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[期刊] 中国农业科学
[作者]
殷幼平 袁训娥 李强 王中康
【目的】利用绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因标记枯草芽孢杆菌生防菌株CQBS03,以研究其在柑橘叶片上的定殖规律。【方法】采用重叠PCR方法将p43启动子和gfp进行融合,并与大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pHY300PLK连接构建重组质粒pHY43G,以重组质粒电脉冲转化生防菌株CQBS03,培养后于荧光显微镜下观察并通过SDS-PAGE分析工程菌株GFP的表达情况,然后进行工程菌株对柑橘溃疡病菌的抑菌试验、生长动力学分析、稳定性测试。采用叶片喷雾方法接种,平皿稀释分离培养方法测定CQBS03-pHY43G在柑橘叶片上的定殖情况。【结果】重组菌C...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
刘芳 梁运祥
以质粒pAD123为模板扩增出绿色荧光蛋白基因(gfp)序列,扩增产物连接到经酶切的枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)整合载体pAXc,构建重组质粒pAXc-gfp.pAXc-gfp线性化后转入野生型枯草芽胞杆菌B411,gfp编码序列通过同源重组整合到B.subtilis B411染色体上,获得在无抗性选择压力下稳定表达绿色荧光蛋白的重组子B412.
关键词：
绿色荧光蛋白 枯草芽胞杆菌 基因标记
[期刊] 华北农学报
[作者]
孟立花 李社增 郭庆港 马平 刘大群
枯草芽孢杆菌NCD-2菌株对棉花黄萎病病原菌大丽轮枝菌具有较强的抗生作用。通过对NCD-2菌株培养条件的研究,结果表明在30℃、培养液初始pH为7.0和培养时间为2 d条件下,利用NB培养基培养该菌株所得培养液抑菌活性优于其他培养基,其培养液经硫酸铵沉淀所得的蛋白粗提液经RNA酶处理后的抑菌活性与对照相比差异不显著,经蛋白酶K和胰蛋白酶处理后的抑菌活性与对照相比差异显著;蛋白粗提液经60℃处理后的抑菌活性与对照相比差异不显著,经80,100,120℃处理后抑菌活性与对照相比差异显著,但经120℃处理30 min后仍有一部分抑菌活性,研究结果说明该菌株产生的抗菌物质存在性质上的差异。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
郭菁 田宝玉 蔡婉玲 黄薇 江贤章 黄建忠
侧孢短芽孢杆菌G4菌株在侵染线虫的过程中可以分泌蛋白酶,降解线虫体壁,从而帮助细菌侵入宿主体内.在本文中,侧孢短芽孢杆菌的胞外蛋白酶BLG4基因经克隆后插入到改造后的枯草芽孢杆菌表达载体pWT22中,构建重组表达质粒pWT22-BLG4.构建成功的重组质粒通过化学转化法转入枯草芽孢杆菌蛋白酶缺失菌株WB600中,转化子pWT22-BLG4/WB600在IPTG(1.0 mmol.L-1)的诱导下,发酵液上清中的蛋白酶活可达到620 U.mL-1,高于出发菌株G4的BLG4酶活(240 U.mL-1).经SDS-PAGE分析,重组子pWT22-BLG4/WB600产生了一条分子质量约为30 ku...
[期刊] 华北农学报
[作者]
郝慧娟 刘洪伟 尹淑丽 刘倩倩 张丽萍 宋水山
为研究枯草芽孢杆菌ＢＳＤ－２在黄瓜植株上的定殖情况，采用稍加改进的电击转化方法将含有ＧＦＰ基因的Ｐ ＧＦＰ４４１２质粒导入枯草芽孢杆菌ＢＳＤ－２菌株中，并测定了其生长曲线、质粒遗传稳定性及其对枯萎病菌和灰霉病菌的抑制作用。结果表明，成功获得具有绿色荧光的菌株ＢＳＤ－２－ＧＦＰ；标记菌株的生长趋势与野生型菌株基本一致；在无选择压力条件下连续培养５６ ｈ，菌株ＢＳＤ－２－ＧＦＰ的遗传稳定性为８６％；其对植物枯萎病菌和灰霉病菌具有很强的抑制作用，与野生型菌株相当。通过荧光显微镜观察发现，标记菌株处理２４ ｈ后即可在黄瓜根内部发现，５ Ｄ后可在叶脉发现，且５０ Ｄ后仍可在叶脉观测到。结果表明，菌株ＢＳ．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
田兆丰 刘伟成 董丹 李永丹 张涛涛 刘德文
将含有绿色荧光蛋白基因的质粒pGFP4412,电击转入生防菌株枯草芽孢杆菌Kct99,获得具有良好发光表型的荧光标记菌株gfp-Kct99。经稳定性测定表明,质粒pGFP4412在gfp-Kct99中的遗传稳定性为89%。平板对峙培养和温室盆栽接种试验显示,标记菌株gfp-Kct99对甘蓝枯萎病菌保持了原有的拮抗活性;以标记菌株和野生型菌株培养液对甘蓝盆栽苗灌根处理5 d后再接种病原菌,对甘蓝枯萎病的防治效果分别为87.7%,90.2%,二者无显著性差异,但均显著高于同时接种生防菌和病原菌、接种病原菌5 d后再接种生防菌2种处理,说明,绿色荧光标记菌株gfp-Kct99抗甘蓝枯萎病的活性未受标...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘颖 丁桂珍 胡传红 缪礼鸿 潘志祥
在养殖水体中加入特定的芽孢杆菌及酵母菌 ,能使其定殖于养殖水体 ,生长繁殖后测定各项水质指标 ,证明其能迅速而有效的降低水中亚硝酸盐的含量 ,并对水中溶氧的影响较小 ,能够有效地改善养殖水体的水质状况。
关键词：
芽孢杆菌 酵母菌 亚硝酸盐 溶解氧
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李健 何鹏飞 李咏梅 吴毅歆 何鹏搏 孔宝华 李兴玉 MUNIR Shahzad 何月秋
为明确枯草芽孢杆菌L1-21在柑橘叶片、果实内的定殖能力及其防治果实绿霉病的效果,通过向柑橘叶片喷施10~6 cfu/mL的L1-21菌株的绿色荧光标记菌(L1-21-GFP)发酵液,测定其在叶片内的定殖数量及传导能力;采用10~8 cfu/mL的菌液喷施和浸泡处理柑橘果实,检测其在果实内的定殖情况,用注射法接种Penicillium digitatum孢子并计算发病率,测定其对绿霉病的防控效果。结果显示,处理后10 min, L1-21-GFP在叶表及叶肉中的定殖量分别达到1.36×10~3和8.08×10~2cfu/cm~2,并呈现持续增长的趋势。处理后1 h, L1-21-GFP向下传导到叶表的菌含量为1.51×10~2 cfu/cm~2,并稳定存在于叶表中;处理后2 h,传导到叶肉的菌含量为5.67 cfu/cm~2,逐渐增加到30 h时的1.15×10~3 cfu/cm~2。L1-21-GFP能在果实内定殖,浸泡1 h果肉和果皮中的定殖量分别为9.51×10~3和3.51×10~4 cfu/g,但在不同柑橘品种果实间定殖能力有显著性差异,椪柑中定殖量最高。浸泡30 min后,L1-21对果实绿霉病防效第3天为100%,第5天为80.36%。以上结果表明,枯草芽孢杆菌L1-21能高效定殖于柑橘叶片及果实内,可以利用该菌株防治柑橘病害。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈丽娜 伍辉军 周晓辉 高学文
用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)OKB105菌株菌悬液处理水稻种子及幼苗,发现OKB105菌株能够显著促进水稻生长。为了研究枯草芽孢杆菌的促生机制,建立了水稻与OKB105菌株的互作体系,并对互作后的OKB105菌株胞内全蛋白的双向电泳条件进行了优化。结果表明:分离胶浓度为10%,等电聚焦(IEF)程序中最高电压8 000 V,聚焦60 000 Vh且增加低电压慢速除盐步骤能够提高双向电泳图谱质量,为蛋白质组学水平上研究水稻与枯草芽孢杆菌的互作奠定了良好的基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
高会会 侯立婷 李槿年 黄安宁
为了示踪研究拟态弧菌感染草鱼的动态过程,将增强型绿色荧光蛋白编码基因EGFP克隆至质粒p BAD24,并转化到拟态弧菌04-14菌株构建荧光标记重组菌。重组菌经阿拉伯糖诱导后,能高效表达EGFP蛋白;荧光显微镜观察和流式细胞仪检测均发现重组菌能够发出明显的绿色荧光信号,且传至30代后质粒稳定率仍为100%;生物学特性检测结果显示,与野生株相比,重组菌的形态、生长特性和细胞黏附性均未发生明显改变。用标记重组菌浸泡感染草鱼,定点采集鳃、肠道、肌肉、头肾、脾脏和肝脏,借助荧光信号检测4 d内细菌在不同组织脏器中的动态分布。结果发现感染4 h后即可在肠道和鳃中检测到绿色荧光信号,标记菌检出量分别为3....
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
龙伟 黄广远 姚小华 王开良 俞春莲 王昆喜 董爽
【目的】针对大规格油茶容器苗培育周期长、成本高等问题开展研究，油茶提高种苗生长效率，实现速培育。【方法】以长林4号、40号和53号1年生油茶容器苗为试验材料，利用盆栽试验测定枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌施用浓度对油茶种苗生长的影响。【结果】苗高、地径、干物质重量和根冠比在加入枯草芽孢杆菌后，4号增加6.26%、2.49%、21.87%和30.77%,40号增加24.32%、11.51%、52.63%和61.70%；加哈茨木霉菌后，4号增加3.98%、-8.85%、25.51%、30.77%,40号增加39.39%、21.34%、80.73%和69.61%;53号在加入枯草芽孢杆菌后干物质重量增加21.90%。根系长度在4号、40号和53号加入枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌后分别较CK最大提升48.78%、57.32%、-22.51%,77.37%、121.42%、-35.33%;4号和40号的根系直径和根系表面积显著高于CK，其中枯草芽孢杆菌和哈茨木霉菌加入后根系直径分别提升39.23%、53.51%,88.18%、117.67%，根系表面积提升48.98%、69.79%,123.67%、134.56%。4号、40号和53号在加入枯草芽孢杆菌的叶片SPAD值较CK分别最大提升-12.81%、1.54%、-5.85%，叶面积分别提升1.50%、18.04%和-13.51%，长宽比分别为-9.61%、22.84%、-3.86%，形状系数为2.66%、4.41%和2.24%；哈茨木霉菌后较CK分别最大提升0.28%、1.47%、-4.44%，叶面积分别提升0.90%、1.85%和12.88，长宽比分别提升-6.43%、5.56%、0.57%，形状系数为1.76%、2.36%、2.07%。【结论】综上所述，两种菌剂的分别加入对40号根茎生长和物质积累等均得到大幅度提升，4号根系生长和物质积累显著增加，53号根茎生长和物质积累受到抑制，但叶面积变化较大；哈茨木霉菌对种苗生长促进作用好于枯草芽孢杆菌，4号和40号分别以200、150～200 g/m~3为宜。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
雷晶晶 康业斌 苗圃 马君红 石秋环
采用质粒消除与热激法构建枯草芽孢杆菌工程菌株B2-GFP,并测定其生长曲线、稳定性及对烟草疫霉的抑制率；同时，采用灌根和稀释平板法测定该菌株在烟株土壤中的活菌数.结果表明：工程菌株B2-GFP较野生型菌株B2提前1 h进入指数增长期，在培养11 h后同时进入稳定生长期；B2-GFP与烟草疫霉对峙培养后抑菌率达48.30%;在不含卡那霉素的LB固体培养基中继代培养10代后，在荧光显微镜下，菌落及菌体仍具有较强绿色荧光.烟株根际土壤活菌数大于根围土壤活菌数，且均呈现先升后降再趋于稳定的规律.在灭菌土壤中接种工程菌株B2-GFP第14天，烟株根际土壤活菌数达1.61×10~7 CFU·g~(-1);在自然土壤中接种该菌第42天，烟株根际土壤活菌数达1.46×10~7 CFU·g~(-1);接种第70天仍能保持绿色荧光表型.本研究证实工程菌株B2-GFP在烟田土壤中能够定殖并保持其特性.
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
董春光 杨爱国 孙秀俊 吴彪 刘志鸿 周丽青 侯丫
运用生化方法分析了不同浓度枯草芽孢杆菌制剂对养殖水质、刺参的生长、消化酶活性、非特异性免疫酶活性的影响。结果显示，与对照组相比，添加枯草芽孢杆菌制剂，能够显著降低养殖水体中的硝酸盐和亚硝酸盐，去除率最高可达４２．２８％和２２．３３％，对水体中氨氮含量和化学需氧量影响不显著；实验组刺参特定生长率显著提高，枯草芽孢杆菌添加量为６×１０–６时，ＳＧＲ提高４０．７４％，添加量为６×１０–６时，淀粉酶活性提高３０．２７％，添加量为５×１０–６时，蛋白酶活性提高５３．９３％，达到显著水平差异，但脂肪酶活性无显著提高；非特异性免疫酶（过氧化物酶、碱性磷酸酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶）活性均显著高于对照组，枯草．．．
关键词：
刺参 枯草芽孢杆菌 特定生长率 酶活性
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
董春光 杨爱国 孙秀俊 吴彪 刘志鸿 周丽青 侯丫
运用生化方法分析了不同浓度枯草芽孢杆菌制剂对养殖水质、刺参的生长、消化酶活性、非特异性免疫酶活性的影响。结果显示,与对照组相比,添加枯草芽孢杆菌制剂,能够显著降低养殖水体中的硝酸盐和亚硝酸盐,去除率最高可达42.28%和22.33%,对水体中氨氮含量和化学需氧量影响不显著;实验组刺参特定生长率显著提高,枯草芽孢杆菌添加量为6×10–6时,SGR提高40.74%,添加量为6×10–6时,淀粉酶活性提高30.27%,添加量为5×10–6时,蛋白酶活性提高53.93%,达到显著水平差异,但脂肪酶活性无显著提高;非特异性免疫酶(过氧化物酶、碱性磷酸酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶)活性均显著高于对照组,枯草...
关键词：
刺参 枯草芽孢杆菌 特定生长率 酶活性
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