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[期刊] 华北农学报
[作者]
曾爱松 冯翠 高兵 宋立晓 严继勇
以20份类型丰富的F1及亲本甘蓝为试材,探讨了不同甘蓝类型、F1及其亲本材料、供体植株的生长温度、供体植株的花期、高温热激时间、NLN培养基pH值等因素对甘蓝小孢子胚胎产量及质量的影响,为建立高效、完善的结球甘蓝小孢子培养技术体系提供依据。结果表明:不同叶球类型与小孢子的产胚率无明显相关性,但不同栽培季节及熟性的甘蓝品种间却存在显著差异,其中春秋类型的早、中熟甘蓝要明显好于晚熟的越冬甘蓝;用产胚能力强与产胚能力弱的材料分别做亲本杂交,所得杂交种的出胚率介于两亲本之间,表明小孢子产胚能力是一种受基因调控的遗传性状;供体植株的生长温度对于结球甘蓝胚状体的产生并无显著影响;从胚胎发生频率及胚胎质量来...
关键词：
结球甘蓝 小孢子培养 技术优化
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
曾爱松 高兵 宋立晓 张云霞 李健绮 严继勇
以6份耐寒结球甘蓝杂交F1为试验材料,研究其胚胎发生过程及胚胎发生的诱导条件,为耐寒甘蓝材料的小孢子培养,以及其他芸薹属小孢子胚胎体系的建立及优化提供理论依据。采用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色方法对小孢子体内和体外的发育及胚胎发生过程、特征进行观察;NLN-13培养基中添加阿拉伯半乳聚糖(Arabinogalactan,AG)和阿拉伯半乳糖蛋白(Arabinogalactan-protein,AGP)对小孢子培养胚胎发生率的影响进行统计分析;小孢子体内正常发育方向是单核小孢子经历2次不对称核分裂后发育成三核成熟花粉,小孢子单核晚期对应的花蕾长度主要集中在3.5~4.5mm;体...
关键词：
耐寒甘蓝 小孢子培养 胚胎发生 发育途径
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
包美丽 付颖 郑鹏婧 冯辉
为解决黄心春结球白菜小孢子胚诱导难的问题,以引自韩国和日本的12个黄心春结球白菜杂交种为试材,对影响小孢子胚发生和发育的因素进行了研究。结果表明:供试品种间小孢子胚发生能力有极显著差异;不同品种对培养基中添加植物生长调节剂的反应不同;发现了花蕾低温密封预处理具有促进小孢子成胚的作用;MS培养基中添加0.1mg.L-1的NAA具有促进小孢子植株生根的作用。在优化培养条件的基础上,建立了针对黄心春结球白菜的游离小孢子高效培养体系,获得了11个黄心春结球白菜杂交种的445株小孢子植株,鉴定出362株双单倍体。
关键词：
大白菜 小孢子培养 胚状体
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
严准 田志宏 孟金陵
甘蓝是一种重要的蔬菜作物，利用小孢子培养方法可以获得纯合的双单倍体，加快甘蓝的育种进程以及提供遗传分析的材料。目前，有关甘蓝小孢子培养国内外报道较少，而且这些研究所用的材料多为结球甘蓝和青花菜等［１，２］，而有关苤蓝的游离小孢子培养还未见报道。根据前...
关键词：
甘蓝 小孢子培养 胚状体
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曾爱松 高兵 宋立晓 张云霞 李健绮 李英 侯喜林 严继勇
游离小孢子培养即小孢子在外界胁迫诱导的条件下,从其配子体发育途径转向孢子体发育途径,诱导小孢子胚胎发生的过程。本研究通过对结球甘蓝小孢子胚胎发生的细胞学观察,为甘蓝游离小孢子培养中的可调控性及相关胚胎发育研究提供理论依据。选用3个在游离小孢子培养中胚胎发生响应有差异的甘蓝杂交种,分别采用醋酸洋红、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)及荧光素双醋酸酯(FDA)3种染色方法,对甘蓝小孢子体内配子体发育、游离小孢子培养中的胚胎发生过程及细胞死亡现象进行了观察。结果表明:小孢子正常发育方向是单核小孢子经历2次不对称核分裂后发育成三核花粉,而单核靠边期小孢子在体外经32.5℃热激胁迫1 d后,小孢...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
余凤群 刘后利 傅丽霞 瞿波
研究了培养基中激素种类和浓度以及蔗糖浓度对甘蓝型油菜小胚状体增大和形态的影响。在NLN培养基中，分别附加2，4-D、IAA、6－BA、Zt和GA3对小胚状体的进一步增大作用不大，用不含激素的NLN培养基效果最好。蔗糖浓度对小胚状体生长和发育影响显著，挽救球形、心形和畸形小胚，用含13％蔗糖和NLN培养基效果最佳，挽救鱼雷形小胚，蔗糖浓度可降至2％～8％。
关键词：
甘蓝型油菜 小孢子培养 胚状体
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李浩杰 蒲晓斌 张锦芳 张德发 夏凊 石化娟 蒋俊 蒋梁材
本试验对甘蓝型油菜新胞质不育恢复系(NER)进行游离小孢子培养,对小孢子培养的影响因素作了初步研究,结果表明:不同遗传背景下的甘蓝型油菜NEA不育胞质恢复系(NER)胚产量差异显著,即表明在相同的试验条件下基因型的差异是造成胚产量差异的重要原因。提高小孢子胚发生能力试验表明:在诱导培养基上添加适当的6-BA和NAA有利于小孢子胚的发生;固液双层培养优于液体单层培养;在诱导培养基中添加秋水仙碱加倍处理小孢子胚产量与对照差异不明显。在诱导直接成苗前对子叶型胚进行12h/12h弱光照1~2 d、在生根培养基中添加一定浓度的NAA等处理能提高小孢子胚成苗率。建立了一套新胞质不育材料的小孢子培养优化体系...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
祁魏峥 颉建明 郁继华 康俊根
对１０８个甘蓝品种进行游离小孢子培养，计算出胚率，分析表型与出胚难易的关系。经流式细胞仪对其再生植株进行倍性鉴定，计算自然加倍率。以流式细胞仪的结果为基准对再生植株叶片气孔保卫细胞周围叶绿体数目，保卫细胞长、宽以及周长规律进行研究。结果表明：具有圆球、早熟、春甘蓝３个特性的甘蓝品种易出胚，而扁球、中熟、晚熟以及越冬甘蓝不易出胚；再生植株的自然加倍率会因基因型的不同而有较大差异；不同倍性的再生植株叶片保卫细胞周围叶绿体平均个数所得规律为：单倍体６～９个，二倍体９～１２个，四倍体１２～２３个，且随着倍性的增加，叶绿体个数分布范围更加广泛。保卫细胞长度变化范围为：单倍体１８～２３μｍ，二倍体２５～３．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈敏敏 侯喜林
为了筛选较易再生的不结球白菜品种,为转基因工作建立良好的再生体系,以暑绿、苏州青、亮白叶和矮抗5号为材料,研究了基因型、外植体类型以及不同的激素配比对再生频率的影响。结果表明:不同品种中,暑绿的再生频率最高。不同外植体类型中,子叶-子叶柄再生频率最高。种子发芽培养基中添加苯基噻二唑基脲(TDZ)使幼苗生长健壮,利于外植体分化,不定芽分化率均在60.00%以上,子叶-子叶柄在培养基MN+0.5 mg.L-1TDZ+0.5 mg.L-1NAA+7.5 mg.L-1AgNO3中再生频率最高,达到80.00%,表明TDZ在诱导器官的发生中有较强的持续效应。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
余凤群 刘后利
以甘蓝型油菜品种（系）和杂种Ｆ１代为材料，研究了供试材料和培养基成分对小孢子胚产量（以每花药产生的胚状体个数表示）的影响。不同材料胚产量有显著差异，变化范围为０～１２．８６。通常，杂种Ｆ１代胚产量较品种（系）高。同一材料不同单株间胚产量亦有差异。培养基成分中，大量元素以ＮＬＮ为最佳，１／２ＭＳ和１／２Ｂ５培养基上亦可形成少量胚状体；培养基的ｐＨ以５．８为佳，提高ｐＨ至６．８和７．８，显著不利于胚状体形成和发育；不同材料要求的蔗糖浓度、激素种类和浓度也不同。
关键词：
甘蓝型油菜 小孢子培养 胚状体
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
储玉凡 陈野 付文苑 姚培杰 张志琪 兰凯 余长春 万正杰
为探究不同芥菜基因型和培养条件对小孢子培养效果的影响，建立适合芥菜小孢子培养及染色体加倍的最佳方案，对芥菜8个不同变种的34份自交系进行了小孢子培养，比较不同热激时间、活性炭浓度、小孢子密度对出胚率的影响。结果显示，基因型对芥菜小孢子培养成功与否影响较大，34份材料中11份材料成功培养出胚状体；不同材料间出胚率差异较大，其中，大头菜出胚率最高，可达23.85胚/蕾；芥菜小孢子出胚最佳条件为：32℃热激1～2 d，培养基含活性炭3～5 g/L，小孢子密度为1.5×10~5～2.0×10~5个/mL。染色体加倍试验结果显示，1 g/L秋水仙素溶液浸泡茎尖1 h的处理加倍效率高，形成嵌合体少，可应用于芥菜染色体的加倍。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
刘勇 刘红雨 曾正宜
以网室生长的油菜为供体材料，对１０个甘蓝型油菜不同品种（系）的游离小孢子进行了离体胚状体诱导和培养条件研究。结果表明，分期播种对胚状体形成无明显不利影响，并能延长供花期；生长在田间的植株花蕾比温室内生长植株的单核期花蕾的外部形态短０．５～１．０ｍｍ。在相同条件下，杂交品种和组培品系来源的小孢子诱导成胚率最好；前期低温冷冻处理能促进小孢子分化和提高品种的成胚率。小孢子悬浮阶段加入草酸能筛选出抗（耐）菌核病材料
关键词：
甘蓝型油菜,小孢子培养,胚状体诱导
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘志文 刘雪平 傅廷栋 涂金星
以大田甘蓝型油菜为材料,对小孢子培养不同取样时间和不同开花时期接种的胚状体诱导频率和不同加倍方法的加倍效率进行了研究,结果表明:大田甘蓝型油菜小孢子培养最佳取样时间是上午7∶00时,此时取样出胚率达4.31枚/蕾;接种最佳开花时期是单株开第一朵花后6~20d的2周时间,此开花时期接种出胚率为4.08~4.34枚/蕾。在不同加倍方法中,以50mg/L秋水仙碱处理游离小孢子48h为最佳,并且能够获得76.47%最高加倍效率。
关键词：
甘蓝型油菜 小孢子培养 胚状体 加倍
[期刊] 华北农学报
[作者]
米哲 李云昌 梅德圣 李英德 徐育松 陈玉峰 胡琼
对不同年份、不同地点种植的油菜育种材料进行小孢子产胚率鉴定,并以11种不同基因型的甘蓝型油菜品系为供体材料,在武汉田间,分别于初花期和盛花期分离培养小孢子,研究基因型、生态条件、开花时间对小孢子产胚率的影响及秋水仙碱处理的加倍效果,通过采用流式细胞仪测定小孢子再生苗的DNA含量鉴定其倍性,并种植验证。结果表明:相同基因型在不同生态条件下种植及不同基因型间产胚率差异很大,西宁春播种植产胚率显著高于武汉秋播种植;大田条件下,初花期分离的小孢子产胚率显著高于盛花期。不同基因型油菜小孢子再生苗的自然加倍率也有差异,变异幅度为8.62%～20.88%。用50 mg/L秋水仙碱处理小孢子可以显著增加二倍体...
关键词：
油菜 小孢子培养 DNA含量 倍性鉴定
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曾爱松 李家仪 李英 宋立晓 侯喜林 严继勇
[目的]本文旨在探讨结球甘蓝游离小孢子培养早期体胚发生的分子机制,分析游离小孢子在热激处理下的基因表达谱。[方法]将易出胚结球甘蓝高代自交系611单核靠边期小孢子分别在体外32.5℃培养1 d(热激处理,E2)、体内正常生长1 d(对照组1,E3)及体外25℃培养1 d(对照组2,E5),利用转录组测序技术(RNA-Seq)对3个处理的小孢子文库进行差异基因表达谱分析,并鉴定热激处理下早期体胚发生的响应基因。[结果]将3个处理的小孢子Uni Gene表达量依次进行两两相比,即E2 vs E3、E2 vs E5以及E3 vs E5,分别鉴定出2 506、1 073和3 322个差异表达基因。基因本体(gene ontology,GO)聚类分析表明,热激处理下的差异表达基因显著富集到细胞组分中的细胞部件、细胞及细胞器;在分子功能中,这些基因在结合、催化活性及核酸结合转录因子活性中的比例最高;在生物过程中的细胞过程、代谢过程及刺激反应等类别中的比例也最高。京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路分析显示,热激处理下的差异表达基因显著富集到植物激素信号转导、植物病原互作、淀粉和糖代谢、抗坏血酸代谢、苯丙氨酸代谢以及多糖降解等途径。进一步对抗坏血酸代谢途径相关基因进行分析,抗坏血酸过氧化物酶基因APX1和APX2,半乳糖脱氢酶基因Gal DH以及乙醛脱氢酶基因AD在体外32.5℃培养1 d后均显著上调表达。[结论]通过转录组学方法揭示了结球甘蓝游离小孢子在热激处理下基因组的表达变化,鉴定了可能与早期体胚发生相关的抗坏血酸代谢途径基因,为进一步研究甘蓝小孢子体胚发生的分子机制奠定了基础。
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