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[期刊] 水产学报  [作者] 徐晓荣  施鹏  徐继林  廖凯  冉照收  严小军  
本研究利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得了缢蛏半乳糖凝集素基因(ScGL)。ScGL全长为1 282 bp,5′非编码区35 bp,3′非编码区329 bp,开放阅读框918 bp,编码305个氨基酸。氨基酸序列分析显示ScGL无跨膜结构域;与已报道的缢蛏半乳糖凝集素含1个糖识别结构域(CRD)不同,ScGL具有2个CRD。相似性分析显示,ScGL与其他软体动物的半乳糖凝集素具有较高的相似性,与菲律宾蛤仔相似性最高,达65%;与已报道的2个缢蛏半乳糖凝集素相似性分别为39.74%和44.76%。系统进化上ScGL与菲律宾蛤仔半乳糖凝集素聚为一支。重组表达发现ScGL在包涵体表达,分子量约34.4 ku。荧光定量PCR分析显示,ScGL在缢蛏鳃、肠、唇瓣、外套膜、出水管、入水管、足和内脏团中均表达;其中肠、内脏团、唇瓣和足中表达量较高,出水管和入水管中表达量最低。消化腺ScGL表达量分别在金黄色葡萄球菌感染后3和48 h显著高于对照组;鳃ScGL表达量分别在鳗弧菌和金黄色葡萄球菌感染后6和48 h显著高于对照组,说明ScGL参与了病原诱导的缢蛏免疫应答。本研究为深入探索ScGL在缢蛏免疫中的作用奠定基础。
[期刊] 上海海洋大学学报  [作者] 蓝天一  牛东红  刘晓军  彭茂潇  李家乐  
为研究缢蛏C型凝集素基因ScCTL-2的结构和功能特点,克隆了该基因的全长序列,并对其mRNA的表达模式以及重组蛋白的凝菌活性进行研究。结果显示,ScCTL-2的cDNA全长2 194 bp,共编码630个氨基酸,其氨基酸序列拥有4个C型凝集素糖识别结构域和1个N端跨膜区,这一特殊的序列结构不同于任何一种已知的C型凝集素。基因mRNA在健康缢蛏肝胰腺中的表达量显著高于其他组织,在鳃中的表达量次之,而在其余组织中的表达量没有显著性差异;金黄色葡萄球菌与鳗弧菌感染能够显著上调ScCTL-2在缢蛏血细胞中的表达。ScCTL-2的重组蛋白凝菌实验显示:在Ca~(2+)存在的情况下,rScCTL-2能够对实验所采用的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、藤黄微球菌和酿酒酵母均产生明显的凝集反应;当溶液中不存在Ca~(2+)时,凝集反应几乎不能发生,意味着rScCTL-2的凝菌活性是严格Ca~(2+)依赖的。研究表明,ScCTL-2可能是一种新的无脊椎动物C型凝集素类型,它具有无脊椎动物C型凝集素普遍具备的免疫活性,可能在缢蛏的免疫中具有重要作用。
[期刊] 上海海洋大学学报  [作者] 胡园  蒋倩倩  李尚鲁  周朝生  柴雪良  方军  张炯明  沈亦军  
对三门湾养殖缢蛏和野生缢蛏的基本营养成分(水分、粗蛋白、粗脂肪、糖原和灰分)、氨基酸、脂肪酸、质构、色差等品质相关指标进行分析。结果表明:三门湾养殖缢蛏和野生缢蛏的水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分存在显著性差异(P<0.05);养殖缢蛏和野生缢蛏的氨基酸组成及含量存在差异,养殖缢蛏中含量较高的氨基酸排列为:谷氨酸﹥天门冬氨酸﹥赖氨酸﹥精氨酸﹥亮氨酸﹥丙氨酸﹥缬氨酸﹥甘氨酸,而野生缢蛏中含量较高的氨基酸排列为:谷氨酸﹥天门冬氨酸﹥丙氨酸﹥亮氨酸﹥赖氨酸﹥精氨酸﹥甘氨酸﹥缬氨酸;养殖缢蛏和野生缢蛏脂肪酸组成及含量呈现出比较一致的变化,但野生缢蛏的不饱和脂肪酸百分含量高于养殖缢蛏;不同部位的质构剖面分析结...
[期刊] 上海海洋大学学报  [作者] 牛东红  冯冰冰  李家乐  
从缢蛏(Sinonovacula constricta)cDNA文库中筛选出一条铁蛋白同源序列,直接扩增质粒获得全长cDNA序列,共1 106 bp,包括128 bp的5'非翻译区和309 bp的3'非翻译区,以及669 bp的开放阅读框。阅读框共编码222个氨基酸,N端含有17个氨基酸的信号肽序列,推算的分子量约为25.47 ku,理论等电点为5.48。氨基酸序列分析结果表明,该基因含有保守的铁氧化酶活性中心的7个氨基酸残基,但是不具有糖基化位点(NQS)和5'非编码区铁蛋白的铁反应元件(iron response element,IRE),属于H型铁蛋白基因,该基因被命名为ScFERs。系...
[期刊] 水产学报  [作者] 冯冰冰  钟玉民  牛东红  陈慧  林国文  李家乐  
为研究缢蛏功能基因的表达调控,利用SMART cDNA文库构建试剂盒成功构建了缢蛏肝脏组织的标准化cDNA文库。对随机选取的5 679个克隆进行随机测序,比对、筛选出2条β-actin同源序列,对其中一条EST序列两端进行扩增、测序,然后进行5′RACE(rapidamplification of cDNA ends,RACE)扩增、测序,拼接得到全长cDNA序列,命名为β-ACTIN 1。该序列全长为1 552 bp,包括73 bp的5′非翻译区和348 bp的3′非翻译区,以及1 131 bp的开放阅读框。阅读框共编码376个氨基酸,推算分子量约为41.95 ku,理论等电点为5.23。与...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 冯冰冰  牛东红  钟玉民  陈慧  林国文  李家乐  
从缢蛏(Sinonovacula constricta Lamarck)cDNA文库中筛选出一条热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)同源序列,采用EST扩增和5′RACE(rapid amplification of cDNA ends,RACE)扩增方法获得全长cDNA序列,共2 335 bp,包括76 bp的5′非翻译区和309 bp的3′非翻译区,以及1 950 bp的开放阅读框。阅读框共编码649个氨基酸,推算的分子量约为70.89 kD,理论等电点为5.28。氨基酸序列分析结果表明,该基因的氨基酸序列含有HSP70家族的3个签名序列,2个糖基化位点...
[期刊] 上海海洋大学学报  [作者] 熊娅  牛东红  李智  彭茂潇  李蓓蓓  吴应晗  李家乐  
类胰岛素生长因子(insulin-like growth factor, IGF)信号通路在机体的发育、繁殖以及生长等过程中起着重要的调控作用。类胰岛素生长因子酸不稳定亚基(IGF acid-labile subunit, IGFALS)是IGF系统中的重要一员,可通过延长IGF的半衰期参与IGF信号通路的调控。本研究首次在缢蛏转录组数据库中筛选鉴定了两个IGFALS基因,包含完整的开放阅读框,分别命名为IGFALSa和IGFALSb。IGFALSa基因的cDNA序列为4809bp,编码996个氨基酸;IGFALSb基因的cDNA序列为1925bp,编码546个氨基酸。在缢蛏不同发育期的表达分析中发现,IGFALSa和IGFALSb在幼虫的前期发育阶段均只有少量表达,而随着幼虫的发育,其表达量逐渐上升;组织表达分析表明,IGFALSa在外套膜和性腺中高表达,IGFALSb则在水管中高表达。利用不同浓度胰岛素短期刺激缢蛏稚贝,当浓度为10mg/L时,两个IGFALS基因表达量均显著上调,其下游基因IRS、PDK1、MPKP1的表达量也显著上调;进一步利用10mg/L胰岛素长期喂养缢蛏稚贝,结果显示其壳长和壳宽的日生长率均显著提升。
[期刊] 水产学报  [作者] 乔晓静  张卫卫  邵铱娜  赵雪琳  李成华  
过氧化氢酶(catalase, CAT)是抗氧化酶体系的主要成员,在维持机体氧化还原平衡、抵御病原感染过程中具有重要作用。为研究CAT基因在软体动物应答病原胁迫过程中的作用,本研究采用RACE技术通过克隆和序列拼接获得了缢蛏CAT基因的全长cDNA序列,并命名为ScCAT。ScCAT基因全长为2840 bp,编码508个氨基酸。序列分析表明ScCAT蛋白含有1个CAT核心结构域(25-410),1个保守的酶活性位点(_(61)FNRERIPERVVHAKGAGA_(78))和1个亚铁血红素结合位点(_(351)RLFSYPDTH_(359))。多序列比对和系统进化树分析结果表明ScCAT属于CAT基因家族,且与无脊椎动物文蛤的亲缘关系最近。组织分布表明ScCAT在所有检测的组织中均能表达,其中在肝胰腺中表达量最高,鳃中次之,血细胞中的表达量最低,分别为闭壳肌的85.67倍(P < 0.01)、50.09倍(P < 0.01)和0.76倍。副溶血弧菌胁迫下,ScCAT在缢蛏肝胰腺中的表达明显上升,且在12 h达到最高值,为对照组的3.56倍(P < 0.01);酶活测定表明副溶血弧菌胁迫显著诱导缢蛏肝胰腺和鳃组织中的CAT活性,为进一步探讨ScCAT的蛋白功能,构建ScCAT原核表达质粒,通过诱导、纯化后发现ScCAT重组蛋白具有显著的CAT酶活性。本研究结果表明ScCAT作为一类重要的抗氧化酶参与了缢蛏体内的免疫应答。
[期刊] 海洋水产研究  [作者] 陈聚法  张东杰  宋建中  孟伟  辛福言  曲克明  马绍赛  
采用翻耕和翻耕并筑池的物理修复方式对乳山湾西流区面积约为8.67hm2的老化滩涂进行了修复和缢蛏养殖实验。实验从2003年3月投播蛏苗到2004年7月成蛏收获,共进行了16个月。结果表明,(1)翻耕30、45cm和翻耕筑池3种修复方式均显示出一定的效果,修复区缢蛏生物量分别比对照区高0.33、0.26和0.59kg/m2,平均壳长分别高1.9、1.4和6.1mm。3种修复方式中,以翻耕筑池的效果最佳。(2)修复区和对照区缢蛏产量与底质中硫化物和有机碳的平均含量大致呈线性负相关关系,与平均泥温的关系不明显。
[期刊] 水产学报  [作者] 李磊  沈新强  李超  王云龙  蒋玫  许高鹏  
为了研究苯并[a]芘(Bap)、菲PHE在缢蛏体内的富集及释放过程的动力学特征,通过双箱动力学模型对富集(15 d)与释放(9 d)过程进行非线性曲线拟合,获得缢蛏对Ba P、PHE的吸收速率常数k1、释放速率常数k2、生物富集因子BCF、平衡状态下生物体内Ba P含量CAmax、生物学半衰期B1/2。结果显示,缢蛏对Ba P的富集能力高于PHE,Ba P增加幅度分别为0.45 ng/(kg·d)(40μg/L实验组)、0.33 ng/(kg·d)(20μg/L实验组)、0.23 ng/(kg·d)(10μg/L实验组);PHE增加幅度分别为0.33 ng/(kg·d)(30μg/L实验组)、...
[期刊] 海洋渔业  [作者] 刘达博  牛东红  姜志勇  李家乐  
运用多变量形态度量学分析方法,对我国沿海庄河、汉沽、海阳、盐城、崇明、宁波、漳州7个地理群体缢蛏的12个形态性状进行了形态差异研究。聚类分析和主成分分析结果表明,汉沽群体和海阳群体首先与庄河群体聚类,之后依次与崇明群体和盐城群体聚类,最后与宁波和漳州群体聚为一支。主成分分析构建了3个主成分,其贡献率:主成分1为36.28%,主成分2为22.23%,主成分3为12.72%,累积贡献率为71.23%。判别分析结果表明,7群体间形态差异显著(P<0.01)。建立7群体缢蛏的判别函数,其判别准确率P1为66.67%~86.67%,P2为68.96%~100%。7群体的综合判别率为77.93%。
[期刊] 中国水产科学  [作者] 李炼星  李浩  杜文俊  牛东红  李家乐  沈和定  
以6个缢蛏(Sinonovacula constricta)自然群体(浙江象山群体、浙江乐清群体、福建霞浦群体、福建长乐群体、江苏射阳群体和上海崇明群体)为材料,构建基础群体F_0,采用群体选育方法进行多代连续选育(选择强度2.063),比较了选育系F_5与对照群体的生长差异,并估计F_5的选择反应、现实遗传力和遗传获得。结果表明,F_5的卵径及受精率与对照组无显著差异(P>0.05),但F_5的变态率、存活率及后期壳长生长明显优于对照组(P<0.05);7360日龄F_5壳长的选择反应、现实遗传力与遗传
[期刊] 水产学报  [作者] 谢淑媚  牛东红  阮海灯  王泽  王飞  陈世娥  李家乐  
类胰岛素生长因子结合蛋白(IGFBP)是IGF系统的一部分,主要参与IGF的运输、定位和生物活性调节。本研究采用RACE技术和长PCR技术,克隆了缢蛏IGFBP基因的c DNA和DNA全长序列,应用荧光定量PCR技术分析了缢蛏不同发育时期和不同组织中IGFBP mRNA的表达特征,并进一步筛选了IG FBP基因与生长性状相关的SNP位点。序列分析表明,缢蛏IGFBP c DNA序列全长631 bp,包括5'端非编码区60 bp,3'端非编码区136 bp和开放阅读框435 bp,编码144个氨基酸。该基因含有保守的IGFBP-N端,包含12个半胱氨酸残基,其中1~18个氨基酸为信号肽,属于分泌...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 范德朋  潘鲁青  马甡  董双林  
缢蛏(Sinonovaculaconstricta)分为壳长约4 0、5 0、6 0cm3组。通过实验生态学方法研究缢蛏在不同盐度和pH下的耗氧率和排氨率变化规律。结果表明,盐度对缢蛏的耗氧率和排氨率有极显著影响(F>F0.01),且缢蛏单位体重耗氧率、排氨率随其个体的增大而变小;当盐度为6~30时,缢蛏的耗氧率和排氨率呈1个峰值变化,在盐度22时均达到最大值。pH对缢蛏的耗氧率无显著影响(FF0.01),此时,缢蛏的排氨率出现1个峰值变化,当pH为8时达到最大值。
[期刊] 上海海洋大学学报  [作者] 李炼星  杜文俊  王成东  王杰  牛东红  李家乐  沈和定  
为了探明缢蛏生长性状与耐温、耐高盐性能的关系,在乐清湾的优良群体子四代的基础上,于2014年获得了27个生长性状差异的家系,对各家系前期3个月的生长性能测定后,得到了生长优势家系5个,生长速度平均家系17个,生长劣势家系5个,再经过3个月的室外培育至幼贝后,将前期生长优势和生长劣势家系取出。预实验确定了缢蛏半致死温度、盐度分别是36.5℃和35.8。以群体繁育的缢蛏作为实验对照,将各家系分别培育在盐度正常、水温为36.5℃和水温正常、盐度为35.8的环境中。方差分析和多重比较各家系存活率,结果表明:在半致死温度和盐度条件下,生长优势家系存活率高于生长劣势家系,且不同家系间耐温、耐高盐性存在显著...
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