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[期刊] 水产学报
[作者]
李丹彤 张泽虎 赵元凤 钟莉 张泽宇 王冬梅 李伟
将海洋红藻-绒线藻(Dasya villosa)经磷酸盐缓冲液抽提,20%~75%硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-200分子筛层析,得到绒线藻凝集素(DVL)。用Sephadex G-200分子筛层析测得其分子量为547ku。该凝集素凝集兔红细胞的作用不被D-果糖、D-半乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露聚糖、γ-球蛋白所抑制,仅被牛甲状腺球蛋白所抑制,最小抑制浓度为96.88mg.L-1。2价金属离子Ca2+、Mg2+及EDTA对该凝集素凝集活性没有影响。其凝集活性在25~80℃保持不变为28,90~100℃加热30min,活力为27,仍保留50%的活性,说明其具有较强的耐热性。经t-检验,注射...
[期刊] 水产学报
[作者]
李丹彤 宋亮 钟莉 常亚青
为探寻刺参药用价值,探索其抑制肿瘤细胞增殖,促进淋巴细胞转化等生物功能。将刺参(Apotichopusjaponicus)经磷酸盐缓冲溶液抽提,20%~75%硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-200分子筛层析,得到刺参凝集素(AJL)。用Sephadex G-200分子筛层析测得其分子量为85 652Da。AJL的含糖量为20.9%。该凝集素可以凝集人的A、B、AB、O型红细胞,且对A型红细胞凝集作用最强,在对兔、鼠、鲤鱼、鸡和人的A、B、AB、O红细胞的凝集作用中,对鸡的凝集作用最强。该凝集素凝集兔红细胞的作用不被D-果糖、D-甘露糖、γ-球蛋白、葡萄糖、蔗糖、甘露聚糖所抑制,而被牛甲状...
关键词:
刺参 凝集素 纯化 性质
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李丹彤 崔铁军 马国庆 汤霞 李熙宜
角叉菜( Chondrus ocellatus)经磷酸盐缓冲液抽提, 20%~ 75%硫酸锭分级沉淀,牛甲状腺球蛋白一Sepharose 4B亲和层析,可以从红藻角叉菜中纯化出角叉菜凝集素(COL),在 PAGE上显示单一蛋白染色带,在等电聚焦电泳上显示单一蛋白染色带,其PI为8.30。纯化后的COL的最大紫外吸收峰在285 nm,用SePhadexG-200分子筛层析测得其分子量为 4 252。该凝集素可以凝集人的A、B、AB、O型红细胞,且凝集活性相同,在对人、兔、鲤、鲫的红细胞的凝集作用中,对兔红细胞的凝集作用最强,且不被己测试的D-半乳糖、D-果糖、D-甘露糖、葡萄糖、蔗糖、甘露聚糖、...
关键词:
角叉菜 凝集素 纯化 理化性质
[期刊] 中国水产科学
[作者]
宋玉娟 崔铁军 李丹彤 刘扬
海萝(Gloiopeltisfurcata)经PBS缓冲液抽提、硫酸铵分级、DEAE 52纤维素离子交换层析和SephadexG 200分子筛层析,从中纯化出海萝凝集素(GFL),在PAGE和等电聚焦电泳上各显示单一蛋白染色带,其等电点为9 0。用SephadexG 200分子筛层析测得其相对分子质量为8318。海萝凝集素除对人血型红细胞无凝集活性外,对单胞藻及兔、鲤、鲫的红细胞均表现出一定程度的凝集活性,对兔红细胞的凝集活性最强,且不被已测试的D-果糖、D-半乳糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖所抑制,而被D-甘露糖、牛甲状腺球蛋白、鸡卵白蛋白、γ-球蛋抑制。该凝集素在pH4 0~10 2均有活性,而在...
关键词:
海萝 凝集素 纯化 理化性质
[期刊] 水产学报
[作者]
李丹彤 谢广成 丁文勇 王秀利 刘洋 徐文琦 张永攀
为进一步研究刺参甘露糖结合凝集素(AJ-MBL)的功能及提高刺参自身免疫力,对AJ-MBL基因的CDS区进行原核表达、纯化并初步鉴定其生物学活性。采用RT-PCR法扩增AJ-MBL基因编码区,经酶切鉴定、序列分析后,将其CDS区498 bp片段克隆至原核表达载体pET28a中,得到重组质粒pET-AJ-MBL。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并经IPTG诱导表达出分子量约17 ku的融合蛋白。该蛋白以包涵体形式存在,用Ni2+离子亲和柱纯化。结果显示,获得高表达量的重组纯化蛋白。纯化的17 ku AJ-MBL进行红细胞凝集试验检测其生物学活性。凝集试验结果显示,AJ-MBL凝集...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘雪兰 余为一 李槿年
本研究建立鼠红细胞膜吸附法纯化中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)血清凝集素的方法,并与硫酸铵盐析、凝胶过滤层析和离子交换层析等其他提取方法进行比较。实验结果表明,中华绒螯蟹血清经鼠红细胞膜吸附后,再由EDTA把结合的凝集素从膜上解离,可以获得纯化的高活性凝集素。该纯化物在PAGE中出现2个清晰的区带,一个是大分子的b带,另一个则是由3种大小相近的小分子组成的c区带;在SDS-PAGE中,则显示出3个分子量接近、约为100 000的条带。经50%饱和硫酸铵盐析或用Sephadex G200凝胶过滤层析法可浓缩但不能纯化中华绒螯蟹血清凝集素。经DEAE-Sephadex A50离子...
关键词:
中华绒螯蟹 凝集素 鼠红细胞膜吸附 纯化
[期刊] 水产学报
[作者]
李丹彤 谢广成 李洪福 邢殿楼 王斌 刘远 姜峰 胡昕江
研究刺参基础饲料中添加不同剂量裙带菜凝集素和萱藻凝集素对刺参酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LSZ)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。在基础饲料中分别添加0.58%、1.16%、2.32%裙带菜凝集素(质量分数);0.32%、0.64%、1.28%萱藻凝集素,以基础饲料饲组为对照,于投喂后第4、8、13、17天检测ACP、AKP、LSZ、CAT活性。结果显示,投喂17 d内,各实验组ACP活性随时间和剂量增加持续升高,ACP活性均高于对照组;LSZ活性则随时间延长持续升高,但萱藻凝集素各组活性在第17天有所下降,且LSZ活性与凝集素添加量成正比关系;裙带菜凝集素组CAT活性...
关键词:
刺参 裙带菜凝集素 萱藻凝集素 免疫酶
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
李伟 熊川男 王建华 郑永唐 金桥 佟长青 曲敏 刘洪伟 汪秋宽
分离提取海洋无脊椎动物贻贝(Crenomytilus grayanus)凝集素,考察其抗HIV活性。采用半乳糖-Sepharose 6B亲和层析和Sephacryl S-200层析分离提取贻贝凝集素(Crenomytilus grayanus lectin,CGL),以光镜检查合胞体抑制试验,以ELSA测定HIVp24抗原表达水平。从海洋无脊椎动物贻贝中分离出的凝集素(CGL),为N-乙酰半乳糖胺/半乳糖(GalNAc/Gal)特异性的凝集素。CGL在27.88mg.L-1浓度时,对HIV诱导细胞病变的抑制达50%;在45.70mg.L-1时,对HIV-1复制的抑制达50%;同时在35.12m...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘雪兰 余为一 李槿年
将中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)血清凝集素与动物(鳖、鲫鱼、鸡、鸽、兔、鼠、人A、B、O型)红细胞和细菌(八叠球菌、嗜水气单胞菌、短小芽孢杆菌、大肠杆菌、葡萄球菌、假单胞菌和拟态弧菌)进行凝集反应。结果表明,中华绒螯蟹血清凝集素有明显的选择性,与小白鼠红细胞和八叠球菌的凝集活性最高(P0.05)。10 mmol/L的CaCl2和300 mmol/L的NaCl不影响凝集素与小鼠红细胞和细菌的凝集活性,600 mmol/L的NaCl可降低其活性。pH 5~9不影响蟹凝集素活性,但400 mmol/L的ED...
关键词:
中华绒螯蟹 血清凝集素 凝集价
[期刊] 水产学报
[作者]
彭其胜 郭文场 杨振国 王玉平 田相利
1999年8月,运用血凝活性测定法分别检测中国对虾血淋巴凝集素、血淋巴液、血细胞、肌肉、肠、肝胰腺和甲壳的血凝活力,并运用■啶橙血细胞吞噬测定法检测血细胞的吞噬活力,同时测定了经注射中国对虾副粘病毒提纯液后血淋巴凝集素血凝活力及血淋巴液抗菌活力、酚氧化酶活力、溶菌活力。结果表明,血淋巴凝集素主要分布在血淋巴液和血细胞中;该凝集素对人(A、B、O型)、鸡和兔红细胞及其醛化红细胞的凝集具有一定专一性;对血细胞吞噬异物具有促进功能;注射副粘病毒提纯液后,血淋巴凝集素凝集活力变化和血淋巴液抗菌活力、酚氧化酶活力。溶菌活力变化相一致。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杨刚柱 未金花 吕迅 程水红 梁静南 李学兵
为了构建简单高效的病原微生物分离纯化方法,首先制备了双金属磁性纳米粒子Au-Fe3O4,然后在Au组份的表面修饰了可特异性结合凝集素及病原微生物的的乳糖基(Lac),获得了糖基化磁性纳米粒子Lac-Au-Fe3O4,并进一步研究了Lac-Au-Fe3O4与蓖麻凝集素(RCA120)之间的反应及其对RCA120分离效率的影响,结果表明:1)Au-Fe3O4纳米粒子尺寸均一(8+14nm),呈哑铃状,Au和Fe3O4组份分别位于哑铃的两端;2)Lac-Au-Fe3O4具有良好的水溶性和磁学性质,在30min之内可特异性地与RCA120充分结合;3)在外加磁场作用下,Lac-Au-Fe3O4对水溶液...
关键词:
磁性纳米粒子 糖基化 凝集素 病原微生物
[期刊] 水产学报
[作者]
黄越倩 张佩 钟名其 姚德福 陈洁辉 章跃陵
既往研究表明,对虾血蓝蛋白(hemocyanin, HMC)是一种具有抗病毒、抗菌等多种免疫学活性的免疫球蛋白超家族(immunoglobulin superfamily, IgSF)分子,但迄今为止,其功能多样性的分子基础尚不是很清楚。本研究以凡纳滨对虾HMC为研究对象,采用亲和层析、凝集素层析技术获得4种HMC成分:A-HMCs、A-HMCl、AL-HMCs和AL-HMCl,发现其对不同细菌的凝集活性存在较大差异。其中,AL-HMCs和AL-HMCl对大肠杆菌和副溶血弧菌的凝集活性明显强于A-HMCs和A-HMCl,前者约为后者的2~32倍。继而,通过双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE)和凝集素印迹技术对不同HMC的蛋白质组成和糖基化修饰水平进行对比分析。结果显示,4种HMC在2-DE图谱上表现为6~7个差异明显的蛋白质点,且与伴刀豆凝集素(concanavalin A, ConA)、花生凝集素(peanut agglutinin, PNA)、荆豆凝集素(ulex europaeus agglutinin, UEA)和双花扁豆凝集素(dolichos bifows agglutinin, DBA)等4种凝集素的识别存在显著性差异。其中,A-HMCl 6个蛋白点均可识别4种凝集素,而A-HMCs 6个蛋白点中仅有4、3个点分别与UEA、DBA反应呈阳性,AL-HMCs和AL-HMCl可以与UEA、PNA特异性显色的点分别为其总蛋白点的3/7、2/6。由此推测,对虾血蓝蛋白功能多样性的分子基础可能与其蛋白质组成和糖基化修饰水平的多样性密切相关。
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
肖静 刘跟成
用人的A、B、O、AB型血和兔、鸡、蛙的共7种血细胞检测4种软体动物凝集素粗制品的凝集活性。结果表明,除缢蛏对人AB型血红细胞,毛蚶对人B型血红细胞不表现凝集活性之外,不同来源的凝集素粗提物对供试血红细胞均有良好的凝集性能。兔血红细胞对各类凝集素最敏感。大多凝集素的pH适应性较广泛。不同凝集素热稳定性不同,缢蛏、毛蚶耐热性较好,80℃处理10min仍能凝集兔血红细胞。不同的糖、金属离子对凝集活性的影响不同,0·02mol/LEDTA可抑制全部凝集素的生物活性。
关键词:
软体动物 凝集素 粗提物 凝集活性
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
姚东瑞 盘赛昆 周鸣谦 葛荣荣
采用DEAE-SepharoseFF离子交换层析和Superdex20010/300GL凝胶过滤层析技术,从泥鳅血清中分离出两种天然凝集素MSL-I和MSL-Ⅱ。SDS-PAGE检测表明,MSL-I及MSL-Ⅱ均显示两条蛋白质着色带。采用凝胶过滤法测得MSL-I相对分子质量为25000,MSL-Ⅱ相对分子质量为82000。根据凝胶过滤测定及SDS-PAGE检测结果可知,MSL-Ⅱ由相对分子质量分别为29000和13600两种亚基组成,MSL-I的亚基组成有待进一步研究。MSL-Ⅱ能结合多种糖,其中对乳糖的亲和力最强。MSL-Ⅱ具有较强的热稳定性,在pH4~11范围内具有凝集活性,最适pH为6~...
关键词:
泥鳅 血清 凝集素 分离纯化
[期刊] 淡水渔业
[作者]
张黎 袁媛 王娟 顾继锐 吴江 谢显连 徐恒
从南方鲇(Silurusmeridionalis)血清分离到一种天然的凝集素分子,能够凝集多种不同的抗原物质,其组成成分为糖蛋白,具有耐热和耐酸碱性,对β-巯基乙醇敏感。凝集反应受温度、离子强度以及时间等因素的影响。经糖的专一性抑制实验显示,蔗糖和半乳糖对凝集反应有抑制作用,说明这2种糖分子是凝集素在识别和凝集过程中起一定作用的糖分子。
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