【目的】对宁夏某规模化绵羊场大肠杆菌和艾美耳球虫混合感染进行分离鉴定并对靶器官的组织病理学变化进行分析。【方法】采用固体培养基进行细菌病原分离，饱和盐水漂浮法进行寄生虫检测；采用大肠杆菌16S rRNA引物进行基因序列扩增和测序，使用DNA Star软件将分离菌株测序结果与GenBank中的标准株序列进行同源性比较；采用MEGA 7.0软件中的邻接法，依据16S rRNA序列构建分离株系统发育树并进行遗传进化分析；对靶器官组织进行病理组织学观察。【结果】在伊红美蓝培养基中观察到金属光泽的黑色单一菌落，在血平板中有溶血环的灰色圆形单一菌落，染色为革兰氏阴性杆菌，共分离得到3株菌株；麦克马斯特法检测显示，粪便中有卵圆形，表面光滑的孢子化艾美尔球虫卵囊，其平均OPG为2200，属于轻度感染；对3株菌株16S rRNA扩增片段与阳性对照一致，16S rRNA基因序列构建的系统发育树与大肠杆菌在同一分支；病理组织学观察显示，肠系膜淋巴结淋巴细胞数量减少，有中性粒细胞浸润；肠组织黏膜层绒毛溶解坏死、黏膜上皮结构丢失；回肠固有层内有球虫虫体，呈嗜酸性圆形；空肠间质有中性粒细胞浸润，腺腔有镰刀状球虫裂殖体；结肠局部黏膜有溃疡灶，并有大量弱嗜碱性短杆状物质沉积。【结论】结合病原形态学和分子生物学结果分析表明，该例绵羊群腹泻是由大肠杆菌和艾美尔球虫共同感染所致。

本试验主要选择了引起猪黄白痢的常见致病菌株E.coli,K88,通过对其在专用培养基上增菌培养,制成油佐剂灭活苗免疫产蛋母鸡,运用微量凝集试验测母鸡抗体水平,待抗体水平达8 log2以上时,收取鸡蛋制成高免卵黄。选择6窝56头刚出生的未吮乳仔猪(母猪未免疫),第1,2窝16头用E.coli K88标准菌株500亿／头口服人工感染,第3,4窝18头口服E.coli K88标准菌株250亿／头,第5窝10头作为抗生素治疗对照组,第6窝12头为空白对照组,观察记录发病情况,待明显发病后,对第1~4窝仔猪用自制抗E.coli K88高免卵黄口服治疗。试验结果表明,口服抗E.coli K88菌株高免卵黄...

应用RT-PCR、PCR和细菌分离等方法,对陕西某规模化养猪场发生的仔猪渐进性消瘦、呼吸困难和母猪繁殖障碍为主要特征的疾病进行了流行病学调查和病原分离鉴定。结果表明,该猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和2型猪圆环病毒(PCV2)感染相当严重,从出现胸肺粘连的病猪实质脏器中可分离到致病性大肠杆菌和沙门氏菌,未分离到胸膜肺炎放线杆菌。该猪场此次疫情主要是由于猪PRRSV、PCV2、大肠杆菌和沙门氏菌四重混合感染而引起。

观察了 38例雏鸡实验性大肠杆菌病的病理变化 .发现其主要特征是各脏器出现亚急性浆液———纤维性炎症 ,有大量嗜异性白细胞浸润并形成化脓灶 ,局部组织水肿、坏死 ,同时淋巴细胞增生 .炎症迁延到慢性阶段时 ,脏器表面的纤维素性渗出物发生机化 .重要病变为纤维素性化脓性气囊炎 ,浆液性纤维素性心包炎和肝周炎 ,脾肿大 ,肺肉芽肿结节 .

从天津地区１０个区县、２３个养鸡场的２４１只疑似大肠杆菌病病例中，分离出病原菌９２株，所得菌株符合大肠杆菌的微生物学特性。致病性在各菌株间略有差异。分离菌对氟哌酸、庆大霉毒、氯霉素最为敏感。抗“Ｏ”血清型鉴定，结果表明，分离菌株分属２５个血清型，并以Ｏ１１１、Ｏ８９、Ｏ８６、Ｏ３０、Ｏ７８为主。从优势血清型中选取的菌株，均具有良好的抗原性。

从江苏地区５个大型种鸡场孵化后期死亡的１６３枚鸡胚及８４羽出壳弱雏中分离鉴定出９９株大肠埃希氏菌，死胚分离率为３６．８１％，出壳弱雏分离率４６．４３％；从其它９个蛋鸡场４７羽疑似大肠杆菌病的病、死鸡的肝、脾、心包、腹水、输卵管、脑、眼中分离鉴定出２３株大肠埃希氏菌，分离率为４８．９４％。分离菌中有６７株对清洁级昆明种小鼠（ＫＭ）具有强毒力。对其进行大肠埃希氏菌Ｏ群抗原鉴定，共有２２种Ｏ型血清型，Ｏ１１、Ｏ８８、Ｏ１１５为优势血清型，Ｏ７８及Ｏ８１各为３株，Ｏ１８、Ｏ２０、Ｏ２６、Ｏ３６、Ｏ８９各为２株，其余为Ｏ３、Ｏ４、Ｏ９、Ｏ３０、Ｏ６０、Ｏ７５、Ｏ９３、Ｏ１０３、Ｏ１１４、Ｏ１３１、Ｏ１３...

为研究绵羊大肠杆菌性乳腺炎中乳腺成纤维细胞的损伤情况及TLR4的作用机制，通过体外培养获得原代绵羊乳腺成纤维细胞，大肠杆菌人工感染细胞建立大肠杆菌性乳腺炎细胞模型，分析大肠杆菌对细胞损伤的影响及TLR4在大肠杆菌性乳腺炎中的作用。采用酶消化法结合差速消化法获得原代绵羊乳腺成纤维细胞；MTT法检测细胞活力及TLR4阻断剂CLI-095的细胞毒性作用；乳酸脱氢酶法检测大肠杆菌对绵羊乳腺成纤维细胞的损伤情况并筛选最适MOI比值；qRT-PCR法检测caspase-3、TLR4的mRNA相对表达量及CLI-095的阻断效果；比色法检测细胞焦亡蛋白caspase-4,5的酶活性；WB检测TLR4蛋白的相对表达量；平板活菌计数法检测CLI-095对大肠杆菌黏附绵羊乳腺成纤维细胞的影响。分离获得绵羊乳腺成纤维细胞，MTT测定结果显示，细胞活力良好；大肠杆菌以最适MOI=4∶1感染绵羊乳腺成纤维细胞后，各时间段LDH释放量均显著升高；caspase-3 mRNA的相对表达量在感染1～3 h内显著上升，3 h后表达量显著下降；caspase-4,5酶活性在感染1～3 h内升高，3 h后降低。TLR4的mRNA及蛋白表达量均显著上调，CLI-095可抑制大肠杆菌对细胞的黏附作用。大肠杆菌感染成纤维细胞后LDH释放量增加、caspase-3基因表达上调、caspase-4,5酶活性升高，促进了绵羊乳腺成纤维细胞的损伤、凋亡及焦亡；大肠杆菌感染促进绵羊乳腺成纤维细胞内TLR4 mRNA及蛋白的表达；TLR4阻断剂CLI-095可能通过抑制TLR4的表达抑制E.coli对细胞的黏附作用。

【背景】羊大肠杆菌病是一种以剧烈腹泻和败血症为特征的急性传染病,是规模化羊场最为常见高发的细菌性疾病之一,尤其是初生羔羊易被产肠毒素大肠杆菌(ETEC)感染,引起羔羊腹泻,又叫羔羊白痢,使养殖场遭受严重的经济损失。而传统的抗生素治疗方案存在诸多缺陷。【目的】本研究通过让湖羊羔羊口服大肠杆菌F17菌株获得不腹泻和腹泻的羔羊个体,筛选出服用大肠杆菌F17菌毛后不腹泻与腹泻型个体中差异表达的circRNA,进而探究circRNA在绵羊抗腹泻中的作用,从而发现与抗大肠杆菌病性状相关的候选基因。从circRNA层面上,加深对绵羊拮抗大肠杆菌F17菌株的认识,确定绵羊拮抗大肠杆菌F17菌株的功能基因。【方法】用CIRI软件从头预测circRNA,利用RNA-seq技术,首次筛选出感染大肠杆菌F17菌株后不腹泻与腹泻型羔羊个体脾脏中差异表达的(DE)circRNA,对差异表达转录本进行GO富集分析,结合GO注释结果对其功能进行描述。统计每个GO条目中所包括的差异转录本个数,并用Fisher’s exact test计算每个GO条目中差异转录本富集的显著性。然后随机选择6个DE circRNA,利用q-PCR分别验证这6个DE circRNA在不腹泻和腹泻组羔羊脾脏内的相对表达水平,进而利用Miranda软件来预测与miRNA结合的circRNA以及miRNA的靶基因,根据miRNA靶基因的功能注释来阐明此部分circRNA的功能,分析circRNA-miRNA-mRNA相互作用,最后用q-PCR验证circRNA在不腹泻组和腹泻组羔羊体内的相对表达水平。【结果】绘制参考序列后,鉴定出已知的7 730个circRNA,DE circRNA与GO数据库进行比对,发现一共有60条circRNA被注释和分类到297个功能亚类中。利用RNA-seq在不腹泻和腹泻羔羊脾脏中筛选出60个差异表达的(DE) circRNA,其中31个上调和29个下调,用q-PCR验证随机选择的6个DE circRNA在不腹泻组和腹泻组羔羊体内的相对表达水平,发现与RNA-seq结果一致。利用Miranda分析circRNA-miRNA-mRNA相互作用,发现6个circRNA、5个miRNA和8个mRNA之间存在一定的靶标关系,用q-PCR验证mRNA在不腹泻组和腹泻组羔羊体内的相对表达水平,发现与RNA-seq结果一致。【结论】探究了对于不腹泻和腹泻羔羊脾脏中circRNA的表达谱,进一步了解其在绵羊抗病发生过程中的调控作用。发现了不腹泻和腹泻羔羊脾脏中差异表达的circRNA,有助于找出羔羊如何抵抗腹泻的发生机制,为羔羊抵抗腹泻提供科学的依据。

通过石蜡切片、H.E.染色等研究了巨型艾美耳球虫 Eimeria maxima 在免疫鸡体内的发育及鸡体相应肠道的组织学变化.E.maxima 在非免疫鸡体内有3代裂殖生殖。在其第1,2代裂殖生殖阶段,所见虫体寄生的空肠组织发生粘液变性.在裂殖生殖后期和配子生殖阶段,非免疫攻毒鸡空肠绒毛组织病理学变化明显,包括粘膜上皮大量脱落,固有层淋巴细胞浸润等,有时可见大量上皮间淋巴细胞(IEL)出现,在免疫攻毒鸡,E.maxima 从子孢子的侵入、移行阶段在免疫鸡体内就受到抑制.随着时间推移,第1,23代裂殖生殖受到日益加重的抑制,最终使虫体没有进入有性生殖阶段。给免疫鸡攻毒后24h 即可见空肠...

研究了氟喹诺酮新药司帕沙星对实验性感染大肠杆菌-败血霉形体病鸡的疗效。采用试管液体二倍稀释法测得司帕沙星对大肠杆菌(O78)和禽败血霉形体(PG31)的最小抑菌浓度均为0.00625mg·L-1。240只30日龄雏鸡随机分为司帕沙星3个不同剂量组(25,50,100mg·L-1)、环丙沙星对照组(50mg·L-1)、恩诺沙星对照组(50mg·L-1)、泰乐菌素对照组(500mg·L-1)、健康对照组和感染对照组,每组30只鸡,连续饮水给药5d,对实验性感染大肠杆菌-禽败血霉形体病鸡进行治疗试验。结果表明:司帕沙星3个不同剂量组、环丙沙星组、恩诺沙星组、泰乐菌素组的治愈率分别为86.7%、96....

通过定点突变生成的方法,分别构建了全长artemincDNA和2个C末端缺失突变体Ar-CΔ19和Ar-CΔ35,以及2个单点替代突变体Ar-C22和Ar-C61,并在大肠杆菌BL21PRO中得到表达,重组蛋白的表达水平约占细胞总蛋白的2%~3%.电镜检测结果表明,重组artemin寡聚体呈规则的花环状,直径为18nm左右,大于铁蛋白重链的寡聚体(12nm)和来自于休眠卵的artemin寡聚体(16nm),2个C末端的缺失突变对artemin的寡聚化没有明显影响,而单点替代突变Ar-C22对寡聚化影响较小,Ar-C61则完全不能寡聚化,说明Cys61对于维持artemin的空间构象有着重要的作...

水溶性氟哌酸、非水溶性氟哌酸、氯霉素三种药物对雏鸡常见致病菌埃希氏大肠杆菌、鸡白痢沙门氏杆菌混合感染的临床药效研究结果表明:水溶性氟哌酸应用200ppm、100ppm、50ppm三个不同浓度对鸡埃希氏大肠杆菌和鸡白痢沙门氏杆菌同时进行人工感染雏鸡的保护率分别为91.65%、88.35%、76.65%,与非水溶性氟哌酸相比,效果明显,差异显著;与推荐剂量氯霉素相比,剂量小,效果好;与感染对照组相比,差异极显著.

将60只健康罗曼粉鸡随机分为正常组和模型组，每组30只，模型组灌服1×10~(4)个孢子化卵囊进行人工复制鸡球虫病模型，正常组灌服等体积生理盐水，感染5 d，剖杀试验鸡，无菌采集鸡盲肠内容物，并通过Illumina PE250型高通量测序仪对肉鸡盲肠内菌群进行16S rDNA基因V3～V4可变区检测，对肠道菌群可操作分类单元(OTUs)数、α多样性、β多样性及差异菌门与菌属进行综合性分析与评价，探究柔嫩艾美耳球虫感染对鸡盲肠菌群结构和多样性的影响。结果表明：与正常组相比，感染柔嫩艾美耳球虫后鸡肠道菌群的OTUs数、Chao1指数极显著降低，Shannon指数显著降低，Simpson指数显著升高；门水平上，模型组变形菌门的相对丰度极显著升高，而厚壁菌门的相对丰度显著降低，拟杆菌门和柔膜菌门的相对丰度显著降低；属水平上，正常组的优势菌属为拟杆菌属、瘤胃菌属–UCG014、副拟杆菌属，而模型组瘤胃球菌属–uncultured、球藻菌属、埃希菌–志贺菌属相对丰度极显著升高。可见，艾美耳球虫破坏了盲肠菌群的完整性，促进潜在致病菌的建立和生长，尤其使埃希菌–志贺菌属大量繁殖，快速生长。

将60只健康罗曼粉鸡随机分为正常组和模型组，每组30只，模型组灌服1×10~(4)个孢子化卵囊进行人工复制鸡球虫病模型，正常组灌服等体积生理盐水，感染5 d，剖杀试验鸡，无菌采集鸡盲肠内容物，并通过Illumina PE250型高通量测序仪对肉鸡盲肠内菌群进行16S rDNA基因V3～V4可变区检测，对肠道菌群可操作分类单元(OTUs)数、α多样性、β多样性及差异菌门与菌属进行综合性分析与评价，探究柔嫩艾美耳球虫感染对鸡盲肠菌群结构和多样性的影响。结果表明：与正常组相比，感染柔嫩艾美耳球虫后鸡肠道菌群的OTUs数、Chao1指数极显著降低，Shannon指数显著降低，Simpson指数显著升高；门水平上，模型组变形菌门的相对丰度极显著升高，而厚壁菌门的相对丰度显著降低，拟杆菌门和柔膜菌门的相对丰度显著降低；属水平上，正常组的优势菌属为拟杆菌属、瘤胃菌属–UCG014、副拟杆菌属，而模型组瘤胃球菌属–uncultured、球藻菌属、埃希菌–志贺菌属相对丰度极显著升高。可见，艾美耳球虫破坏了盲肠菌群的完整性，促进潜在致病菌的建立和生长，尤其使埃希菌–志贺菌属大量繁殖，快速生长。