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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赛务加甫 张立 彭新荣 郭志林 杨丽 李向臣 何宽军 安志兴 张涌
研究了绵羊精子提取物对绵羊卵母细胞的孤雌激活作用,确定了绵羊精子提取物的最佳注射剂量,并将其孤雌激活效果与离子霉素联合6-DM AP法的激活效果进行了比较。结果表明,绵羊精子提取物对绵羊卵母细胞有孤雌激活作用,最佳注射剂量为每个绵羊卵母细胞注入2~4 pL浓度5~6 m g/mL的绵羊精子提取物;绵羊精子提取物的孤雌激活效果与离子霉素联合6-DM AP法的激活效果差异不显著。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
许丹宁 田允波 黄运茂 陈学进
为寻求适合于山羊卵母细胞孤雌激活的方法,本试验采用离子霉素对体外成熟山羊卵泡卵母细胞进行孤雌激活,同时比较了培养液中添加不同类型的血清对孤雌激活胚体外发育的影响。结果表明:用2.5、5.0和10.0μmol/L离子霉素处理卵母细胞,卵裂率分别为72.3%、75.6%和70.3%,囊胚率分别为40.8%、45.4%和39.4%,均无显著差异(P>0.05)。用5.0、10.0、15.0和20.0μmol/L钙离子载体Ca-A23187处理卵母细胞,卵裂率分别为50.5%、62.5%、60.4%和60.2%,其中5.0μmol/L Ca-A23187处理组的卵裂率极显著低于其他处理组(P<0.01...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
曹鸿国 刘俊平 张涌
对小鼠卵母细胞进行孤雌激活用于单性生殖研究。取成年昆明白小鼠进行超数排卵,乙醇激活,同小鼠输卵管上皮细胞共培养并添加mM16培养基培养至早期囊胚阶段,移至小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上,换成ES细胞培养液继续培养,分离消化ICM,重新接种,对分离出的ES样细胞集落进行分离培养鉴定。结果显示,小鼠卵母细胞激活率为96.99%,2-细胞发育率为93.17%,桑椹胚发育率为80.33%,囊胚发育率为73.22%。小鼠孤雌激活囊胚中分离的ES样细胞集落具有一系列ES细胞所特有的特征,如呈现出岛屿状形态,碱性磷酸酶染色为阳性,体外能够自发分化成上皮样或单个散在分布的细胞等。试验证明,小鼠孤雌胚中可以分离出...
关键词：
小鼠 卵母细胞 孤雌激活 ES细胞样集落
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
叶荣 陈学进 郭宪 杨利国
比较 3种化学激活方法和 4种电化学激活方法对牛体外成熟卵母细胞进行孤雌激活的效果。结果显示 ,单独用离子霉素和用离子霉素 + 6 DMAP +CB或 +CHX +CB激活牛卵母细胞 ,两者之间差异极显著 (P 0 0 5 )。结果表明 ,虽然电化学激活方法最高可获得 82 9%的卵裂率 ,比化学激活方法中最好的高 4 8% ,但后者不需电融合仪 ,操作相对简便。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李雪峰 安志兴 郭继彤 张涌
为确定牛体细胞核移植胚胎的激活条件 ,比较了几种不同化学激活方法对牛卵母细胞激活的影响。选择明显具有第一极体的成熟卵母细胞 ,随机分为 9组 :1Ionomycin(I) +6 -甲氨基嘌呤 (D) (ID) ;2 I+D+细胞松弛素 B(CCB) (IDC) ;3I+放线菌酮 (X) (IX) ;4 I+X+CCB(IXC) ;5体积分数 7%乙醇 (E) +D(ED) ;6E+D+CCB(EDC) ;7E+X(EX) ;8E+X+CCB(EXC) ;9Sr2 + +CCB(SC)。Ionom ycin和乙醇的处理时间为 5min,6 - DMAP± CCB的处理时间为 4 h,放线菌酮± ...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘勇 吴晓庆 王子玉 宋浩洋 张领 乔凌燕 李文雍 谭景和
［目的］建立利用獭兔体外成熟卵母细胞进行孤雌激活及体细胞核移植的技术体系，促进獭兔现代育种技术的发展。［方法］以獭兔屠宰场废弃卵巢为试验材料，利用体外成熟、孤雌激活、体细胞核移植等方法，研究了獭兔体外成熟卵母细胞支持胚胎发育的能力。［结果］１）直径大于１ ｍｍ卵泡内的卵母细胞孤雌激活后的发育能力显著强于０．７～１．０ ｍｍ卵泡内的卵母细胞。２）卵母细胞体外培养（ＩＶＣ）１５～２１ ｈ后孤雌激活，卵裂率显著高于ＩＶＣ １２ ｈ组。３）２．５μｍｏｌ·ｌ－１ＩｏｎｏｍｙＣＩｎ处理５ ｍＩｎ，再用２ ｍｍｏｌ·ｌ－１６－二甲基氨基嘌呤（６－ＤｍＡＰ）与５μｇ·ｍ ｌ－１亚胺环己酮（ＣｈＸ）联合处理１．．．
关键词：
孤雌激活 体细胞核移植 体外成熟 獭兔
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
敖红 王海 连正兴 李宁 夏国良
激活是体细胞核移植技术的关键步骤。本研究对常用化学激活剂乙醇、钙离子载体A2 3187和离子霉素以及添加 6 二甲基氨基嘌呤 (6 Dimethylaminopurine ,6 DMAP)和放线菌酮 (cycloheximide ,CHX)对山羊卵母细胞的激活效果以及不同卵龄的卵母细胞激活后体外发育效果进行了比较。结果表明 :离子霉素处理组激活率显著高于乙醇和A2 3187处理组 (89.6 %vs 6 3.5 % ,6 8.7% ;P
关键词：
绵羊 卵母细胞 化学激活
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
蔡元 张兆旺 田见晖 朱士恩 刘国世 成文敏 曾申明 李迎
探讨了猪卵母细胞电激活后间隔不同时间用化学药物处理对猪卵母细胞孤雌发育的影响。结果表明 :1)电激活后间隔 0 ,3,4 ,5和 6h再分别用 6 二甲基氨基嘌呤 ( 6 Dimethylaminopurine ,6 DMAP)、放线菌酮 (cyclohex imide ,CHX)处理 6h ,各组卵裂率、囊胚细胞数差异不显著 (P >0 0 5 ) ,但在 6 DMAP组中对照组囊胚率极显著高于其余各组 (P 0 0 5 ) ;2 )电激活后间隔 ...
关键词：
猪 卵母细胞 孤雌发育 核型
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
潘伟荣 魏太云 信吉阁 张崇义 卿玉波 魏红江
为优化电激活和胚胎培养的相关技术体系,研究电激活参数和培养液对猪卵母细胞孤雌胚胎发育的影响。结果表明:在脉冲电压为150 V(以每1 mm电激槽宽计,下同)、脉冲持续时间为100μs、脉冲1次的电激活条件下,猪卵母细胞孤雌激活的效果较好;在脉冲持续时间和脉冲次数恒定的条件下,脉冲电压150 V组的囊胚率显著高于100 V组和125 V组(P<0.05),达46.3%;在脉冲电压和脉冲次数恒定的条件下,脉冲持续时间100μs的囊胚率显著高于75、125μs组(P<0.05),达50.5%;在脉冲电压和脉冲持续时间恒定的条件下,1次脉冲的卵裂率和囊胚率显著高于2次脉冲组(P<0.05),分别达82...
关键词：
猪卵母细胞 孤雌发育 激活参数 培养液
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马利兵 王强 王凤梅 张涌
研究了卵龄、电脉冲参数、氯化锶、亚胺环己酮(CHX)对小鼠卵母细胞电激活及孤雌发育效果的影响。结果表明,卵龄为17h的小鼠卵母细胞在场强1.0kV/cm,脉冲宽度30μs,2次电脉冲,激活液中含Ca2+、Mg2+和Sr2+的条件下激活后,再于含CHX的培养液中培养,可较好地激活卵母细胞,提高体外孤雌胚的发育率,激活率及桑囊胚率分别可达83.3%和57.5%。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
田见晖 蔡元 刘国世 曾申明 成文敏 朱士恩 刘焕营 吴常信
探索了离子霉素结合细胞松驰素B(cytochalasinB,CB)、放线菌酮(cycloheximide,CHX)以及6-二甲基嘌呤(6-dimethylaminopurine,6-DMAP)等化学物质,对猪卵母细胞激活后发育的影响。试验1,体外成熟卵母细胞分别用15、20、25、30μmol·L-1的离子霉素处理40min或电激活(1.3kV·cm-1,80μs,1次脉冲),结果表明,20μmol·L-1组的激活率(69.93±5.80)%显著高于15μmol·L-1组(P0.05)。试验2,卵母细胞采用20μmol·L-1离子霉素分别激活10、20...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张果平 王金文 王德芹 黄庆华 朱荣生 徐伟
探讨了体外培养时间和培养系统对山羊卵母细胞孤雌激活和体外发育的影响。结果表明:卵母细胞体外培养36、33、30和27 h活化率极显著高于18、21、24 h(P<0.01)。孤雌胚在TCM199...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘红林 范必勤 陈宜峰 汪河海
昆明鼠卵母细胞ｈＣＧ注射后１８￣１９ｈ用体积分数为７％的乙醇作用５￣６ｍｉｎ，能够获得较为理想的激活效果，激活率高达９０％。乙醇激活处理时，卵丘细胞以及细胞外Ｃａ＼＋＼｛２＋＼｝、Ｍｇ＼＋＼｛２＋＼｝的有无对卵子的激活效果均无显著影响。３７℃下激活处理与３０℃下相比，激活率无显著差异，但卵子碎裂率显著提高。性成熟前小鼠超排的卵子虽然也能被激活，但激活率低于成熟后小鼠超排的卵子。哺乳动物卵母细胞成熟分裂抑制剂ＮａＦ和ＩＢＭＸ不能抑制乙醇处理卵的孤雌激活，但显著地抑制了激活卵子的卵裂。
关键词：
小鼠 卵母细胞 乙醇 激活
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李裕强 张琇 安志兴 张涌
比较了Ionomycin(离子霉素)和乙醇及其与其他物质的组合激活牛卵母细胞的效果,并研究了去核时间、细胞松弛素B、末期去核等对去核效率的影响。结果表明,配合使用6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)或放线菌酮(CHX)可显著提高Ionomycin或乙醇激活牛卵母细胞的效率,Ionomycin+6-DMAP激活的牛孤雌胚在8/16细胞之后的发育率明显高于乙醇+6-DMAP(或CHX)。牛卵母细胞的去核在成熟培养20h或之前进行效果较好,此时有较高比率的卵母细胞中第一极体与染色体位置靠近。牛卵母细胞在不含细胞松弛素B的操作液中可进行去核,但所得核移植胚胎的卵裂率明显下降,而对8/16细胞胚之后的发育...
关键词：
卵母细胞 牛 去核 激活
[期刊] 西南农业学报
[作者]
宋尚桥 曾素先 马围围 王睿敏 严瑾 孙翠翠 李鑫 黎宗强
【目的】探索猪孤雌激活胚胎培养过程和猪卵母细胞体外成熟前后的DNA甲基化水平及其变化,为探讨猪孤雌激活胚胎和卵母细胞的发育提供理论依据。【方法】通过使用间接免疫荧光组化和激光共聚焦显微镜的荧光相对定量的两种方法来间接检测猪孤雌激活胚胎培养过程中和猪卵母细胞成熟前后的细胞5-甲基胞嘧啶的相对含量,观察其体外发育过程中甲基化水平的变化。【结果】随着体外培养时间的延长,猪孤雌激活胚胎的甲基化程度在二到桑葚胚时呈逐渐减弱趋势;在猪孤雌激活胚胎发育的过程中,同一个胚胎的不同卵裂球之间的甲基化水平有差异;内细胞团的甲基化水平低于滋养层。猪卵母细胞成熟前和体外成熟的基因组DNA甲基化水平相比,成熟前卵母细胞基因组DNA甲基化水平低于体外成熟后的卵母细胞基因组DNA甲基化水平;随着体外成熟时间的延长,猪卵母细胞的基因组DNA甲基化水平大致呈上升趋势。【结论】IVM/PA/IVC对猪卵母细胞及早期胚胎的甲基化模式有一定影响;猪卵母细胞体外培养过程中,猪卵母细胞核基因组的甲基化水平接近于正常体内的卵母细胞。
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