采用蛋白质组学方法,检测了产前注射维生素AD3E(V-AD3E)对围产期奶牛乳蛋白表达的影响.二维凝胶电泳分离了产后第1天和第21天乳蛋白组分,凝胶经染色、酶切、图像采集和斑点比对,与对照(不注射V-AD3E)组第1天乳蛋白图谱相比,注射组第1天乳蛋白图谱上有5个区域的蛋白表达上调,经高效液相色谱串联离子阱质谱对差异表达蛋白进行鉴定,主要为免疫球蛋白G(IgG)和白蛋白.产前注射V-AD3E上调了初乳中的IgG和白蛋白,不仅为饲喂初乳的犊牛提供了更好的免疫保护,而且提高了处于免疫抑制阶段母牛的抗病力.

选择合适的内参基因是利用实时荧光定量PCR准确分析基因相对表达量的先决条件。选择了奶牛乳腺研究中广泛使用的7个候选内参基因,包括GAPDH、ACTB、18S rRNA、RPS9、RPS15、UXT、MYC。奶牛以精粗比不同的2种日粮饲喂,并在产后16 d采集乳腺组织。利用qRT-PCR技术探讨了候选内参基因在围产奶牛乳腺组织中的表达情况,并利用geNorm程序对数据进行分析。结果发现,UXT和RPS9表达稳定,不受日粮精粗比的影响,因此,可作为围产期奶牛乳腺组织基因表达分析中相对合适的内参基因。

α-生育酚转移蛋白(α-tocopherol transfer protein， α-TTP)是一种可以结合维生素E的蛋白，在协助机体转运和调控维生素E含量等方面起到重要作用。维生素E能够影响鱼类垂体中生长和繁殖相关激素的分泌，这是否与α-TTP有关，值得进一步探讨。本实验旨在探究维生素E对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)垂体α-TTP基因表达的影响。在基础饲料中分别添加维生素E (DL-α-生育酚乙酸酯) 0、200、400、800和1 600 mg/kg，对半滑舌鳎成鱼(464.0±2.6) g进行持续60 d的养殖实验；另外，在L-15培养基中添加0、18和54 μmol/L的维生素E，对半滑舌鳎垂体细胞进行为期3 d的体外原代培养实验。分别取垂体组织和垂体原代细胞，克隆α-TTP基因，并通过实时荧光定量PCR分析α-TTP基因相对表达量。实验结果显示，α-TTP基因全长3 964 bp，编码293个氨基酸；α-TTP基因在半滑舌鳎各组织均有表达，其中，在脾脏中表达最高，其次是肾脏，在胃中表达量最低；α-TTP基因表达量随着饲料中维生素E含量的增加而呈先升高后下降的变化趋势，在400 mg/kg组时显著高于其他各组(P

为分析苜蓿素对脂多糖诱导下体外培养奶牛乳腺上皮细胞抗炎和乳蛋白合成相关基因表达的影响,本研究将体外培养的奶牛乳腺上皮细胞分成4组,即基础培养基(对照)和基础培养基中分别加入1μg·m L-1LPS(L)、1μg·m L-1LPS+10μg·m L-1苜蓿素(L+T)和10μg·m L-1苜蓿素(T)。结果显示,1)与对照组相比,L组奶牛乳腺上皮细胞的活性显著下降(P<0.05),而T组则显著升高(P<0.01)。2)L+T组细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于L组(P<0.01),而一氧化氮(NO)

[目的]本文旨在了解瘦素(LEP)对牦牛乳腺上皮细胞(YMEC)中细胞信号转导抑制因子3(SOCS3)和信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)蛋白表达的作用特点及催乳素(PRL)对LEP功能发挥可能产生的影响。[方法]以牦牛乳腺上皮细胞为载体，以添加和不添加催乳素(500 ng·mL~(-1))为前提，用不同剂量瘦素(0、50、100、200、400、800 ng·mL~(-1))作用YMEC 48 h以及添加JAK2/JAK3信号通路阻滞剂AG490作用48 h,采用Western blot技术检测SOCS3和STAT3蛋白的相对表达水平及STAT3蛋白磷酸化水平。[结果]无催乳素时，除50 ng·mL~(-1)瘦素外，其余各剂量均抑制SOCS3蛋白的表达，而各浓度LEP均抑制STAT3蛋白的表达，STAT3蛋白磷酸化水平高于蛋白表达水平。有催乳素时，SOCS3蛋白除了在100 ng·mL~(-1) LEP下被抑制之外，其余各剂量均有促进作用；800 ng·mL~(-1) LEP对STAT3蛋白表达有显著抑制作用，STAT3磷酸化水平除100 ng·mL~(-1)组外，均有所升高。添加AG490之后，SOCS3与STAT3都主要是通过JAK2激活诱导。[结论]高浓度瘦素会抑制SOCS3及STAT3蛋白的表达，瘦素主要通过JAK2/STAT3通路发挥生理功能，而SOCS3是JAK2/STAT3通路的负反馈调节因子；PRL能够缓解高浓度LEP导致的瘦素抵抗作用，并且能促进SOCS3和STAT3蛋白的表达。

为深入了解红螯光壳螯虾组织蛋白酶L基因的表达特性及维生素C对其表达的影响,实验利用RACE-PCR技术及荧光定量PCR技术,从红螯光壳螯虾肝胰腺中克隆得到组织蛋白酶L基因cDNA全长序列,命名为CqCatL(GenBank登录号:KJ913663),同时检测了该基因在红螯光壳螯虾各个组织及添加了不同浓度维生素C的组别中的表达。结果显示,该基因全长1 810 bp,开放阅读框长度为1 026 bp,编码341个氨基酸残基,预测的分子量和等电点(pI)分别为37.63 ku和5.17。同源性分析结果显示,该基因编码的蛋白与其他虾蟹类有较高的相似性,说明组织蛋白酶L基因在甲壳动物具有较高的保守性。组...

为了探讨普安银鲫(Carassius auratus gibelio)卵黄囊期脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase,LPL)和肝脂酶(Hepatic lipase,HL)的表达特点及葡萄糖和维生素C溶液分别浸泡对它们的影响,本研究采用荧光定量PCR技术检测LPL和HL基因在普安银鲫卵黄囊仔鱼发育中的表达情况及m RNA表达水平,并检测了葡萄糖、维生素C对这两种基因m RNA表达量的影响。结果显示,LPL和HL基因在普安银鲫内源营养期、混合营养期和外源营养期均有表达,且LPL和HL m RNA表达量呈上升变化。葡萄糖组LPL和HL m RNA表达量呈上升变化,维生素C组也呈上升变化。...

【目的】硒(Se)能否通过Nod2/MAPK/mTOR途径调控金黄色葡萄球菌诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤,有待于进一步研究。因此本研究将探究硒对金黄色葡萄球菌(S. aureus)感染的奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)Nod2/MAPK/mTORs信号通路中关键蛋白表达的影响,从而为阐明硒的免疫调控机制提供理论依据。【方法】首先将bMECs以106细胞/孔接种于6孔板中,当细胞超过80%的汇合度时,用含2、4和8μmol·L~(-1)浓度硒的培养基替换原来的培养基,继续孵育12 h,然后用PBS洗涤每孔3次,将S. aureus按MOI=1:1的比例加入6孔板中,继续培养0.5 h,然后收集bMECs细胞进行相关蛋白的检测。本试验共分3大组,即对照(Con)组(bMECs)、模型(Mod)组(bMECs+S. aureus)和试验组。其中试验组又分3个亚剂量组,即Low组(bMECs+2μmol·L~(-1) Se+S. aureus)、Mid组(bMECs+4μmol·L~(-1) Se+S. aureus)和Hig组(bMECs+8μmol·L~(-1) Se+S. aureus),每组设3个重复。利用BCA蛋白测定试剂盒对收集的bMECs细胞进行总蛋白提取。应用Western blotting技术检测bMECs中Nod2和RIP2蛋白表达水平及JNK,AKT和mTOR蛋白磷酸化水平。将蛋白样品加到10%的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中,上样量为20μg/孔,之后将蛋白转移到聚偏氟乙烯(PVDF)膜上。将PVDF膜用5 mL 5%脱脂乳阻断2 h,脱脂乳脱脂后用TBST清洗后,分别用5 mL的Nod2、RIP2、JNK、AKT、mTOR和β-actin的一抗孵育过夜,回收一抗。之后在PVDF膜中分别加入5 mL上述蛋白的二抗,室温孵育2 h,回收二抗。PVDF用TBST洗涤5次,最后在暗室条件下进行化学显影。【结果】S. aureus能显著提高bMECs中Nod2和RIP2蛋白表达水平及JNK,AKT和mTOR蛋白磷酸化水平(P<0.01)。在培养基里添加2μmol·L~(-1)的硒可极显著抑制Nod2蛋白的表达(P<0.01),在培养基里添加8μmol·L~(-1)的硒可显著抑制Nod2的表达(P<0.05),而在培养基里添加8μmol·L~(-1)硒可显著抑制RIP2蛋白的表达(P<0.01)。在培养基里添加4μmol·L~(-1)的硒能显著抑制JNK蛋白的磷酸化水平(P<0.05),在培养基里添加8μmol·L~(-1)的硒能显著抑制JNK蛋白的磷酸化水平(P<0.01)。在培养基里添加4μmol·L~(-1)硒可极显著抑制JNK蛋白的磷酸化水平(P<0.01),在培养基里添加8μmol·L~(-1)硒可显著抑制AKT蛋白的磷酸化水平(P<0.01)。在培养基里分别添加4μmol·L~(-1)和8μmol·L~(-1)硒均能显著抑制mTOR蛋白磷酸化水平(P

应用乳酸脱氢酶(LDH)活力测定、透射电镜、免疫组化和Caspase-3活性分析等技术,检测转化生长因子β1(TGF-β1)对奶牛乳腺组织细胞活性、凋亡和HSP70蛋白表达的影响。用10 ng.mL-1TGF-β1处理乳腺组织48 h,分别在不同时间点收集组织和培养液检测各指标,以0 h不加TGF-β1作为对照组。结果显示,随TGF-β1作用时间的延长组织细胞活率逐渐降低,24 h和48 h组显著低于对照组(P

【目的】探讨TGF-β1对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡和HSP70蛋白表达的影响。【方法】TGF-β1作用乳腺上皮细胞不同时间,收集细胞及培养液,应用MTT检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡率、比色法检测LDH活性、琼脂糖凝胶电泳检测DNA完整性、Western bolt技术分析HSP70蛋白的表达量。【结果】1、5、10ng·ml-1的TGF-β1均能抑制乳腺上皮细胞的增殖,且随浓度增加抑制作用加大,呈现剂量依赖性,其中10ng·ml-1TGF-β1组与对照组差异显著(P<0.05);10ng·ml-1TGF-β1作用于乳腺上皮细胞,随着作用时间的延长,细胞凋亡率逐渐升高,其中6、12和24...

[目的]本试验旨在探讨去乙酰化蛋白7(sirtuin 7,SIRT7)对奶牛乳腺上皮细胞(DCMEC)合成乳蛋白、乳脂和乳糖关键基因表达的影响。[方法]以体外原代培养的中国荷斯坦奶牛DCMEC为试验材料,纯化后转染质粒p CDNA3.1-SIRT7,继续培养48或72 h后收集细胞。采用RT-qPCR和Western blot法检测乳蛋白、乳脂和乳糖合成关键基因mRNA和蛋白的表达;通过特异性试剂盒检测胞内和培养基中甘油三脂(TG)含量。[结果]1)乳蛋白:与对照组相比,过表达SIRT7可显著提高αs1-酪蛋白基因(CSN1S1)、β-酪蛋白基因(CSN2)和ETS转录因子基因(ELF5) mRNA水平,促进CSN2蛋白合成,激活雷帕霉素靶蛋白(m TOR)磷酸化; 2)乳脂:与对照组相比,过表达SIRT7可显著提高乳脂合成关键因子过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)、固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1) mRNA和蛋白水平,显著增加细胞内甘油三酯(TG)含量; 3)乳糖:与对照组相比,过表达SIRT7可显著提高乳糖合成关键因子葡萄糖转运蛋白1(GLUT1) mRNA表达。[结论]在体外培养条件下,过表达SIRT7可促进DCMEC中乳蛋白、乳脂和乳糖合成关键基因的表达。

为阐明甲状腺素及胰高血糖素对高温体外培养奶牛乳腺上皮细胞内热休克蛋白(HSPs)mRNA转录和蛋白表达的影响。本试验对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞添加不同浓度的甲状腺素、胰高血糖素,分别于42℃培养12 h。采用RT-qPCR方法检测细胞内HSF-1、HSP27、HSP70和HSP90的mRNA表达丰度,ELISA方法检测HSP27、HSP70和HSP90的蛋白质表达。各浓度的甲状腺素、胰高血糖素均能显著降低高温条件下奶牛乳腺上皮细胞中HSP27、HSP70和HSP90 mRNA表达丰度(P<0.05);各浓度的胰高血糖素能极显著的降低高温条件下HSP27、HSP70和HSP90的蛋白表达(P<...

【目的】围产期奶牛对细菌性疾病的易感性升高。本研究的目的在于探讨Nod-2受体在围产期奶牛中性粒细胞(PMN)中的表达变化及其对PMN细胞呼吸爆发功能的影响,以揭示Nod-2在围产期奶牛免疫机能改变中的作用。【方法】采用RT-PCR法检测围产期和非围产期泌乳奶牛外周PMN细胞中Nod-2 mRNA的表达变化;全血分别用佛波醇酯(PMA)和Nod-2受体特异性配体胞壁酰基二肽MDP刺激,采用流式细胞仪检测PMN呼吸爆发功能。【结果】围产期奶牛PMN细胞Nod-2 mRNA表达量显著低于非围产期奶牛(P<0.05);受PMA刺激后,围产期奶牛PMN呼吸爆发功能显著低于非围产期奶牛(P<0.05);...

为确定酵母铬和二氢吡啶是否能缓解围产期奶牛热应激，将24头体质量和胎次相近的围产期荷斯坦奶牛随机分为3组，饲养于环境温湿指数（THI）高于68的热应激条件下，对照组饲喂基础日粮，酵母铬组和二氢吡啶组饲喂基础日粮的同时饲喂8 g/（头·d）铬含量为1‰的酵母铬和3 g/（头·d）的二氢吡啶，试验周期为40d，观测酵母铬和二氢吡啶对围产期奶牛热应激反应的影响。结果显示：(1)酵母铬组和二氢吡啶组奶牛与对照组奶牛在呼吸频率上无显著差异（P>0.05）。(2)各组奶牛血清中血糖和胆固醇含量在产前第7天与产后第3天均无显著差异。二氢吡啶组奶牛产前第7天血清中甘油三酯含量显著降低（P<0.05）。(3)与对照组比较，酵母铬组和二氢吡啶组产前、产后血清中Na+、K+、Cl-的浓度均无显著差异（P>0.05），各组在产前、产后血清中碱性磷酸酶和肌酸激酶的含量也均未出现显著变化（P>0.05）。(4)酵母铬组、二氢吡啶组与对照组奶牛血清中热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)mRNA表达量没有明显差异（P>0.05）。以上结果表明，热应激条件下，在围产期奶牛日粮中添加8 g/（头·d）铬含量为1‰的酵母铬和3 g/（头·d）二氢吡啶对血液生化指标和HSP70 mRNA表达量均无显著影响，说明日粮中添加8 g/（头·d）铬含量为1‰的酵母铬和3 g/（头·d）二氢吡啶对缓解围产期荷斯坦奶牛热应激无明显效果。

为了探讨普安银鲫（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ ｇｉｂｅｌｉｏ）卵黄囊期脂蛋白脂酶（ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｐａｓｅ，ｌｐｌ）和肝脂酶（ＨｅｐａｔｉＣ ｌｉｐａｓｅ，Ｈｌ）的表达特点及葡萄糖和维生素Ｃ溶液分别浸泡对它们的影响，本研究采用荧光定量ｐＣｒ技术检测ｌｐｌ和Ｈｌ基因在普安银鲫卵黄囊仔鱼发育中的表达情况及ｍｒｎａ表达水平，并检测了葡萄糖、维生素Ｃ对这两种基因ｍｒｎａ表达量的影响。结果显示，ｌｐｌ和Ｈｌ基因在普安银鲫内源营养期、混合营养期和外源营养期均有表达，且ｌｐｌ和Ｈｌ ｍｒｎａ表达量呈上升变化。葡萄糖组ｌｐｌ和Ｈｌ ｍｒｎａ表达量呈上升变化，维生素Ｃ组也呈上升变化。在内源营．．．