCTL-2能够对实验所采用的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、藤黄微球菌和酿酒酵母均产生明显的凝集反应;当溶液中不存在Ca~(2+)时,凝集反应几乎不能发生,意味着rScCTL-2的凝菌活性是严格Ca~(2+)依赖的。研究表明,ScCTL-2可能是一种新的无脊椎动物C型凝集素类型,它具有无脊椎动物C型凝集素普遍具备的免疫活性,可能在缢蛏的免疫中具有重要作用。
关键词：
缢蛏 C型凝集素 凝菌
[期刊] 水产学报
[作者]
徐晓荣 施鹏 徐继林 廖凯 冉照收 严小军
本研究利用cDNA末端快速扩增（RACE）技术获得了缢蛏半乳糖凝集素基因（ScGL）。ScGL全长为1 282 bp，5′非编码区35 bp，3′非编码区329 bp，开放阅读框918 bp，编码305个氨基酸。氨基酸序列分析显示ScGL无跨膜结构域；与已报道的缢蛏半乳糖凝集素含1个糖识别结构域（CRD）不同，ScGL具有2个CRD。相似性分析显示，ScGL与其他软体动物的半乳糖凝集素具有较高的相似性，与菲律宾蛤仔相似性最高，达65%；与已报道的2个缢蛏半乳糖凝集素相似性分别为39.74%和44.76%。系统进化上ScGL与菲律宾蛤仔半乳糖凝集素聚为一支。重组表达发现ScGL在包涵体表达，分子量约34.4 ku。荧光定量PCR分析显示，ScGL在缢蛏鳃、肠、唇瓣、外套膜、出水管、入水管、足和内脏团中均表达；其中肠、内脏团、唇瓣和足中表达量较高，出水管和入水管中表达量最低。消化腺ScGL表达量分别在金黄色葡萄球菌感染后3和48 h显著高于对照组；鳃ScGL表达量分别在鳗弧菌和金黄色葡萄球菌感染后6和48 h显著高于对照组，说明ScGL参与了病原诱导的缢蛏免疫应答。本研究为深入探索ScGL在缢蛏免疫中的作用奠定基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
胡钰婷 张殿昌 崔淑歌 郭华阳 陈明强 江世贵
通过EST筛选结合重测序法获得合浦珠母贝一种C-型凝集素cDNA的全长序列(命名为PoLEC1)。PoLEC1全长988 bp,5'-UTR为33 bp,3'-UTR为101 bp,开放阅读框为864 bp,编码287个氨基酸,分子量为31.68 ku,理论等电点约5.83。预测的氨基酸序列中含有信号肽(Met1-Ser19)和糖结合位点。同源性分析结果表明,PoLEC1与其它物种C-型凝集素的的糖识别结构域序列的同源性在18.8%～28.6%,相似性在28.9%～50.0%之间。进化树分析结果表明,PoLEC1与栉孔扇贝聚为一支。组织表达分析表明,PoLEC1 mRNA在消化腺、外套膜、性腺...
[期刊] 水产学报
[作者]
刘逸尘 刘丽静 张亦陈 耿绪云 孙妍 孙金生
研究拟通过分析对虾C型凝集素的活性特点,探讨其在对虾先天免疫应答过程中的潜在功能以及在养殖生产实践中的应用。实验利用原核表达系统对中国明对虾C-型凝集素基因的两个串联的糖识别结构域(carbohydrate recognition domain,CRD)进行了重组表达,并通过纯化复性获得了重组目的蛋白(rFclectin-CRD1和rFclectin-CRD2)。活性分析结果显示,重组目的蛋白对多种病原菌有凝集和抑制生长的作用,并且具有Ca2+依赖活性;其凝集活性可被半乳糖、肽聚糖、脂多糖等多种病原相关分子模式所抑制,研究结果证实,Fclectin是一种典型的C-型凝集素,它可能作为中国明对虾...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
沈淑芳 朱玲 李加琦 薛素燕 李阳 陈琼琳 毛玉泽 庄志猛 方建光
通过cDNA末端快速扩增(Rapid amplification of c DNA ends,RACE)技术克隆得到魁蚶(Scapharca broughtonii)C型凝集素(C-type lectin,Sb-Lec1)基因,该基因全长为700 bp,其中,5′-UTR为29 bp,3′-UTR为167 bp,开放阅读框长度为504 bp,编码167个氨基酸,包括长度为23个氨基酸的信号肽序列、129个氨基酸的糖识别结构域(CRD)以及参与二硫键形成的6个半胱氨酸。预测蛋白分子量为19.11 k Da,
[期刊] 水产学报
[作者]
李俊烨 宋巧珍 张亦陈 刘逸尘 耿绪云 孙金生
C型凝集素是一种依赖于Ca(2+)而发挥功能的糖蛋白,在一线的固有免疫防御过程中发挥着重要作用。围绕对虾C型凝集素开展深入研究,不仅可以丰富无脊椎动物固有免疫学内容,还有望将其开发为具有免疫增强效果的活性饵料,应用于对虾的健康养殖。本实验根据实验室前期转录组信息提示克隆获得了凡纳滨对虾一种新的C型凝集素基因(LvLc1,Gen Bank注册号:KY937940)。生物信息学分析显示LvLc1基因的开放阅读框全长891 bp,编码296个氨基酸,该基因编码的蛋白质含有一个保守的糖识别结构域(carbohyd
[期刊] 水产学报
[作者]
王敏 吴萍 叶元土 石桃丹 魏育红
C型凝集素是一类Ca2+依赖活性的糖蛋白,在虾蟹类的免疫防御中发挥着重要作用。采用RT-PCR及RACE技术首次克隆了秀丽白虾C型凝集素家族4个基因(EmCTL-1、EmCTL-2、EmCTL-3、EmCTL-4)的cDNA全长。这4个C型凝集素基因的cDNA全长分别为1 390、1119、1 364和1 299 bp,分别含996、969、1 026和1 044 bp的开放阅读框,各编码332、322、341和347个氨基酸的蛋白。其氨基酸序列与罗氏沼虾相应的C型凝集素的相似性分别为40%、37%、69%和73%,与其他海水虾类的相似性在30%~41%之间。阳性选择模型分析显示虾类的C型凝集...
[期刊] 水产学报
[作者]
夏丹丹 马爱军 黄智慧 王新安 孙志宾 崔文晓 曲江波
大菱鲆C-型凝集素(SmLec1)是一种重要的免疫因子,本实验通过分析其活性特点以及环境胁迫对其表达调控的影响,探讨其在大菱鲆先天免疫应答过程中的潜在功能以及养殖环境中的应用。实验利用原核表达系统进行重组表达,并通过纯化获得19 ku重组目的蛋白;活性分析结果显示,SmLec1对所选6种细菌的凝集作用存在差异,其中对鳗弧菌和爱德华氏菌具有明显的凝集作用;在选取的8种糖类中,木糖、果糖、蔗糖、乳糖和甘露糖能够抑制SmLec1的凝集活性;在理化因子(pH、温度)中,pH37°C时对SmLec1的凝集活性产生抑
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨在君 刘玲玲 彭正松
为克隆盾叶半夏凝集素基因，并对其功能进行分析。采用ＲＡＣＥ技术从盾叶半夏中克隆得到盾叶半夏凝集素基因的全长ＣＤＮＡ序列，命名为ｐｐｌ。同时，构建了ｐｐｌ基因的原核表达载体，并成功实现了３３ ｋ ＤＡ重组蛋白在Ｅ．Ｃｏｌｉ Ｂｌ２１中的表达。纯化后的重组蛋白ｐｐｌ用于凝血和体外抗癌试验。该基因的全长ＣＤＮＡ序列为１ ５０４ Ｂｐ，其中开放性阅读框（ｏＲＦ）８１３ Ｂｐ，编码２７０个氨基酸，具有３个甘露糖结合识别位点。ｐｐｌ具有凝血活性，这种凝血活性可受甘露糖抑制。ｐｐｌ对人鼻咽癌细胞（ＣＮＥ）、人宫颈癌细胞（ＨＥｌＡ）及人乳腺癌细胞（ＢＣＡｐ－３７）的生长均具有抑制作用，其中对ＨＥｌＡ细胞的抑制．．．
关键词：
盾叶半夏 凝集素 基因克隆 功能分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
李明想 柏素花 张玉刚 祝军 戴洪义
以苹果幼叶为试验材料,通过同源克隆和RT-PCR方法分离出B_LECTIN基因家族中的一个基因,命名为MdMBL。分析结果表明,克隆得到的MdMBL长度为1 181 bp,包括20 bp的5'非编码区、81 bp的3'非编码区和一个长度为1 080 bp编码359个氨基酸的开放阅读框,推测该蛋白质分子量为39.76 kDa,其等电点为8.72。在构建的MBL系统进化树中,MdMBL与葡萄的MBL的关系最近,其次为橹豆的MBL,与苹果的MBL2同源基因进化关系最远。相对荧光定量RT-PCR分析表明,MdMBL具有组织特异性,在茎中表达量最高,在花中表达量最低;低温胁迫促使MdMBL表达量升高,M...
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵欢
为了克隆掌叶半夏凝集素基因(Pinellia pedatisecta agglutinin,PPA),并对其进行生物信息学分析和亚细胞定位。采用PCR技术扩增掌叶半夏凝集素基因的ORF序列,构建pCAMBIA1300-35S-PPA-e GFP重组载体,导入农杆菌GV3101并在烟草中进行瞬时表达,采用激光扫描共聚焦显微镜观察其亚细胞定位。克隆获得的PPA基因全长由777个核苷酸组成,编码258个氨基酸,含有3个甘露糖结合位点和2个保守的B-lectin结构域,Gen Bank登录号为KF154981,氨
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
于金红 潘鲁青
通过RT-PCR扩增三疣梭子蟹C-型凝集素(C-type lectin like-domain protein,CTLD)基因序列,将目的基因克隆入质粒pET32a,构建原核表达重组质粒pET32a-CTLD。将重组质粒转化入大肠杆菌BL21中,通过IPTG诱导CTLD的表达,对其表达产物进行SDS-PAGE和Western blot检测。用His GraviTrap Ni亲和层析柱及超滤离心管纯化目的蛋白,并对其进行活性检验。结果表明,构建得到CTLD基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;诱导表达出相对分子质量(M)39 600的目的蛋...
[期刊] 水产学报
[作者]
吴彪 迟长凤 杨爱国 张士璀 刘志鸿 周丽青
为研究虾夷扇贝C型凝集素的母源传递及其抑菌作用,实验运用qRT-PCR技术检测了经鳗弧菌刺激后虾夷扇贝卵巢中C型凝集素的表达模式,比较分析了C型凝集素基因在正常虾夷扇贝和鳗弧菌刺激的虾夷扇贝所产的卵及其胚胎发育前期的存在与变化;通过抑菌实验研究了卵胞浆中C型凝集素抑制细菌存活的作用。结果表明,鳗弧菌刺激能够诱导虾夷扇贝卵巢中的C型凝集素mRNA表达量显著变化,最高表达量出现在刺激8 h后,为对照组的6.2倍;母体中C型凝集素可以传递给卵和胚胎,刺激组表达量极显著高于正常组,且表达量都随胚胎发育逐渐降低,至受精36 h时分别为正常对照卵的0.3和0.2倍;蛋白终浓度为200和400μg/mL的卵...
关键词：
虾夷扇贝 C型凝集素 母源传递 抑菌作用
[期刊] 水产学报
[作者]
于金红 潘鲁青 张辉
为研究凡纳滨对虾C-型凝集素的免疫功能,实验利用原核表达系统对凡纳滨对虾C-型凝集素基因的开放阅读框进行了重组表达,并通过纯化分离获得重组目的蛋白,采用血细胞悬浮培养的方法,研究了重组C-型凝集素对凡纳滨对虾血细胞免疫作用的影响。实验梯度设置为对照组和重组C-型凝集素蛋白(1.0 mg/mL),分别在0、3、6、9、12、24 h取培养的血细胞和培养液进行免疫相关指标的测定。结果表明,重组C-型凝集素经SDS-PAGE分析显示在39 ku处有显著诱导条带,与预测的分子量大小基本一致,Western-blotting分析可以与anti-His抗体特异性结合,从而证明C-型凝集素重组蛋白在大肠杆菌...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
周春花 黎敏 吴小平 曾志恒
从军山湖中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)获得血清,用人A、B、AB、O型红细胞、鸡红细胞及部分细菌菌体检测了血清的凝集活力,同时进行了糖抑制、热稳定性及pH影响试验。结果显示血清能凝集人四种血型红细胞和鸡红细胞,其中对人A型红细胞凝集活力最高;能够和大肠杆菌发生凝集反应,但不能和枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌发生凝集反应;凝集条件为pH5.0~5.8、温度4~37℃;1.0%的D-葡萄糖、D-果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖均能不同程度地抑制血清与人A型红细胞的凝集作用。
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