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[期刊] 中国农业科学
[作者]
李海军 于泊洋 段云娇 刘星宇 翁娅政 杜晨光 王秀梅
【目的】在绵羊有腔卵泡发育过程中,多层卵丘细胞紧密包绕着卵母细胞形成卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complex,COCs)特殊结构,存在于卵泡腔内。卵泡成熟后,绵羊COC从卵泡内排出,进入输卵管,等待受精。现有的卵丘-卵母细胞复合体蛋白鉴定技术,或者将包含各级卵泡的卵巢组织直接进行切片处理,或者将COCs从卵泡内分离,在完整卵丘-卵母细胞复合体水平上进行免疫染色。但这两种方法在检测绵羊有腔卵泡COCs中目的蛋白表达时,存在显著缺陷。研究旨在对常规石蜡组织切片技术进行改进,以期满足绵
[期刊] 中国农业科学
[作者]
朱桂玉 冯书堂 李吉涛 牟玉莲 潘登科 郭炳冉
【目的】研究探讨卵丘细胞的完整性在支持和促进猪卵母细胞成熟过程中发挥的重要作用以及卵丘与卵母细胞互作的分子机理。【方法】对具有完整致密卵丘细胞包裹的和无卵丘细胞包裹的猪卵母细胞进行了体外成熟培养试验,应用mRNA差异显示(DDRT-PCR)和半定量反转录PCR技术(RT-PCR),对这2类猪卵母细胞中mRNA的差异表达进行研究,得到了14条差异表达条带,经过回收、克隆、测序后,再运用半定量(RT-PCR)进行检测。【结果】体外培养的裸卵细胞的各项成熟指标均低于卵丘-卵母细胞复合体。3个基因(PELP1,Myo5b and CAST)和一条新EST序列在有卵丘和无卵丘的猪卵母细胞中表现出差异表达...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
何向东 字向东 夏忆 陈莹
为探讨牦牛有腔卵泡发育过程中卵丘卵母细胞复合体（Cumulus-oocyte complexes,COCs）mRNA转录组变化，对牦牛小（2～3mm）、中（4～5mm）、大有腔卵泡（6～8mm）中的COCs进行Illumina平台测序，筛选差异表达基因（Differentially expressed genes,DEGs），并进行GO分析和KEGG分析。结果表明，1）牦牛小、中、大3个阶段的卵泡COCs中共有17 342个基因表达；2）小卵泡与中卵泡COCs之间有879个DEGs，其中，上调435个，下调444个；DEGs注释到106条GO条目，其中生物过程（BP）类别46条，细胞组成（CC）类别25条，分子功能（MF）类别35条，涉及254条KEGG通路。中卵泡与大卵泡COCs之间有1 560个DEGs，其中，上调590个，下调970个；3)DEGs注释到114条GO条目，其中BP 55条、CC 26条和MF 33条，涉及276条KEGG通路，DEGs主要富集在神经活性配体-受体相互作用、细胞因子-细胞因子受体相互作用、细胞粘附分子、钙离子信号通路和cAMP信号通路等重要通路。综上，牦牛卵泡在不同发育阶段的DEGs、GO条目和KEGG pathway存在明显差异，为揭示牦牛卵泡发育分子调控机制，改善牦牛卵母细胞体外成熟技术提供了理论依据。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
曹忻 张德荣 罗海玲 石国庆
为研究不同月份对绵羊卵母细胞采卵数及体外成熟的影响,采用切割法获得不同月份绵羊卵母细胞,统计分析可用卵母细胞数和体外培养成熟率。结果表明:随着月份的延续,卵母细胞获得数从5月的(3.53±0.27)(个/d)稳步增加到11月的(5.16±0.15)(个/d),差异极显著(P<0.01)。卵母细胞体外成熟率也显著提高,其中8月份成熟率极显著高于5月、6月、7月(P<0.01);9月、10月、11月卵母细胞成熟率又极显著的高于8月(P<0.01),同时季节和气温对绵羊卵母细胞采卵数和利用也有显著影响(P<0.01)。因此,不同月份采卵显著影响可用绵羊卵母细胞数和卵母细胞体外成熟水平。
[期刊] 华北农学报
[作者]
杜晨光 彭春霞 刘永斌 王昆
为揭示Ghrelin在绵羊卵母细胞的表达情况,运用实时定量RT-PCR技术检测不同培养系统中绵羊卵母细胞Ghrelin mRNA的相对表达量。结果表明,以M199和血清为基础培养基添加不同激素后培养的卵母细胞GhrelinmRNA相对表达量均显著上升,仅以M199为基础培养基添加不同激素后培养的卵母细胞Ghrelin mRNA相对表达量均显著下降。在不同基础培养基中添加不同激素后,E2较FSH和LH有促进Ghrelin mRNA相对表达量升高的趋势。绵羊卵母细胞Ghrelin mRNA的表达以及在不同培养系统动力学变化,提示了这一新型分子在卵母细胞成熟过程中受激素潜在的调控作用。
[期刊] 华北农学报
[作者]
黄承俊 郭林林 孙守强 林峰 刘海军
为了提高牛卵母细胞体外成熟率,以机械裸卵(DOs)、卵丘-卵母细胞复合体(COCs)和添加的离散卵丘细胞的不同组合,对卵丘细胞在卵母细胞体外成熟过程中的影响进行了探索,并对不同卵丘细胞的作用途径和强度进行了分析。试验结果表明:添加离散卵丘细胞能够显著促进DOs的体外成熟(57.98±14.27 vs 35.53±14.00,P0.05);卵母细胞胞外卵丘细胞对与之共培养的DOs的体外成熟促进作用效果不明显(35.83±18.32 vs 35.53±14.00,P>0.05)。分析结果显示:卵...
关键词：
卵丘细胞 卵母细胞 体外成熟 牛
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赛务加甫 张立 彭新荣 郭志林 杨丽 李向臣 何宽军 安志兴 张涌
研究了绵羊精子提取物对绵羊卵母细胞的孤雌激活作用,确定了绵羊精子提取物的最佳注射剂量,并将其孤雌激活效果与离子霉素联合6-DM AP法的激活效果进行了比较。结果表明,绵羊精子提取物对绵羊卵母细胞有孤雌激活作用,最佳注射剂量为每个绵羊卵母细胞注入2~4 pL浓度5~6 m g/mL的绵羊精子提取物;绵羊精子提取物的孤雌激活效果与离子霉素联合6-DM AP法的激活效果差异不显著。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈勇 夏国良 王海滨 苏友强 傅国栋
本实验应用组织切片法探讨了体内正常生理条件下昆明白小鼠卵巢内卵丘扩展与卵母细胞成熟的关系。初情期前小鼠注射孕马血清促性腺激素 (PMSG) ,4 8h后注射人绒毛膜促性腺激素 (HCG) ,于注射HCG后不同时间取出卵巢进行组织切片。注射 HCG后 1h,卵丘细胞开始扩展 ,此时卵母细胞核膜完整 ,即未发生生发泡破裂 (GVBD) ;注射 HCG后 3h,大部分 (>70 % )大有腔卵泡中卵母细胞发生 GVBD,此时卵丘处于 2级扩展状态。卵丘完全扩展发生在注射 HCG后 9h,而 PB1的排出是从 12 h开始的。结果表明 :在小鼠体内 ,卵丘开始扩展先于卵母细胞成熟 ,但卵母细胞成熟并不...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李凯 倪和民 赵雁伟 刘云海 曲杨燕 李晓燕 郭勇
【目的】研究促黄体素(LH)对绵羊卵母细胞体外成熟和体外受精的影响。【方法】将绵羊卵母细胞置于含LH(处理组)或不含LH(对照组)的成熟液中进行体外成熟,在不同时间点取出,观察卵母细胞核成熟情况;结合皮质颗粒分布变化的观察结果判断细胞质成熟情况。【结果】绵羊卵母细胞体外成熟4h时,处理组生发泡破裂(GVBD)率显著低于对照组(36.76%vs50%,P<0.05);体外成熟24h并进行体外受精后,处理组卵母细胞卵裂率和囊胚率显著高于对照组(67.15%vs42.37%,21.9%vs12.71%,P<0.05)。激光共聚焦扫描检测结果表明,随着核的成熟,绵羊卵母细胞的皮质颗粒由胞质中心区域向周...
[期刊] 华北农学报
[作者]
郝瑞荣 吕丽华 高俊杰 张春香
为了探究AY 9944-A-7在3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine,IBMX)阻滞的绵羊卵母细胞减数分裂恢复过程中的作用,将绵羊卵丘-卵母细胞复合体(COCs)、分离的卵丘-卵母细胞(split COCs)和脱卵丘后制成的裸卵(DOs)培养于含250μmol/L IBMX的体外成熟液中,分别添加10,20,30,40μmol/L的AY 9944-A-7以诱导卵母细胞恢复减数分裂。结果表明,10~40μmol/L的AY 9944-A-7极显著地提高了绵羊COCs的生发泡破裂(GVBD)率和第一极体(PBI)排出率(P
[期刊] 华北农学报
[作者]
李颖 金世英 张树军 周欢敏
为了建立针对山羊卵母细胞的理想体外成熟培养体系,对山羊卵泡卵母细胞的采集方法,FSH和LH对山羊卵泡卵母细胞体外成熟的作用,及培养时间对卵母细胞体外成熟的影响进行了研究。结果表明:采用切割法平均每枚卵巢采集到的A,B级卵母细胞的数量明显多于抽吸法;采用TCM199添加体积分数为10%FCS,1~2 mg/L 17β_E2,10 mmol/L Hepes,0.12 mg/mL丙酮酸钠,0.1 mg/mL链霉素和0.125 mg/mL青霉素,10 mg/L FSH及20~50 mg/L LH的培养体系,有利于山羊卵母细胞的体外成熟,并放出第一极体。山羊卵母细胞体外成熟培养20,22,24 h,成熟...
关键词：
山羊 卵母细胞 体外成熟培养
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李海军 靳木子 张睿彪 杜晨光 刘东军 仓明
【目的】探讨卵丘-卵母细胞复合体(COCs)形态、卵丘细胞凋亡与增殖状态和卵母细胞发育能力之间的相关性。【方法】根据卵胞质均匀程度和卵丘细胞层数等形态指标,对所挑选的未成熟COCs进行分组,随后利用体外受精技术和TUNEL技术,并结合流式细胞仪,评价各组COCs的体外发育能力及其卵丘细胞凋亡和细胞周期差异。【结果】与包被5层以上致密卵丘且卵胞质均质的COCs相比,具有2—5层轻度扩散卵丘与颗粒化卵质特征的COCs显示较好的后续胚胎发育潜力、较高的卵丘细胞凋亡程度和较低的G2-M期细胞比率。【结论】卵丘细胞凋亡程度与未成熟卵母细胞发育潜能呈正相关;COCs形态、卵丘细胞凋亡或者G2-M期细胞比率...
关键词：
牛 胚胎发育 卵丘细胞 凋亡 增殖
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张通 栗瑞兰 范晓梅 刘春洁 海日汗 霍敏 张家新
【目的】研究p66Shc在绵羊卵母细胞中的表达特征及其与卵母细胞胞质氧化还原稳态的关系,为揭示p66Shc参与调控卵母细胞胞质氧化还原稳态分子机制提供理论依据。【方法】试验所用卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs)来源于屠宰场的绵羊卵巢。分别收集成熟前优质和劣质、常规成熟24 h及成熟30 h老化的卵母细胞,采用实时荧光定量PCR对成熟前后不同质量绵羊卵母细胞中p66Shc mRNA的表达量进行分析,利用细胞免疫荧光结合MitoTracker Red探针对p66Shc蛋白和线粒体进行共定位,同时利用荧光探针DCFH-DA和卵母细胞自发荧光分别对成熟前后不同质量卵母细胞内ROS水平和氧化还原稳态进行检测。此外,采用外源H_2O_2诱导的氧化应激处理成熟前优质卵母细胞,并对p66Shc蛋白的表达及定位进行了检测分析。【结果】实时荧光定量PCR结果显示,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞中p66Shc mRNA表达量分别显著(P0.05)。共定位结果表明,p66蛋白主要分布在线粒体分布活跃的区域。细胞免疫荧光结果显示,成熟前劣质和成熟后老化卵母细胞中p66Shc蛋白表达量也分别显著(P<0.05)上调p66Shc蛋白的表达并促使p66Shc由胞质向细胞核定位。【结论】p66Shc基因在劣质和老化的绵羊卵母细胞中呈现高水平的表达,H_2O_2诱导的氧化应激显著上调p66Shc蛋白的表达并影响其亚细胞定位。总之,绵羊卵母细胞中p66Shc表达上调影响了胞质的氧化还原稳态。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵晓娥 武浩 王勇胜 刘凤军 鲁进 张涌
探讨了显微操作条件的改善对山羊卵母细胞胞质内显微受精(ICSI)的影响。结果表明,将精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度从10%(10g/L)降低到8%和5%后,ICSI胚的卵裂率差异不显著,但正常卵裂率、桑葚胚率和囊胚率随PVP浓度的下降而上升;PVP浓度为5%和10%时,正常卵裂率分别为69.6%和58.5%(P<0.05),桑葚胚率分别为45.6%和35.2%(P<0.05),囊胚率分别为26.9%和16.9%(P<0.05),表明含5%PVP的精子操作液更有利于ICSI胚的发育。显微注射时将卵母细胞第一极体置于相当于时钟6点的位置与12点位置相比,ICSI胚的分裂率没有差异,而正...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
贾振伟 田见晖 安磊 张家新
牛卵母细胞体外成熟是一项重要的繁殖生物技术,但是由于卵母细胞没有经历体内促黄体激素(LH)峰启动前的生长过程及生物事件干扰了胞质成熟,导致体外发育能力低于体内成熟的卵母细胞。卵母细胞成熟过程复杂,涉及细胞核、细胞质及分子成熟。牛卵母细胞体外成熟受多种因素影响,其中包括卵母细胞来源、颗粒细胞与卵母细胞间相互作用及体外培养环境等。迄今为止,为了提高牛卵母细胞的体外发育能力,许多学者模拟卵母细胞体内环境发展了一些新的体外成熟技术,诸如体外延迟自发恢复减数分裂成熟、外源卵母细胞分泌因子促进卵母细胞体外成熟及模拟生理条件下卵母细胞成熟等方法。本文综述了牛卵母细胞成熟过程、影响卵母细胞体外成熟因素及近年来...
关键词：
牛 卵母细胞 体外成熟 技术进展
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