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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
华丽霞 孙佩 蒋秋平 曾华兰 叶鹏盛 何炼 曾静 王明娟 张敏 罗飞 杨晓丫 何晓敏 刘勇
为探明绿木霉(Trichoderma virens)胶毒素合成的分子调控机制,本研究以绿木霉菌T23为研究对象,对农杆菌介导的遗传转化技术(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT)进行改良,并利用改良的ATMT技术对绿木霉菌T23胶毒素合成候选基因簇中的甲基转移酶基因gliN-T进行基因敲除,通过薄层色谱法及高效液相色谱法分析基因敲除突变体培养液中的胶毒素含量变化情况,明确gliN-T对胶毒素合成的调控作用。结果表明:在绿木霉菌T23分生孢子液中添加终浓度为15mg/mL的细胞壁裂解酶(Glucanex),30℃处理2～3h后用于农杆菌介导的遗传转化,每106个孢子转化子数从0.25个提高10个;利用改良的ATMT技术,成功获得基因敲除突变体ΔgliN-T。胶毒素检测结果发现:在野生型T23的24h培养液中未产生胶毒素,而在48、72、96h的培养液中均检测到胶毒素;在相同的条件下,ΔgliN-T在4个生长时期均无法产生胶毒素,表明gliN-T的缺失抑制了绿木霉菌T23胶毒素的合成,说明该基因在胶毒素合成途径中扮演着重要角色。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
李雪平 高志民 彭镇华 岳永德 高健 蔡春菊 牟少华
采用RT-PCR及RACE方法从绿竹中分离了COMT基因家族的一个基因,命名为BoCOMT1。BoCOMT1全长1 377 bp,编码一个361 aa的蛋白,估计分子量为39 kDa。BoCOMT1与小麦的TaCOMT、甘蔗的SoCOMT、玉米的ZmCOMT和毛白杨的PtCOMT的氨基酸序列比对结果表明,BoCOMT1与TaCOMT的氨基酸同源性最高,达到86.7%,系统进化树的分析表明,BoCOMT1与TaCOMT亲缘关系较近。RT-PCR结果显示,BoCOMT1在茎中的表达量约为叶中的2倍。
关键词：
绿竹 咖啡酸-O-甲基转移酶 克隆
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈为京 李润芳 杨焕明 陈建爱
本研究采用黄绿木霉T1010(Trichoderma aureoviride 1010)制剂处理山东寿光日光温室番茄连作土壤,探索其对亚低温胁迫下日光温室番茄内源激素的调控效应,为应用黄绿木霉T1010调控农作物的重要农艺性状,增强作物对生物和非生物性胁迫的适应性,提高作物产量,改善作物品质提供理论依据和技术支持。以常规生产区作对照,重复4次进行对比试验。通过人工控制日光温室内温度(白天(16±2)℃,夜间(8±2)℃),使供试番茄经过3 d亚低温胁迫,分别测定其第1、3、5功能叶、嫩茎和花的四种主要植物内源激素赤霉素(GA)、玉米素核苷(ZR)、吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)的含量。结...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
纪明山 李博强 许远 时越 谷祖敏 陈捷
绿色木霉菌TR-8是一株具有生防潜力的拮抗菌。研究发现TR-8菌株在PDA培养基、查彼培养基和基本培养基上均能较好生长,在基本培养基上生长最快,3种培养基对孢子产生影响不大。温度对菌丝生长和孢子产生影响显著,30℃时菌丝生长最快,25℃时产孢量最大。TR-8菌株在pH值2～10范围内均可生长,pH值5～6时菌丝生长最快,pH值为7时孢子产生量最大。光照处理对菌丝生长影响不明显,但可明显促进孢子产生。葡萄糖和麦芽糖为菌丝生长和产孢的最佳碳源。天冬酰胺是菌丝生长和孢子产生的最佳氮源。不同维生素对菌丝生长和孢子产生作用不同,烟酸对菌丝生长最有利。微量元素对菌丝生长有一定的促进作用,Mn有利于孢子产生...
关键词：
木霉菌 生物学特性 菌丝生长 产孢
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈建爱 郭峰 杨武汉 万书波 陈为京
本试验通过在黄河三角洲盐渍土壤种植花生,研究了盐胁迫条件下土壤不同处理花生叶片光合作用中物质的变化、细胞渗透调节物质的变化和非酶性及酶性防御系统物质的变化,并对黄绿木霉T1010制剂和常规处理土壤花生生长期功能叶片生理指标进行了测定。结果表明:与常规对照相比,黄绿木霉T1010制剂处理土壤后,花生叶片的细胞膜透性降低,叶片伤害程度降低,叶片内丙二醛含量降低,细胞渗透调节物质游离脯氨酸、甜菜碱分别提高,抗氧化物抗坏血酸、类胡萝卜素含量大幅度提高。光合色素叶绿素a、叶绿素b大幅度提高,光合初生产物葡萄糖也提高,进一步代谢物可溶性淀粉、氨基酸、可溶性蛋白质也提高。可见,黄绿木霉T1010制剂的施用调...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
张德强 黄镇亚 张志毅
该研究采用绿色木霉AS3.30 32 (Trichodermaviride)液体发酵生产纤维素酶 ,研究了碳源、氮源、培养基起始 pH值、接种量、摇床转速对绿色木酶产酶活力的影响 .结果表明 :①以爆破后的甘蔗渣为碳源时滤纸酶活和 β Case酶活力分别高达 5 .37U/mL和 4.89U/mL ;②不同氮源产酶活力大小顺序为 :NH4 NO3,(NH4 ) 2 HPO4 ,(NH4 ) 2 SO4 ,尿素 ,NH4 Cl,酵母膏 ;③培养基起始 pH为 3 .5 ,摇床转速为 15 0r/min ,培养温度为 2 8℃时 ,产酶活力最高 ;④接种量对产酶活力影响不大 ,以体积分数 φ为 5...
关键词：
纤维素酶 液体发酵 酶活力
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
张德强 黄镇亚 张志毅
该研究以麦麸和汽爆蔗渣为主要原料 ,采用绿色木霉AS3 30 32 (Trichodermaviride)固态发酵生产纤维素酶 ,研究了氮源、碳源、表面活性剂、接种方式、培养基含水量、培养温度、培养基起始pH值对绿色木霉产酶活力的影响 .研究结果表明 :①以硫酸铵为氮源 ,其FPA ,CMC ,和 β Gase酶活力均较高 ,每克干曲分别高达 12 2 5FPAU g ,1470 0CMCU g和 119 3β GaseU g ;②碳源以麸蔗比为 3∶2时 ,FPA ,β Gase和CMC酶活力均为最高 ,每克干曲分别高达 138 2FPAU g ,134 6 β GaseU g和 16 ...
关键词：
纤维素酶 固体发酵 酶活力
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
唐俊 马越 王姝妹 徐孟竹 刘生杰 陈捷
【目的】探索建立以G418抗性为筛选标记的农杆菌介导的深绿木霉遗传转化方法,为木霉菌突变菌株的筛选和基因功能研究奠定基础。【方法】测试供试野生型深绿木霉菌菌株T23对G418的敏感性,构建以G418抗性为筛选标记的质粒载体p1300-neo,并将该质粒通过农杆菌导入深绿木霉T23菌株中,利用G418抗性平板筛选获得转化子,通过PCR对稳定转化子进行鉴定。【结果】T23菌株对G418具有高度敏感性,25μg/mL G418可完全抑制T23菌株的生长;构建的p1300-neo载体是可行的G418抗性标记,通过该载体获得了多株具有G418抗性的深绿木霉遗传转化子。【结论】G418抗性可以作为深绿木霉...
关键词：
G418抗性 根癌农杆菌 深绿木霉
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈建爱 祝文婷 李润芳 杨焕明 陈为京
本研究采用黄绿木霉T1010(Trichoderma aureoviride 1010)制剂处理日光温室番茄连作土壤,探索其在耕层土壤中的定殖动态,进而研究其对日光温室耕层土壤容重和水稳性团聚体等重要结构性状的影响,为应用黄绿木霉T1010改善土壤生态环境,促进番茄生长发育提供理论依据和技术支持。试验于2007年8月至12月安排在山东省寿光市多年连作种植番茄的日光温室中进行,以常规生产区为对照,设黄绿木霉T1010和1/2黄绿木霉T1010两个处理,对照和处理各重复4次。结果显示:随着检测时期的推移,黄绿木霉T1010处理的日光温室耕层土壤黄绿木霉T1010定殖指标存在明显的上升趋势,2007...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
任大明 毕霏 陈红漫 阚国仕 马艳 李艳秋 于可济
绿色木霉(Trichoderma viride)所产生纤维素酶可将秸秆天然纤维素组分转化为可发酵的糖,不仅对废物进行再利用,还可以减少环境污染。以纤维素酶工业生产菌株绿色木霉Sn-9106总RNA为模板,利用RT-PCR技术反转录合成外切葡聚糖水解酶(CBHI)基因约1545bp的cDNA片段。该序列与GenBank中的cbhI E00389序列比较,氨基酸序列同源性达91%。大肠杆菌BL21原核表达和SDS-PAGE结果表明,重组蛋白分子量约为53kDa,重组酶活力为5.3U.mg-1。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
刘北东 杨谦 周麒 宋金柱 陈佃福 刘恒 赵敏
采用RTPCR方法克隆到绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅰ(EGⅠ)的cDNA序列,测序后构建到酿酒酵母诱导型表达载体pYES2上,转化酿酒酵母,转化子用2%的βD半乳糖进行诱导,用Northern杂交、刚果红染色法和CMC糖化力法分别对目的基因的转录和表达产物的葡聚糖内切酶活性进行检测.结果表明,EGⅠ的cDNA基因开放阅读框长度为1377bp,编码459个氨基酸,推测蛋白质分子量为48.1kD.刚果红染色显示,转化子可产生明显的水解圈;CMC酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达有生物活性的EGⅠ并分泌到胞外.发酵液中的酶活在培养60h达到最高0.06UmL,最适酶解温度为50℃,最适...
关键词：
绿色木霉 葡聚糖内切酶Ⅰ 酿酒酵母 表达
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
闫建英 张智 冯丽荣 汤华京 杨可心 魏罡 张晓彤
【目的】在枯草芽孢杆菌中表达绿色木霉(Trichodoma vivide,T.viride)内切葡聚糖酶基因Eg Ⅶ。研究内切葡聚糖酶基因Eg Ⅶ的生物信息、基因克隆与表达及重组酶学性质。【方法】提取纤维素酶生产菌株绿色木霉AS3.3711的总RNA，通过反转录合成cDNA，并以之为模板利用PCR技术扩增获得内切葡聚糖酶基因Eg Ⅶ，并进行生物信息学分析；构建了重组表达载体pMA5-Eg Ⅶ，并利用热激转化法将其转入枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis,B.subtilis）WB600感受态细胞中，成功进行表达。【结果】生物信息学分析表明，内切葡聚糖酶基因Eg Ⅶ编码249个氨基酸，蛋白质的分子量为26.8002 KD，理论等电点7.62，属于胞外蛋白；预测蛋白质三级结构与二级结构一致，由ɑ-螺旋、延伸链区、β-转角和无规则卷曲构成。电泳结果表示，重组枯草芽孢杆菌在Eg Ⅶ基因片段大小符合处出现条带，表明成功将Eg Ⅶ-pMA5转化到B.subtilis WB600中。刚果红染色结果显示重组枯草芽孢杆菌在CMC培养基上出现较大直径的透明圈，重组菌株上清粗酶液DNS酶活力达到22.71 U/mL，表明绿色木霉内切葡聚糖酶基因Eg Ⅶ可以在枯草芽孢杆菌中表达，并具有较高活性。重组酶酶学性质分析表明，该酶的最适温度是60℃，最适pH值为6.4，且温度在50℃以下，pH值在5.6～8.0范围内，酶活力具有良好的稳定性。【结论】通过对内切葡聚糖酶基因Eg Ⅶ克隆及分析，获得了表达内切葡聚糖酶基因Eg Ⅶ的枯草芽孢杆菌基因工程菌，了解了重组酶酶学性质，为纤维素酶的广泛应用提供了理论基础。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
白洪志 王惠 韩梅 肖亦农 杨谦 韩晓日
以稻草粉与麦麸为主料,对影响绿色木霉(Trichoderma viride)C-08固态发酵生产纤维素酶、半纤维素酶的营养因素和环境条件进行了研究。结果表明:秸秆粉和麸皮为2∶4最适合产酶;铵态氮适合C-08产CMCase,NO3-利于产Xylanase,其中NH4NO3最好;料水比1∶2,适合C-08产CMCase,1∶2.5适合产Xylanase;稻草粉粒度40~100目时,适合C-08产CMCase,此范围外适合产Xylanase;pH值为4时,适合C-08产酶;孢子接种量为7.5×107孢子.mL-1时,适合C-08产酶;低于28℃时适合C-08产酶;最适发酵时间为72h。该菌株在以上...
关键词：
绿色木霉 纤维素酶 半纤维素酶 固体发酵
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
高晗旸 孙清 吕济敏 葛竟峰
以绿色木霉菌株为出发菌株,通过紫外诱变,筛选出纤维素酶产量高且具有遗传稳定性的菌株Z;在经稀硫酸预处理后的玉米秸秆中加入菌株Z进行酶解糖化试验。结果表明:在紫外线强度15W,照射距离30cm,照射时间60s的条件下,绿色木霉的致死率为94.1%,在此条件下选取菌株Z,具有良好的遗传稳定性,酶活为37U.mL-1,比诱变前酶活提高12%。利用该菌株,在酶解糖化时间60h、加酶量45U.g-1底物、底物浓度105g.L-1、温度37℃、初始pH值4.8时,还原糖得率为30.02%,说明绿色木霉经过诱变产纤维素酶具有较强的活性。
关键词：
玉米秸秆 紫外诱变 绿色木霉 酶解糖化
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