- 年份
- 2024(5239)
- 2023(7419)
- 2022(6651)
- 2021(6111)
- 2020(5480)
- 2019(12607)
- 2018(12633)
- 2017(24180)
- 2016(13840)
- 2015(16027)
- 2014(16464)
- 2013(16435)
- 2012(15741)
- 2011(14357)
- 2010(14827)
- 2009(13726)
- 2008(14003)
- 2007(13122)
- 2006(11268)
- 2005(10045)
- 学科
- 济(57658)
- 经济(57595)
- 管理(36689)
- 业(35460)
- 方法(29355)
- 企(28047)
- 企业(28047)
- 数学(25927)
- 数学方法(25611)
- 农(16379)
- 学(15101)
- 财(14645)
- 中国(14119)
- 贸(11469)
- 贸易(11464)
- 地方(11205)
- 易(11095)
- 业经(10934)
- 制(10766)
- 农业(10616)
- 理论(9170)
- 务(9118)
- 财务(9090)
- 财务管理(9058)
- 银(8927)
- 和(8916)
- 银行(8875)
- 企业财务(8518)
- 行(8367)
- 融(8339)
- 机构
- 大学(212353)
- 学院(209450)
- 济(80771)
- 经济(78908)
- 管理(74949)
- 研究(73252)
- 理学(64382)
- 理学院(63500)
- 管理学(62089)
- 管理学院(61695)
- 中国(54423)
- 科学(49762)
- 农(46100)
- 京(45879)
- 所(39983)
- 业大(37442)
- 农业(36999)
- 财(36892)
- 研究所(36539)
- 中心(34123)
- 江(33362)
- 财经(29382)
- 范(28698)
- 北京(28457)
- 师范(28299)
- 经(26448)
- 州(25962)
- 院(25261)
- 经济学(24690)
- 农业大学(24613)
- 基金
- 项目(136831)
- 科学(105146)
- 基金(97700)
- 研究(94202)
- 家(87105)
- 国家(86368)
- 科学基金(71727)
- 社会(56949)
- 省(54465)
- 社会科(53798)
- 社会科学(53772)
- 基金项目(52080)
- 自然(48542)
- 自然科(47380)
- 自然科学(47362)
- 划(46564)
- 自然科学基金(46557)
- 教育(44436)
- 资助(40696)
- 编号(38244)
- 成果(32377)
- 重点(31432)
- 部(30042)
- 发(29218)
- 计划(27513)
- 创(27507)
- 科研(27106)
- 课题(26908)
- 创新(25833)
- 大学(25509)
共检索到310700条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨玉静 张丹瑾 聂瑞强 谢建山 范瑞文 高文俊 董常生
【目的】小眼畸形相关转录因子－Ｍ型（ＭｉｃｒｏｐｈｔｈａｌＭｉａ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ Ｍ，Ｍｉｔｆ－Ｍ）在动物皮肤和毛发的黑色素合成途径中发挥重要作用，克隆绵羊小眼畸形相关转录因子－Ｍ型基因序列，研究在绵羊黑素细胞中过表达绵羊Ｍｉｔｆ－Ｍ是否影响ｔＹｒ、ｔＹｒｐ－１和ｔＹｒｐ－２的表达，从而探究对黑色素的生成的影响。【方法】使用试验室冻存的第５代绵羊黑素细胞，通过ｐｃｒ方法用引物以绵羊黑素细胞ｃｄｎａ为模板克隆Ｍｉｔｆ－Ｍ基因ｃｄｎａ序列，构建绵羊Ｍｉｔｆ－Ｍ克隆载体和真核表达载体；通过细胞转染技术在细胞水平过量表达绵羊Ｍｉｔｆ－Ｍ；转染后使用荧光显．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
朱芷葳 贺俊平 于秀菊 程志学 董常生
【目的】克隆羊驼皮肤组织表达的Mitf-M CDS序列,比较分析羊驼皮肤组织Mitf-M的特征,进一步定位分析Mitf-M蛋白表达的位置,为深入研究羊驼毛色基因表达机制奠定基础。【方法】采用RT-PCR扩增方法分段扩增Mitf-M CDS区,分别利用Clustal X和BioEdit生物学软件对氨基酸序列进行多重序列比较分析,免疫组织化学技术对Mitf-M蛋白定位分析。【结果】羊驼皮肤组织表达的Mitf-M的CDS区由419个氨基酸组成,具有bHLH-zip转录家族的保守结构域,该基因与牛和犬亲缘关系最近,Mitf-M蛋白主要分布于羊驼皮肤组织毛球基底层细胞之间与毛乳头周围的黑色素细胞中。【结...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨玉静 聂瑞强 谢建山 范瑞文 许冬梅 董常生
【目的】克隆小鼠八聚体结合转录因子1(octamer-binding transcription factor 1,Oct-1)基因序列,探讨八聚体结合转录因子1在小鼠黑素细胞中过表达对毛色主效基因表达的影响及在毛色形成中的作用。【方法】使用实验室冻存的第5代小鼠黑素细胞,通过普通PCR方法用引物以小鼠黑素细胞c DNA为模板克隆Oct-1基因c DNA序列,构建小鼠Oct-1克隆载体和真核表达载体;通过KEGG PATHWAY、NCBI、Transfec等软件对获得的序列进行生物信息学分析;在细胞水平通
[期刊] 华北农学报
[作者]
张建一 梁春年 裴杰 郭宪 沈友明 阎萍
研究牦牛MITF-M基因编码区序列及其编码蛋白的结构,以及其在皮肤组织中mRNA的表达水平,探讨MITF-M基因与牦牛毛色形成相关性,以期为揭示牦牛毛色形成分子机理奠定基础。采用RT-PCR技术扩增,成功获得了牦牛MITF-M基因编码区序列。采用生物信息学方法,预测分析MITF-M基因及其编码蛋白的基本理化性质、二级结构等;采用半定量PCR检测技术,检测出MITF-M基因mRNA在牦牛各组织器官中表达水平;通过荧光定量PCR技术检测出在牦牛不同颜色皮肤组织中MITF-M基因mRNA表达水平。结果表明,扩增得到的MITF-M基因的编码区是一条长为1 460 bp的DNA序列。将牦牛的MITF-M...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
聂瑞强 杨玉静 谢建山 范瑞文 高文俊 董常生
【目的】ＭＩＴＦ和β－ｃａＴｅｎＩｎ是黑色素生成通路中重要的调节基因，而Ｐａｘ６通过调控ＭＩＴＦ和β－ｃａＴｅｎＩｎ来调控黑色素细胞的黑色素生成，通过对只含有正常Ｐａｘ６ ＰａＩｒｄ ｄｏＭａＩｎ的前１０２个氨基酸的Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ）的研究，来探究Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ）是否还有生物学功能，以及Ｐａｘ６对其下游基因的作用机理。【方法】根据ｎｃＢＩ查找到的Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ）基因序列设计Ｐｃｒ引物，克隆Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ），收集所得基因片段送华大基因测序确认。后通过对Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ）和慢病毒表达载体的序列分析来筛选合适的酶切位点，通过分析选取Ｓａｌ Ｉ和ｘＢａ Ｉ作为酶切位．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张通 栗瑞兰 范晓梅 刘春洁 海日汗 霍敏 张家新
【目的】研究p66Shc在绵羊卵母细胞中的表达特征及其与卵母细胞胞质氧化还原稳态的关系,为揭示p66Shc参与调控卵母细胞胞质氧化还原稳态分子机制提供理论依据。【方法】试验所用卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs)来源于屠宰场的绵羊卵巢。分别收集成熟前优质和劣质、常规成熟24 h及成熟30 h老化的卵母细胞,采用实时荧光定量PCR对成熟前后不同质量绵羊卵母细胞中p66Shc mRNA的表达量进行分析,利用细胞免疫荧光结合MitoTracker Red探针对p66Shc蛋白和线粒体进行共定位,同时利用荧光探针DCFH-DA和卵母细胞自发荧光分别对成熟前后不同质量卵母细胞内ROS水平和氧化还原稳态进行检测。此外,采用外源H_2O_2诱导的氧化应激处理成熟前优质卵母细胞,并对p66Shc蛋白的表达及定位进行了检测分析。【结果】实时荧光定量PCR结果显示,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞中p66Shc mRNA表达量分别显著(P0.05)。共定位结果表明,p66蛋白主要分布在线粒体分布活跃的区域。细胞免疫荧光结果显示,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞中p66Shc蛋白表达量也分别显著(P<0.05)上调p66Shc蛋白的表达并促使p66Shc由胞质向细胞核定位。【结论】p66Shc基因在劣质和老化的绵羊卵母细胞中呈现高水平的表达,H_2O_2诱导的氧化应激显著上调p66Shc蛋白的表达并影响其亚细胞定位。总之,绵羊卵母细胞中p66Shc表达上调影响了胞质的氧化还原稳态。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
马毅 唐冬英 赵小英 秦玉芝 郭新红 刘选明
将蔗糖非发酵基因相关蛋白激酶AKIN11克隆到植物表达载体pEGAD的35S启动子下游与GFP融合,基因枪法导入洋葱表皮细胞进行瞬时表达,发现集中在细胞核内表达.农杆菌介导花序浸泡法转化拟南芥,Basta筛选和RT-PCR鉴定得到两个遗传稳定的T3代转基因株系.突变体和野生型的表型没有明显差异,但突变体叶片中淀粉含量较野生型增加.RT-PCR分析淀粉合成途径关键酶的mRNA水平,发现突变体中腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶表达量增加,而α-淀粉酶却没有变化.表明AKIN11基因可能在拟南芥淀粉积累途径中起着重要的调节作用.
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
靳晓霞 罗海玲 许旭 闫乐艳 葛素云 刘昆 袁飞
为构建绵羊血管内皮生长因子(VEGF)基因siRNA载体并对其在绵羊颗粒细胞中的表达,采用DMEM/F12培养液对绵羊卵巢颗粒细胞进行体外培养,采用脂质体转染法将干扰载体转染到颗粒细胞中,用ELISA试剂盒测定转染后各组颗粒细胞中VEGF的表达量。转染阳性对照载体PGC的颗粒细胞组为对照组,转染PGC-1、PGC-2和PGC-3的颗粒细胞组分别为试验组Ⅰ、试验组Ⅱ和试验组Ⅲ。与对照组相比,各试验组中VEGF的表达量分别降低了55.37%、81.45%和73.29%,其中载体PGC-2所转染的细胞中VEGF的表达量最少,说明在3个载体中,PGC-2对VEGF的基因沉默效果最好。
关键词：
绵羊 血管内皮生长因子 颗粒细胞 转染
[期刊] 华北农学报
[作者]
杜晨光 彭春霞 刘永斌 王昆
为揭示Ghrelin在绵羊卵母细胞的表达情况,运用实时定量RT-PCR技术检测不同培养系统中绵羊卵母细胞Ghrelin mRNA的相对表达量。结果表明,以M199和血清为基础培养基添加不同激素后培养的卵母细胞GhrelinmRNA相对表达量均显著上升,仅以M199为基础培养基添加不同激素后培养的卵母细胞Ghrelin mRNA相对表达量均显著下降。在不同基础培养基中添加不同激素后,E2较FSH和LH有促进Ghrelin mRNA相对表达量升高的趋势。绵羊卵母细胞Ghrelin mRNA的表达以及在不同培养系统动力学变化,提示了这一新型分子在卵母细胞成熟过程中受激素潜在的调控作用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵兵令 李亚楠 陈天直 刘颖 常露程 范瑞文 薛霖莉 王海东 董常生
【目的】探究GPNMB是否会通过调控MITF及其下游色素相关基因的表达来影响黑色素细胞中色素的生成,为进一步阐明GPNMB对黑色素细胞中色素生成的具体机制提供理论依据。【方法】首先对小鼠GPNMB核酸序列进行检索,通过对GPNMB和慢病毒表达载体序列分析来筛选出合适的酶切位点,在此选取SalⅠ和XbaⅠ作为酶切位点。并对GPNMB基因序列设计含有SalⅠ和XbaⅠ酶切位点的全长引物,克隆GPNMB基因全长序列,将含有酶切位点的GPNMB基因片段与T载体进行连接,送华大基因测序。将构建成功的T载体提取质粒,
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
栾兆进 赵勇超 许娇霞 刘永斌 张家新
为探究雄激素受体(Androgen receptor, AR)及共调节因子对绵羊附睾上皮细胞(Epididymal epithelial cells, EECs)谷胱甘肽过氧化物酶5(Glutathione peroxidase 5,GPX5)的调节机制，本研究采用CCK-8检测睾酮对EECs增殖的影响；利用qRT-PCR、免疫荧光法和Western Blot法分别检测AR、GPX5、甾体激素受体共激活子1(Steroid receptor coactivator 1,SRC-1)、CREB结合蛋白(cAMP-response element-binding protein, CBP)、p300和核受体共抑制因子2(Nuclear receptor corepressor 2,NCOR2)的mRNA水平和蛋白表达情况，采用双荧光素酶报告基因测定干扰SRC-1或p300后EECs的荧光素酶活性。结果表明：1)与对照组相比，100 nmol/L睾酮组细胞中的GPX5 mRNA和蛋白表达量极显著升高(P0.05),但分别极显著(P<0.01)和显著(P<0.01)和显著(P0.05),而SRC-1和p300蛋白表达量极显著升高(P<0.01)和显著(P0.05),AR的转录活性显著降低(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
耿建军 孙乐天 穆晓丽 张杰 姜俊兵 张映 李宏全 董常生
【目的】研究内皮素受体A和B(endothelin receptor A and B,EDNR A and B)在绵羊皮肤中的表达与定位,以及在不同毛色中的差异比较,探讨其在绵羊毛色形成中的作用及其相关机制。【方法】以不同毛色的成年绵羊为研究对象(设黑色毛和白色毛两组),用RT-PCR法检测EDNR基因在不同毛色皮肤中的表达,并使用实时荧光定量PCR技术分析不同毛色绵羊皮肤EDNR基因的相对表达量,采用免疫组织化学法和Western blot法对EDNR在绵羊皮肤中的表达进行定位和定量分析。【结果】荧光定量PCR结果显示黑色绵羊中EDNRA的相对表达量是白色绵羊的1.2648倍,EDNRB的则...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王丽平 姜丽娟 马锋旺 管清美
【目的】分析干旱处理下苹果HYL1基因（MdHYL1）在苹果中的表达情况，并初步分析过量表达MdHYL1转基因苹果根系的生长情况，以了解MdHYL1在干旱中的功能特性。【方法】从金冠苹果中克隆出MdHYL1基因，对其进行干旱下的表达分析、系统进化分析和组织特异性表达分析；利用Gateway技术构建植物过表达载体pGWB414-MdHYL1，通过根癌农杆菌介导法转化苹果无性系GL-3，经卡那霉素筛选，采用PCR和RT-qPCR技术鉴定阳性转基因株系，并对转基因株系的根系生长情况进行观测。【结果】MdHYL1
关键词：
苹果 MdHYL1 转基因 耐旱性
[期刊] 草业科学
[作者]
朱爱文 刘海霞 德庆卓嘎 韩大勇 格桑加措 闫伟 平措班旦 朱戈辉
热休克蛋白A2 (HSPA2)是热休克蛋白HSP70家族重要成员，能够促进睾丸支持细胞增殖；精子发生相关基因6 (SPATA6)能够调控肌球蛋白合成的微丝运输系统，影响精子细胞骨架形成。在雄性哺乳动物生殖过程中，两者均起重要作用。为研究HSPA2和SPATA6在雄性彭波半细毛羊生殖过程中的表达规律和细胞定位，以不同年龄阶段(3月龄、12月龄和3岁龄)彭波半细毛羊睾丸组织为研究对象，运用实时荧光定量PCR (real time quantitative PCR,qRT-PCR)、Western blot和免疫组织化学染色法(IHC)从转录和翻译水平检测了HSPA2和SPATA6在不同年龄阶段彭波半细毛羊睾丸组织的表达水平和分布模式，分析预测HSPA2和SPATA6在彭波半细毛羊睾丸发育和精子发生过程中的调控作用。结果表明：12月龄和3岁龄彭波半细毛羊睾丸组织中HSPA2 mRNA的相对表达量以及蛋白表达量极显著高于3月龄(P <0.01);12月龄SPATA6 mRNA的相对表达量以及蛋白表达量极显著高于3月龄(P <0.01)，显著高于3岁龄(P <0.05)。不同年龄阶段彭波半细毛羊睾丸组织的支持细胞和间质细胞中HSPA2和SPATA6蛋白均有分布。初步推断，HSPA2和SPATA6的表达水平变化在调控彭波半细毛羊精子发生过程和促进精子成熟中具有重要作用。
[期刊] 华北农学报
[作者]
李文佼 杜晨光 菅瑞珍 温世勇 王伟平 孙博 徐晓静 刘永志
为了观察不同剂量食欲素A在不同时间对绵羊黄体化颗粒细胞OX1R表达的影响,在绵羊黄体化颗粒细胞中添加不同剂量(0.05,0.2,0.5,1μg/mL)食欲素A,分别于刺激后0,2,6,12 h提取细胞总RNA,运用RT-qPCR方法检测了OX1R mRNA相对表达量变化。结果表明,OX1R mRNA分布于绵羊黄体化颗粒细胞中;添加高剂量(1μg/mL)食欲素A在2 h显著性促进OX1R mRNA表达(P
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
