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[期刊] 中国农业科学
[作者]
张翊华 窦忠英
【目的】证明酶-去污剂法制备绵羊颈动脉脱细胞基质的可行性,进一步探索制备绵羊颈动脉脱细胞基质的新方法,制备比较理想的绵羊颈动脉脱细胞基质,为构建组织工程化血管提供支架材料。【方法】分别采用反复冻融-1%曲拉通(TritonX-100)加蛋白酶抑制剂(PMSF)法(蛋白酶抑制剂(PMSF)-1%曲拉通(TritonX-100)反复冻融法)和0.25%胰蛋白酶-1%TritonX-100法制备绵羊颈动脉脱细胞基质,标本进行大体、光镜和扫描电镜观察,力学性能检测并做比较。【结果】反复冻融-1%TritonX-100加PMSF法(PMSF-1%TritonX反复冻融法)不仅能完全脱除细胞、保持基质纤维...
关键词：
颈动脉 脱细胞基质 绵羊
[期刊] 中国卫生经济
[作者]
刘洪章 杜炎秋 刘瑾瑜 崔世军 郭大乔 刘翼 黄葭燕
目的:评价颈动脉内膜剥脱术和颈动脉支架置入术治疗颈动脉狭窄患者的经济学价值,为临床决策提供参考。方法:通过专家访谈,确认两种术式的标准流程,进而计算出两种术式的直接医疗成本。通过系统综述的方式确定各个效果指标的初始值和范围。由此构建出决策树模型,对两种术式进行成本-效果分析和概率敏感性分析。结果:在各个指标上,颈动脉内膜剥脱术的成本效果比均低于颈动脉支架置入术。敏感性分析结果显示,在手术后脑卒中发生率、短暂性脑缺血发生率、再狭窄发生率和高灌注综合征发生率上,颈动脉内膜剥脱术比颈动脉支架置入术占绝对优势的概率均大于85%。在手术后局部血肿、脑出血和心肌梗死发生率上,颈动脉内膜剥脱术比颈动脉支架置入术并没有绝对优势。结论:颈动脉内膜剥脱术相比颈动脉支架置入术有较好的经济性,建议临床医生在充分考虑患者的实际病情下,使用颈动脉内膜剥脱术进行治疗。此外,应采取相关行动,积极推广颈动脉内膜剥脱术,提高颈动脉狭窄患者的生命质量,改善健康状况。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙亚东 华进联 窦忠英
研究了人胎儿肺间质干细胞染色体的制备方法,并对其染色体进行分析。结果表明,第5代细胞培养44 h,第15代细胞培养42 h,经终浓度0．025μg/mL秋水仙素作用2 h,0．075 mol/L KCl低渗25 min,正常核型比率最高,分别达到85．1%(171/201)和80．0％(172／215)。
关键词：
人胎儿肺间质干细胞 核型分析 染色体制备
[期刊] 中国农业科学
[作者]
朱才业 韦光辉 李伟 王丹 郑蒙蒙 刘志永 张亚妮 李碧春
【目的】克隆徐淮山羊硬脂酰辅酶A脱氢酶1(SCD1)基因的cDNA并分析该基因生物信息学功能。通过EGFP融合蛋白在亚细胞水平定位该基因表达产物,研究该基因在异种动物体内表达情况,探索制备异种转基因动物的可能性及外源基因能否稳定遗传。【方法】采用RT-PCR方法从徐淮山羊脂肪组织中克隆SCD1基因cDNA,进行生物信息学分析,并构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-SCD1,脂质体(LTX)介导基因转染NHI-3T3细胞,48 h后荧光倒置显微镜下观察基因表达产物的分布,RT-PCR检测mRNA在体外水平的表达。利用睾丸注射法制备转基因小鼠,在F1代和F...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
邱峰龙 张亚妮 倪蓉 李伟 陈庭锋 韦光辉 李碧春
【目的】克隆徐淮山羊多能性转录因子0ct4、Sox2、K1f4和c—Myc的CDS片段,构建pMD19-T—oct4、pMD19-T—sox2、pMD19-T—k1f4和pMD19-T—c—myc重组质粒,随后构建含T7启动子的pcDNA3-oct4、pcDNA3-sox2、pcDNA3-k1f4和pcDNA3-c—myc重组质粒,通过体外转录,获得该4种多能性转录因子的mRNA,并使其在徐淮山羊成纤维细胞中稳定表达。【方法】应用RT—PCR方法分别从徐淮山羊睾丸组织、皮肤组织、小肠组织中扩增多能性转录因子Oct4、Sox2、K1f4和c—Myc基因编码全序列,将该4种基因分别克隆到pMD19...
[期刊] 华北农学报
[作者]
丁强 张利平 贾建磊 王静 张勇
为了进一步研究FecB基因,利用PCR-RFLP技术筛选出FecB基因,PCR扩增FecB基因编码区序列1509bp,利用限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ定向插入原核表达载体pET30a(+),构建原核表达载体pET30a(+)-FecB,诱导表达纯化重组蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,WesternBlot检测重组蛋白的免疫活性,ELISA检测抗体效价。结果表明,成功的构建了绵羊FecB基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达目的蛋白,经过4次免疫后,获得多克隆抗体,ELISA方法检测小鼠抗体免疫效价达到1∶32000,纯化的蛋白具有免疫活性。为研究绵羊FecB基因蛋白的功能提供参考。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
戴可可 李尚来 蔡玉 陈培勇 徐辉 吕文莉 赵冰茹 张艳丽
[目的]本试验旨在研究卵泡抑素（Follistatin， FST）基因对湖羊卵巢颗粒细胞（Granulosa Cells， GCs）增殖及凋亡的影响，为揭示FST基因对湖羊繁殖调控机理的影响提供理论基础。[方法]首先利用免疫组织化学方法检测FST在卵巢组织中的表达特征；然后利用EdU、qRT-PCR、WB、流式细胞等技术，分析FST基因过表达和干扰对湖羊卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响；最后通过RNA-seq分析FST基因干扰前后湖羊卵巢颗粒细胞的转录组表达差异变化。[结果]FST在湖羊卵巢颗粒细胞内高表达，干扰FST能抑制湖羊卵巢颗粒细胞增殖，降低细胞中PCNA基因的mRNA和蛋白水平，过表达FST则表现出相反的趋势；RNA-seq结果进一步显示干扰FST后颗粒细胞中细胞周期调控、卵母细胞减数分裂、孕激素分泌等相关功能及通路发生显著变化。[结论]FST可以促进湖羊GCs增殖，抑制GCs凋亡，影响卵母细胞分裂、生殖激素分泌相关基因的表达，进而参与湖羊卵泡发育进程。
关键词：
FST 湖羊 颗粒细胞 增殖 凋亡
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
栾兆进 宋慧子 杜炜 赵勇超 王兆琛 张家新
【目的】探讨表皮生长因子(EGF)对体外培养的绵羊附睾上皮细胞(EECs)增殖的影响。【方法】分离培养EECs,利用免疫荧光检测角蛋白18(CK18)对分离的细胞进行鉴定,用CCK-8法测定EGF的最佳作用质量浓度,用RT-PCR检测EECs中附睾分子标记——谷胱甘肽过氧化物酶-5(GPX5)和雄激素受体(AR)基因的表达情况,用流式细胞仪法检测EGF对EECs细胞周期和凋亡的影响。将P_4代EECs分别用表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂Gefitinib、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路抑制剂LY294002和DMSO(对照组)处理后,再用EGF培养,用流式细胞仪法检测细胞周期和凋亡情况。将P_4代EECs分别用EGF(-)、EGF、EGF+Gefitinib和EGF+LY294002处理后,用Western blot检测细胞中EGFR、AKT和叉头盒蛋白O1(FOXO1)磷酸化水平。【结果】分离培养的EECs可表达CK18,细胞纯度较好;EGF对EECs增殖促进效应呈浓度依赖性,用含50 ng/mL EGF培养基培养的EECs具有最高的增殖潜能,且不同传代EECs细胞均可正常表达GPX5和AR;EGF处理S期EECs细胞比例极显著升高(P<0.01),凋亡指数显著降低(P<0.05)。与对照组相比,Gefitinib组S期EECs细胞比例极显著降低(P<0.01),LY294002组S期细胞比例显著降低(P<0.05);Gefitinib组EECs细胞的凋亡指数极显著升高(P
[期刊] 草业科学
[作者]
安杰 尤章 曹玉曼 任鹏辉 刘金隆 杨培志
为了获得紫花苜蓿(Medicago sativa)保卫细胞原生质体,并为后续的紫花苜蓿保卫细胞原生质体的相关研究奠定基础,本研究探索了适合紫花苜蓿保卫细胞的提取方法。利用研磨和匀浆机处理的方式获得表皮条,将获得的表皮条再通过两步酶解法去除残留的叶肉细胞和细胞壁,并经多次过滤和离心获得保卫细胞原生质体。最后统计原生质体数目并用FDA染色检测保卫细胞原生质体活性。结果表明,本研究成功分离并获得了高活性的紫花苜蓿保卫细胞原生质体。每5片成熟叶获得1 000个保卫细胞原生质体,经FDA染色后在荧光下显示活性保卫细
[期刊] 西南农业学报
[作者]
苟本富
采取全血4℃保存(方法Ⅰ)、沉淀白细胞加消化液室温保存(方法Ⅱ)和全血加SDS-EDTANa2缓冲液室温保存(方法Ⅲ)等3种血样保存方法,用常规方法制备山羊DNA并对其效果进行评价。结果表明:方法Ⅰ、Ⅱ均能得到较纯净、完整的DNA,方法Ⅲ操作简便、得率较高,但DNA有一定降解。方法Ⅱ可作为野外远距离采血的首选方法。
关键词：
山羊全血 保存方法 DNA制备
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
朱锦辉 权军利 何玉科 陈耀锋 郭东伟 李春莲 曹团武 曹新有
研究了根癌农杆菌LBA 4404和C58C1生长的培养基类型、菌株生长状态、转化溶液、质粒与感受态细胞共放置时间、质粒加入量、液氮速冻时间及热激条件对质粒P rokⅡ转化的影响。结果表明,以70 mm o/L C aC l2作为转化溶液,YEB培养基制备的、OD600为0.5的LBA 4404感受态细胞与10 ng质粒DNA,于0℃共放置30m in,液氮速冻5 m in,37℃热激5 m in时转化率最高,达1.40×105μg-1;以70 mm o/L C aC l2作为转化溶液,YEB培养基制备的、OD600为0.5~0.6的C58C1感受态细胞与20 ng质粒DNA,于0℃共放置10 ...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
李瑞伟 曾令兵 张辉 肖艺 周勇 范玉顶 刘秋凤 孙建滨
以海藻酸钠、壳聚糖以及草鱼出血病细胞灭活疫苗为原材料,采用复凝聚法制备草鱼出血病口服微囊疫苗。通过单因素试验和正交试验,研究了海藻酸钠浓度、壳聚糖浓度、氯化钙浓度以及加入疫苗体积对微囊疫苗包封率的影响,确定了其最佳制备工艺。结果显示,各因素对草鱼出血病微囊疫苗包封率的影响程度由大到小依次为:海藻酸钠浓度>疫苗加入量>壳聚糖浓度>氯化钙浓度;制备草鱼出血病微囊疫苗的最佳工艺为:海藻酸钠浓度为1.5%,壳聚糖浓度为1%,氯化钙浓度为4%,加入疫苗体积为2 mL。该微囊疫苗平均粒径为(7.02±3.95)μm,平均包封率为60.53%,平均载蛋白量为8.12 mg/g,在pH 7.4的PBS溶液、生...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张秋婷 苗向阳 安铁洙
【目的】通过重组逆转录病毒体内感染源于第X期胚盘细胞的方法获得嵌合体鸡。【方法】将扩增的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的开放阅读框插入逆转录病毒表达载体pour-pBabe中获得重组逆转录表达载体;采用磷酸钙转染法将其与包装载体pVSVG共转入29310A1包装细胞中进行病毒包装,得到病毒原液经超速离心浓缩200倍后注入种蛋(第X期)胚盘下腔,孵化种蛋。提取孵化5.5天的鸡胚基因组DNA,进行PCR检测和Southern杂交检测。【结果】构建含EGFP完整开放阅读框的逆转录病毒表达载体pour-pBabe-EGFP,提取孵化5.5d鸡胚基因组DNA,经PCR、Southern杂交检测,嵌合...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
金鑫 张曼 王云鹤 魏方 温婧怡 杨银凤
本研究旨在建立绵羊瘤胃上皮细胞(Ovine rumen epithelial cells,ORECs)的分离培养、冻存和复苏方法,为反刍动物瘤胃功能的研究和相关瘤胃疾病的发病机制研究提供功能性的细胞模型。以绵羊瘤胃为研究对象,采用胰蛋白酶连续消化法对瘤胃组织进行不同时间(40、30、20、10、10、8和5 min)的消化,并对每次消化后的瘤胃组织和消化液分别进行H.E染色分析和显微镜观察,以确定细胞开始收集及终止消化的时间,最后将收集的瘤胃上皮细胞进行原代培养。在传代培养时,运用差时消化法和差速贴壁法对ORECs进行纯化,并从细胞形态学、细胞生长曲线、角蛋白18(CK-18)免疫荧光染色和上皮细胞标志物E-钙黏蛋白和碱性磷酸酶基因表达等方面对ORECs进行鉴定。然后设置不同体积配方的冻存液,将传代细胞进行冻存,通过检测复苏后的细胞活力和24 h贴壁率确定最佳冻存液配方。结果表明:第4次消化后就基本消化到瘤胃组织的棘层,此时即可开始收集细胞;第7次消化完后瘤胃上皮的基底层细胞基本被消化掉,此时即可终止消化细胞。经纯化后传代的细胞呈现均一的"铺路石"形态,生长曲线明显呈"S"形,且经CK-18免疫荧光染色后鉴定为阳性,同时PCR检测到上皮细胞特异性标志蛋白E-钙黏蛋白和碱性磷酸酶均有表达。此外,ORECs经不同体积配方冻存液冻存复苏后发现,冻存液配方为V_(FBS)∶V_(DMEM)∶V_(DMSO)=9∶0∶1时ORECs的细胞活力及贴壁率最高,且传代后的细胞生长状况良好。因此本试验成功建立了ORECs的体外分离培养、冻存和复苏方法。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
德力格尔桑 韩杰 玛丽娜 乌兰塔娜
探索蒙古绵羊脾蛋白的最佳酶解条件,确定最具抗氧化活性的脾肽及其分子质量。将不同饱和度硫酸铵沉淀制得的脾蛋白分别经胰蛋白酶、木瓜蛋白酶及二者混合物(质量比1∶1,下称酶混合物)水解制得脾肽,经G-25柱层析分离后,电泳确定脾肽分子质量。分别在非脂质的DPPH.和.OH体系,及脂质的卵磷脂和猪油体系中对制得的脾肽进行体外抗氧化活性试验,结果表明:60℃,pH7.0,酶混合物添加量5.0%(质量分数),5.5 h为最佳酶解条件。饱和度为60%的硫酸铵沉淀制得的脾蛋白电泳条带最多,此脾蛋白经酶混合物水解后,柱层析分离得到F1、F2、F3、F44个峰区,其中F3(分子质量6 ku)的脾肽在非脂质体系中清...
关键词：
脾脏蛋白 酶水解 脾脏多肽 体外抗氧化
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